B7-H1 (PD-L1) e il suo legame al PD-1 forniscono una maggiore tumore segnale indotto immunosoppressiva nel microambiente del tumore. Una tecnica di colorazione immunoistochimica per caratterizzare l'espressione e la localizzazione di B7-H1 in adenocarcinoma pancreatico è descritto qui.
B7-H1/PD-L1, un membro della famiglia B7-immune di regolamentazione proteine di superficie cellulare, svolge un ruolo importante nella regolazione negativa di risposte immunitarie mediate da cellule attraverso la sua interazione con il suo recettore, morte programmata-1 (PD -1) 1,2. Sovraespressione di B7-H1 da cellule tumorali è stato osservato in un certo numero di tumori umani, compreso il melanoma, glioblastoma, e carcinomi del polmone, seno, colon, ovaio, e cellule renali, e ha dimostrato di alterare anti-tumorali T- cella immunità 3-8.
Recentemente, B7-H1 espressione tessuti adenocarcinoma pancreatico è stato identificato come un potenziale marcatore prognostico 9,10. Inoltre, il blocco di B7-H1 in un modello murino di cancro pancreatico ha dimostrato di produrre una risposta antitumorale 11. Questi dati suggeriscono l'importanza di B7-H1 come un potenziale bersaglio terapeutico. Anti-B7-H1 anticorpi bloccanti sono quindi in fase di sperimentazione in studi clinici per il mulgestire più tumori umani solidi tra cui il melanoma e tumori del polmone, del colon, rene, stomaco e pancreas 12.
Per essere successivamente in grado di identificare i pazienti che beneficeranno B7-H1 di targeting terapie, è fondamentale per indagare la correlazione tra espressione e la localizzazione delle B7-H1 e la risposta del paziente al trattamento con anticorpi B7-H1 blocco. Esaminando l'espressione di B7-H1 in tessuti umani adenocarcinoma pancreatico attraverso immunoistochimica darà una migliore comprensione di come questa co-inibitrice molecola di segnalazione contribuisce alla soppressione dell'immunità antitumorale in microambiente del tumore. L'anticorpo anti-B7-H1 monoclonale (clone 5H1) sviluppato da Chen e colleghi ha dimostrato di produrre risultati affidabili in colorazione criosezioni di più tipi di tessuti neoplastici umani 4,8, ma macchie nei paraffinati diapositive era stata una sfida fino recentemente 13-18. Abbiamo devfuggita la B7-H1 protocollo di colorazione per le diapositive incluse in paraffina di tessuti adenocarcinoma pancreatico. La B7-H1 protocollo di colorazione qui descritto produce coerente colorazione membranosa e citoplasmatica di B7-H1 con po 'di storia.
Immunoistochimica del B7-H1 sulla criosezioni è stato riportato in studi precedenti per una varietà di tumori 3,4. Tuttavia, clinici campioni tumorali di solito sono disponibili solo in forma di paraffina-incastonati blocchi. L'anticorpo monoclonale 5H1 è recentemente stato applicato con successo per la colorazione di tessuti inclusi in paraffina tumorali compresi carcinoma renale, carcinoma della cervice, carcinoma della vescica e melanoma 13-18. B7-H1 colorazione su inclusi in paraffina <s…
The authors have nothing to disclose.
EB, KMB, e HX contribuiscono allo stesso modo. Questo studio è stato sostenuto dal SPORE NCI in tumori gastrointestinali P50 CA062924, CA148964 NIH K23, Fondazione Lustgarten, Viragh Foundation, Investigator Award ASCO giovane, NIH CA0090701 5T32-28 Training Grant, Sol Centro pancreatico Goldman Cancer, e della Fondazione Nazionale Pancreas.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |