Описанная здесь техника, в которой липополисахарида вводят в кормящих молочных желез мышей через соску, чтобы имитировать мастит, состояние обычно вызывается бактериальной инфекцией. Липополисахаридом инъекций приводит к увеличению ядерного фактора каппа В (NF-kB) сигнализации, визуализировали через биолюминесцентного изображений NF-kB мыши люциферазы репортера.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Внутрипротоковые инъекции ЛПС, как мышь Модель Мастит: Сигнализация визуализированы с помощью NF-kB Reporter Трансгенные
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Животные модели заболеваний человека являются необходимыми для того, чтобы строго изучать стадии прогрессирования заболевания и связанные с ними механизмы, и в конечном итоге, как доклинических моделях для проверки вмешательства. В этих методов, мы описываем технику, в которой липополисахарида (ЛПС) вводят в кормящих молочных желез мышей через соску, эффективного моделирования мастит, или воспаление, железы. Это результаты моделирования инфекции к увеличению ядерного фактора каппа В (NF-kB) сигнализации, а визуализируется через биолюминесцентного изображений NF-kB мыши репортер люциферазы 1.
Наша конечная цель в развитии этих методов является изучение воспаления, связанные с маститом в кормящие железы, которые часто включают покраснение, отек и инфильтрация иммунных 2,3. Таким образом, мы четко осознаем, что разрез или любой тип повреждения кожи, сосков, или железы с целью введения ЛПС можетНе быть использованы в наших методов, поскольку подход, вероятно, смешал чтения из воспаление. Мы также желаемый прямым методом, который не требует специально рисованной пипетки или использование микроманипуляторами, чтобы держать эти специализированные инструменты на месте. Таким образом, мы намерены использовать имеющиеся в продаже инсулиновый шприц и впрыснуть агента в молочных проток нетронутыми соска. Этот метод был успешным и позволил нам изучить воспаление, связанное с введением ЛПС без каких-либо дополнительных эффектов накладывается процесс инъекции. Кроме того, этот метод также используется NF-kB люциферазы репортера трансгенные мыши и биолюминесцентного технологий визуализации визуально и количественно показать увеличилась NF-kB сигнализации в LPS впрыском железы 4.
Эти методы представляют интерес для исследователей из многих дисциплин, которые хотят моделью болезни в течение кормящих молочных желез, а в конечном счете, техникаописанные здесь, могут быть использованы для введения ряда веществ, и не ограничивается только ЛПС.
Протокол
Все эксперименты на животных были одобрены Университета Вандербильта Институциональные уходу и использованию животных комитета.
1. Подготовка трансгенных мышей
- Самки мышей, положительный для СУГ (N F-kB-G FP-L uciferase) репортер трансгенов (описанные ранее 1) используются для этой процедуры. Когда женщины по крайней мере 6 недель, спариваются с ними FVB диких мужскому типу. Гарем разведения могут быть использованы (до 4 женщин в клетку с 1 мужчина). (Обратите внимание: FVB мышей штамма были использованы для настоящего исследования Темнее штамм мышей, таких как C57BL6 также может быть использован, но....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы используем трансгенные NF-kB мыши репортер и оптимизированная техника инъекций модель мастит, воспаление ткани молочной железы чаще всего вызвано бактериальной инфекцией. Наиболее важным шагом в этой процедуре внутрипротоковые инъекции себе.
На практике, как правило, очевидны ли внутрипротоковые инъекция была успешной. Инъекции препаратов (ЛПС или PBS) должны чувствовать себя жидкость и не должно быть мало, чтобы никакого сопротивления, как шприц опустел. Наиболее распространенная о.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа финансировалась NIH грант CA113734 присуждена F Yull и Департамент по делам ветеранов (TS Blackwell).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии |
| Липополисахарида кишечной палочки (LPS) | Сигма | L 2880 | серотип 055: B5 |
| PBS | Mediatech, Inc | 46-013-CM | |
| 31 калибровочных инсулиновый шприц | Becton Dickinson | 328438 | Короткие иглы |
| Щипцы | Инструменты Всемирной Precision | 15908 | |
| Пройдя область | Leica | M3Z | |
| Террелл Isoflurane, USP | MINRAD в т.ч. для Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| ИВИС 200 изображений системы | Суппорт (ранее Xenogen) | N / A | |
| Шприц для инъекции люциферин | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5 / 8 |
| D-Luciferin Firefly, моногидрата натриевой соли (Luciferin подложки) | Химии и биологии Biosynth | L-8240 | Развести до 10 мг / мл |
Ссылки
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
