Deze video toont het gebruik van In vivo Bioluminescentie beeldvorming om de immuunrespons studie na implantatie van Engineered hartweefsel (EHT) bij ratten.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Bioluminescentie Imaging voor beoordeling van immuunreacties na implantatie van Engineered hartweefsel (EHT)
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Verschillende technieken van cardiale tissue engineering zijn gevoerd in de afgelopen decennia ook steigers strategieën door middel van een native of bioartificial scaffold materialen, entrapment van cardiale myocyten in hydrogels, zoals fibrine en collageen en stapelen van myocyte monolagen 1. Deze concepten zijn gericht op herstel van gecompromitteerde cardiale functie (bijvoorbeeld na een myocardinfarct) of als experimentele modellen (zoals voorspellende toxicologie en stof screening of ziekte modellering). Nauwkeurige controle van overleving van de cel na implantatie van technisch hartweefsel (EHT) is nu mogelijk met behulp van in-vivo bioluminescentie imaging (BLI) technieken 2. Hier beschrijven we de generatie van fibrine-gebaseerde EHT van een transgene rat stam met alomtegenwoordige uitdrukking van vuurvlieg luciferase (ROSA / luciferase-LEW Tg, 3). Implantatie wordt uitgevoerd in de grotere omentum van de verschillende stammen tot rat immuunrespons van het recipiënte organisme volgende EHT implantatie te beoordelen. Vergelijking van de resultaten gegenereerd door BLI en de Enzyme Linked Immuno Spot Techniek (ELISPOT) bevestigen de bruikbaarheid van BLI voor de beoordeling van immuunreacties.
Protocol
1. EHT Generation en Cultuur voorwaarden
De vervaardiging van fibrine-based EHT werd uitgevoerd zoals beschreven elders 4. Kortom, in fibrine-based EHT voor implantatie doeleinden te genereren, was een master mix bereid die cellen geïsoleerd uit neonatale ROSA / luciferase-LEW transgene rat harten, runderen fibrinogeen en Matrigel. Agarose gietvormen werden opgesteld op basis van Teflon spacers geplaatst in 6-well cultuur gerechten. Na het stollen van agarose, waren spacers verwijderd en siliconen post racks werden geplaatst op de cultuur gerechten met berichten tot in de mallen. Voor het genereren van EHT, was de mastermix kort ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Voor klinische implementatie van EHT technologie voor cardiale reparatie, fundamentele vragen zoals de immunogeniciteit van zowel cellulaire en matrix componenten of transplantaat overleving na implantatie moeten worden beoordeeld in experimentele modellen. In-vivo bioluminescentie beeldvorming vormt een nuttige nieuwe techniek voor het toezicht op overleving van de cel na transplantatie . Wij hebben met succes gegenereerd fibrine-based EHT met luciferase positieve (luc +) hart cellen door aanpassing van een va.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi en Arne Hansen kreeg financiële steun van de Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1) Deutsche. Het werk werd ook ondersteund door subsidies van de Europese Unie om Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart en Angioscaff).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
- LEW-Tg (Gt (ROSA) 26Sor-luc) 11Jmsk ratten (NBPR rat nummer 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Runderen fibrinogeen (voorraad-oplossing: 200 mg / ml aprotinine plus 5 ug / ml fibrinogeen in NaCl 0,9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Paard serum (Gibco 26050)
- Penicilline / streptomycine (Gibco 15140)
- Insuline (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinine (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferine (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISPOT) assay platen (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
Referenties
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Tr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
