Quantitative Analyse von Krebs Metastasen mit einem Vogelembryo Modell

Zusammenfassung

Mit quantitative PCR, zeigen wir, wie die etablierten chick CAM-Modell verwendet werden, um quantitativ zu analysieren die Metastasierung von humanen Tumorzellen zu entfernten Organen sein.

Zusammenfassung

Während Metastasierung von Krebszellen aus dem Primärtumor zu verbreiten, in das umgebende Gewebe einzudringen, und die Ausbreitung auf entfernte Organe. Metastasierung ist ein komplexer Prozess, der viele Gewebetypen, span variable Zeiträume betreffen, können und treten oft tief in Organen, wodurch es schwierig zu untersuchen und zu quantifizieren. Darüber hinaus ist die Wirksamkeit des metastatischen Prozesses von mehreren Schritten in den metastatischen Kaskade macht es schwierig, den Beitrag eines einzelnen Aspekt der Tumorzelle Verhalten zu bewerten beeinflusst. Als Folge davon sind Metastasen Assays häufig in Versuchstieren durchgeführt, um eine unbedingt realistischen Kontext, in dem Metastasen Studie zur Verfügung. Leider sind diese Modelle durch ihre komplexen Physiologie kompliziert. Der Hühnerembryo ist ein einzigartiges In-vivo-Modell, das viele Beschränkungen überwindet, um das Studium Metastasierung, wegen der Erreichbarkeit der Chorioallantoismembran (CAM), einem gut durchbluteten extra-embryonalen Gewebe unter der Eierschale, die empfänglich für die xenografting von Tumorzellen befindet (Abbildung 1). Da darüber hinaus die Hühnerembryo natürlich immundefizienten ist die CAM leicht unterstützt die Transplantation von Normal-und Tumorgewebe. Am wichtigsten ist, die aviäre CAM erfolgreich unterstützt die meisten Krebszellen Eigenschaften wie Wachstum, Invasion, Angiogenese und Umbau der Mikroumgebung. Dies macht das Modell besonders nützlich für die Untersuchung der Signalwege, die zu Krebs Metastasen führen und die Reaktion von metastasierendem Krebs, neue potenzielle Therapeutika vorherzusagen. Der Nachweis von disseminierten Zellen durch artspezifische Alu-PCR ermöglicht die quantitative Erfassung Metastasen in Organen, die durch so wenig wie 25 Zellen besiedelt sind. Mit dem Human Epidermoidkarzinom Zelllinie (HEp3) verwenden wir dieses Modell zur spontanen Metastasierung von Krebszellen in entfernte Organe, wie das Küken Leber und Lunge zu analysieren. Zusätzlich hatte der Alu-PCR-Protokoll zeigen wir die Empfindlichkeit und Reproduzierbarkeit des Tests als Instrument zur Analyse und Quantifizierung intravasation, Verhaftung, Extravasation und Kolonisierung als einzelne Elemente der Metastasierung.

Protokoll

1. Vorbereitung der Eier für xenografting (spontane Metastasierung)

1. Frisch gelegt befruchtete Hühnereier sind in einer sich drehenden Inkubator für 10 Tage bei 100 ° F und 60% Luftfeuchtigkeit inkubiert. Die Eier gedreht werden viermal pro Stunde.
2. Auf Entwicklungsstörungen Tag 10 werden die Eier auf ihrer Seite in einem Ei Rack platziert. Ein Schwanenhals-Lampe oder einem anderen geeigneten Lichtquelle dient zur Kerze die Eier durch leuchtendes Licht in der Eierschale am stumpfen Ende des Eis, wo die airsac befindet.
3. Die chorioallantoic Vene liegt und markiert. Diese Ader ist an der Spitze der Eierschale, wo es ist Knotenpunkt mehrerer ....

Diskussion

Das Küken CAM ist seit Jahrzehnten als Modellsystem, um verschiedene Aspekte der Tumorbiologie und metastatischen Progression Studie verwendet. Prinzip Auswertung des metastasierten Fähigkeiten haben in diesem Modell wurde durch eine Vielzahl von Gruppen, einschließlich der Analyse der Vegetationsruhe durchgeführt (. Aguirre Ghiso et al, 1999; Ossowski und Reich, 1983), Gewebe-Remodeling (Deryugina et al, 2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999) und Metastasierung (Zijlstra et al, 2008;. Zi.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Name des Reagenzes	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare (optional)
1X Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbeccos Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (D-PBS) (1x), flüssig	Invitrogen	14190250	pH-Wert 7,4
Trypsin, 0,05% (1X) mit EDTA 4NA, flüssig	Invitrogen	25300054
Sportsman Hatcher	Berry Hill	1550HA	Diese Inkubatoren sind einige der am leichtesten verfügbar. Allerdings wird das Video zeigen verschiedene Geräte.
Sportsman Inkubator	Berry Hill	1502EA
Dremel Dremel	Dremel
Dremel Trennscheiben nicht. 36	Dremel	409
Tragbare Pipette Aid	Fischer	1368115E
Wattestäbchen Applikatoren	Fischer	23-400-001)
Befruchteten Eier	Verschiedene		Viele verschiedene Anbieter genutzt werden kann. Die Eier sollten etwa 35-55 Gramm betragen. Die Hühner legt, dass sie sollte zwischen 36 und 55 Wochen alt sein.
Hämozytometer	Hausser Scientific, VWR	15170-090
LWL-Mikroskopbeleuchtung	Amscope	HL250-AY	150W
25-Gauge-Nadel
Sybr Grüne Extract-N-Amp Tissue PCR Kit	Sigma-Aldrich	XNATRG