B7-H1 (PD-L1) en de binding aan PD-1 een grote tumor geïnduceerde immunosuppressieve signaal in de tumor micro-omgeving. Een immunohistochemische kleuring techniek om de expressie en lokalisatie van B7-H1 in pancreas adenocarcinoom karakteriseren wordt hier beschreven.
B7-H1/PD-L1, een lid van de B7 familie van immuun-regulerende celoppervlakte-eiwitten, speelt een belangrijke rol in de negatieve regulatie van cel-gemedieerde immuunresponsen door de interactie met de receptor, geprogrammeerde dood 1 (PD -1) 1,2. Overexpressie van B7-H1 door tumorcellen is opgemerkt in een aantal menselijke kankers, waaronder melanoom, glioblastoma en carcinomen van de long, borst, colon, eierstok en niercellen en is aangetoond dat anti-tumor T-aantasting celimmuniteit 3-8.
Onlangs heeft B7-H1 expressie door pancreatische adenocarcinoom weefsels geïdentificeerd als potentiële prognostische marker 9,10. Daarnaast is blokkade van B7-H1 in een muismodel van alvleesklierkanker blijkt een anti-tumor respons 11 produceren. Deze gegevens suggereren het belang van B7-H1 als potentieel therapeutisch doel. Anti-B7-H1 blokkade antilichamen worden dan ook getest in klinische studies voor muldere humane vaste tumoren zoals melanoom en kanker van long, colon, nier, maag en pancreas 12.
Om uiteindelijk kunnen de patiënten die baat hebben bij B7-H1 gerichte therapieën identificeren, is het essentieel om de correlatie tussen expressie en lokalisatie van B7-H1 en patiënt respons op behandeling met B7-H1 blokkade antilichamen te onderzoeken. Onderzoeken van de expressie van B7-H1 in menselijke pancreas adenocarcinoom weefsels door immunohistochemie zal een beter begrip van deze co-remmende signaalmolecuul bijdraagt tot de onderdrukking van antitumor immuniteit in de tumor micro-omgeving. De anti-B7-H1 monoklonale antilichaam (kloon 5H1) ontwikkeld door Chen en medewerkers is aangetoond dat betrouwbare resultaten kleuring in cryosecties van meerdere soorten menselijke neoplastische weefsels 4,8, maar verkleuring van paraffine slides was een uitdaging tot onlangs 13-18. We hebben devweggelopen van de B7-H1 kleuringsprotocol voor paraffine ingebedde dia's van pancreas adenocarcinoom weefsels. De B7-H1 kleuringsprotocol hier beschreven produceert consistente membraneuze en cytoplasmatische kleuring van B7-H1 met weinig achtergrond.
Immunohistochemische kleuring van B7-H1 op cryocoupes gerapporteerd in eerdere studies voor verschillende kankers 3,4. Echter, klinische tumormonsters meestal zijn alleen beschikbaar in de vorm van in paraffine ingebedde blokken. Het monoklonale antilichaam 5H1 is onlangs succesvol toegepast bij de kleuring van paraffine ingebed tumorweefsel zoals niercelcarcinoom, baarmoederhalskanker, blaaskanker en melanoom 13-18. B7-H1 kleuring op paraffine ingebedde 9,19 of 20 cryostat se…
The authors have nothing to disclose.
EB, KMB, en HX dragen in gelijke mate. Dit onderzoek werd ondersteund door de NCI SPORE in Gastro Intestinale Tumoren P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Training Grant, Sol Goldman Pancreatic Cancer Center en National Pancreas Foundation.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |