इस प्रोटोकॉल नियमित रखरखाव और देखभाल करने के लिए zebrafish खेती – किसानी के लिए इष्टतम स्थिति बनाए रखने की रूपरेखा. वीडियो प्रणाली रखरखाव, नियमित रूप से आवास, भोजन, प्रजनन, और zebrafish लार्वा की स्थापना के लिए प्रोटोकॉल दिखाता है.
इस प्रोटोकॉल नियमित देखभाल और एक zebrafish प्रयोगशाला के रखरखाव का वर्णन करता है. Zebrafish अब आनुवंशिकी, औषधीय और व्यवहार अनुसंधान में लोकप्रियता प्राप्त कर रहे हैं. एक हड्डीवाला के रूप में, zebrafish शेयर काफी मनुष्यों और आनुवंशिक अनुक्रम समानता विभिन्न मानव रोग की स्थिति के लिए एक पशु मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा रहा है. zebrafish की अन्य आम हड्डीवाला मॉडल की तुलना में लाभ उच्च उपजाऊपन, कम रखरखाव लागत, पारदर्शी भ्रूण, और तेजी से विकास शामिल हैं. Zebrafish अनुसंधान, को स्थापित करने और एक उत्पादक zebrafish आवास सुविधा को बनाए रखने की जरूरत में ब्याज की प्रेरणा के कारण भी बढ़ रही है. हालांकि साहित्य एक zebrafish प्रयोगशाला के रखरखाव के लिए उपलब्ध है, एक संक्षिप्त वीडियो प्रोटोकॉल की कमी है. इस वीडियो को नियमित रूप से आवास के लिए प्रोटोकॉल दिखाता है, भोजन, प्रजनन और zebrafish लार्वा की स्थापना. शोधकर्ताओं ने इस प्रक्रिया को प्राकृतिक व्यवहार और zebrafis का इष्टतम स्थितियों को समझने में मदद मिलेगीघंटे पशुपालन और इसलिए प्रायोगिक मुद्दों है कि मछली के पालन की स्थितियों से उत्पन्न समस्याओं का निवारण. इस प्रोटोकॉल एक zebrafish प्रयोगशाला स्थापित करने के लिए, और भी स्नातक छात्रों को, जो एक पशु मॉडल के रूप में zebrafish का उपयोग करने का इरादा कर रहे हैं करने के लिए योजना बना शोधकर्ताओं के लिए बहुत मदद की हो जाएगा.
उत्तरी भारत में गंगा नदी से उत्पन्न zebrafish और अनुसंधान के क्षेत्र में लोकप्रिय दोनों अपने वयस्क और लार्वा चरण 2 में, बनने Spence एट अल द्वारा समीक्षा 3.. Zebrafish उच्च उपजाऊपन, रखरखाव में आसानी, भ्रूण के ऑप्टिकल निकासी, तेजी से भ्रूण के विकास, और कम रखरखाव लागत के रूप में इस तरह के अन्य पशु मॉडल पर कई फायदे के अधिकारी. वे आनुवंशिक 6 हेरफेर करने के लिए उत्तरदायी है और उच्च throughput दवा स्क्रीनिंग 4,5 के लिए उपयुक्त हैं. उनका निषेचन बाहरी, जो विकासात्मक जीव द्वारा अपने उपयोग के लिए फायदेमंद है. इन अनुकूल विशेषताओं के कारण, zebrafish आनुवंशिकी 7, 8, औषधीय, और व्यवहार अनुसंधान 9,10 में लोकप्रियता प्राप्त कर रहे हैं. वहाँ एक zebrafish सुविधा और zebrafish पालन बनाए रखने के भ्रूण को प्राप्त करने के लिए चुनौतियों में से एक नंबर रहे हैं. के साथ साथ, हम इन चुनौतियों और ओ को संबोधित में अपने अनुभवों और सिफारिशों का वर्णनप्रणाली के रखरखाव के लिए एक प्रोटोकॉल, भोजन, प्रजनन और लार्वा की स्थापना utline.
तंत्र अनुरक्षण
एक स्वस्थ हालत में zebrafish को बनाए रखने के लिए, यह महत्वपूर्ण है के लिए उन्हें एक ठीक से काम मछलीघर प्रणाली में एक स्वच्छ वातावरण के साथ उपलब्ध कराने के. इस का एक महत्वपूर्ण हिस्सा प्रणाली फिल्टर बदल रहा है नियमित रूप से इतना है कि सभी टैंक उचित जल प्रवाह और साफ पानी प्राप्त करते हैं. यह महत्वपूर्ण है अवरुद्ध प्रणाली पाइप के कारण प्रत्येक टैंक के लिए साइकिल चालन के पानी की आपूर्ति की विफलता से बचने के लिए. पाइप एक सामान्य पानी के दबाव की तुलना में अधिक है और प्रवाह का उपयोग कर साफ किया जा सकता है अगर रुकावट होती है. आदर्श रूप में, सिस्टम के पानी की 10% के आसपास अच्छा पानी की गुणवत्ता बनाए रखने के लिए दैनिक प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए. वैकल्पिक रूप से, पानी जबकि कनस्तर या कार्बन फिल्टर बदल प्रतिस्थापित किया जा सकता है. यह सुनिश्चित करता है कि इन फिल्टर को जोड़ने पाइप में जमा गंदगी को हटा दिया जाता है. पानी की गुणवत्ता में एक नियमित आधार पर जाँच की जानी चाहिए. क्षारीयता, पीएच, temperat के रूप में इस तरह के मानकोंure, कठोरता, अमोनिया, भंग ऑक्सीजन, लवणता, चालकता और प्रणाली (विवरण के लिए 2 टेबल देखें) पानी की गुणवत्ता का प्रतिनिधित्व करने में महत्वपूर्ण कारक के रूप में माना जाना चाहिए. बहुत कम से नाइट्रेट, पीएच, तापमान, और आवास zebrafish के लिए अच्छा पानी की गुणवत्ता सुनिश्चित करने के के लिए एक नियमित आधार पर निगरानी की जानी चाहिए. उच्च अगर इन स्तरों परिसंचारी प्रणाली में प्रणाली ताजा पानी के साथ पानी की जगह से कम किया जा सकता है, आदर्श नाइट्रेट स्तर (सं 3) <50 मिलीग्राम / एल 11 कभी कभी, फिल्टर अच्छी तरह से फिट नहीं है और रिसाव तो यह एक फिल्टर परिवर्तन के बाद किसी भी लीक की जांच करने के लिए सिफारिश की है. यदि मुख्य जलाशय से पानी के प्रवाह में या तो पानी पंप बदलने या एक फिल्टर को बदलने के बाद से अवरुद्ध है, पानी के प्रवाह या तो ढीला या कुछ सेकंड के लिए फिल्टर को दूर करने के लिए किसी भी पाइप में उत्पन्न किया जा रहा निर्वात जारी द्वारा बहाल किया जा सकता है. फिल्टर को बदलने के लिए आवश्यक समय कुल जैविक लोड ओ के रूप में विभिन्न कारकों पर निर्भर करते हुए भिन्न हो सकते हैंn प्रणाली, अन्य फिल्टर की सफाई और गंदगी पाइप में जमा है. इसलिए, फिल्टर तुरंत अगर वे गंदे दिखाई देते हैं या अगर सभी टैंक सही पानी की आपूर्ति नहीं प्राप्त कर रहे हैं बदल जाना चाहिए. यह भी सिफारिश की है कि मछली शुद्ध 70% इथेनॉल के साथ साफ किया जाना है, और पानी में rinsed यह संक्रामक रोगाणुओं से मुक्त करना है, और करने के लिए किया जा रहा है फिर से इस्तेमाल करने से पहले सूखे की अनुमति दी है. सुखाने जो अन्यथा मछली के लिए विषाक्त है इथेनॉल के वाष्पीकरण को सुनिश्चित करता है.
Zebrafish प्रणालियों के अधिकांश de-chlorinated नल का पानी का उपयोग करें, लेकिन, कुछ सिस्टम विआयनीकृत जल का उपयोग करें. यह महत्वपूर्ण है के 300 और ~ 1500 μS बीच प्रणाली पानी की चालकता रखने के रूप में इस मछली के शरीर में लवण को बनाए रखने की जरूरत है कि ऊर्जा को कम कर देता है. इसलिए, zebrafish deionised पानी में नहीं रखा जब तक लवण इष्टतम चालकता का स्तर बनाए रखने के लिए जोड़ रहे हैं कर सकते हैं. संभव प्रणाली पानी में उच्च तांबे की सांद्रता के एक जोखिम है यदि नल का पानी क्योंकि कार्बन फिल्टर तांबे को दूर नहीं करता है के लिए प्रयोग किया जाता है. इसलिए, यूsers तांबे की सांद्रता के लिए जांच और तांबे पाइपिंग जहां संभव से बचने चाहिए.
भोजन
Zebrafish के रूप में इस पानी में नाइट्रेट का स्तर बढ़ाने के लिए, संभवतः उनके 11 प्रजनन, या व्यवहार्यता को प्रभावित कर सकते हैं, के रूप में कुछ ज्यादा खा के कारण मछली मर सकता है कभी नहीं overfed चाहिए. हम मछली के टैंक से 10 मिनट के भीतर खत्म कर सकते हैं किसी भी एक भोजन के दौरान कोई अधिक भोजन उपलब्ध कराने की सलाह देते हैं. यह बहुत महत्वपूर्ण है नमकीन चिंराट से पहले उन्हें zebrafish को खिलाने के रूप में अधिक नमक एकाग्रता मौत का कारण बनता है नमक निकालने के लिए. अगर अधिक zebrafish अंडे आवश्यक हैं, मछली तीन बार एक दिन में खिलाया जा सकता है. ब्रीडर मछली टैंक दैनिक सफाई भी अंडा उत्पादन के स्तर में सुधार है.
जब जलीय निवास सिस्टम पर खिला हम आम तौर पर पानी पंप और वायु पंप बारी करने के लिए 10 मिनट के लिए मछली खाना खाने के लिए अनुमति. यह भोजन की मात्रा कम हो जाती है कि फिल्टर में धोया है. हालाँकि, उपयोगकर्ताओं लोकलक्षी के लिए सावधान रहना चाहिएइन पंपों पर फिर बाद में बारी अंगारा.
प्रजनन
Zebrafish 3 ~ और उम्र के 18 महीनों के बीच इष्टतम प्रजनन हालत में आम तौर पर कर रहे हैं. Pairwise प्रजनन दो लगातार 11 दिनों के लिए नहीं किया जाना चाहिए, लेकिन, एक टैंक के रूप में टैंक प्रजनन दैनिक प्रदर्शन कर सकते हैं कई मछली जो मछली एक पंक्ति में दो दिनों के लिए पैदा किया जा रहा है की इसी जोड़ी का मौका कम कर देता है पकड़ कर सकते हैं. प्रजनन नियमित अंतराल पर किया जाना चाहिए और यहां तक कि अगर अंडे की आवश्यकता नहीं कर रहे हैं. इस प्रक्रिया में यह सुनिश्चित करेंगे कि मछली के प्रजनन चक्र को बनाए रखा है. यह सिफारिश की है कि वहाँ एक प्रजनन में पुरुषों सेट अप से अधिक महिलाएं हैं. पुरुष zebrafish एक दैनिक आधार 12 है जो आगे इस सिफारिश का समर्थन करता है पर उनकी महिला साथी बदल जाते हैं. इसके अलावा, हमारी प्रयोगशाला के भीतर हम शुरू में प्रजनन के साथ समस्याओं का अनुभव है, तथापि, एक प्रजनन में पुरुषों की तुलना में अधिक महिलाओं को सेट अप का उपयोग करते हुए समस्या को हल करने में मदद की. इसके अलावा, एक उच्च प्रोटीन कॉन्टे साथ खिलाNT आहार और नमकीन चिंराट दो – तीन बार एक दिन, अलग (विभिन्न माता – पिता से) टैंक, 27 और 28 के बीच सेट अप डिग्री सेल्सियस, और अवरोधित अंडाशय ट्यूबों के साथ महिलाओं के पेट फैलाएंगे प्रजनन के तापमान को बनाए रखने से मिश्रण मछली हल्की मालिश आगे अंडा उत्पादन में सुधार. हम भाई बहन के बीच प्रजनन से बचने के लिए मछली लाइनों / मूल के एक रिकॉर्ड रखने की सलाह देते हैं. यह आगे भ्रूण उत्पादन में सुधार. प्रत्येक टैंक से मछली द्वारा निर्धारित भ्रूण की संख्या के रिकॉर्ड को ध्यान में रखते हुए भी सिफारिश की है. यह सबसे अच्छा प्रजनन मछली टैंक के एक ट्रैक रखने और बिछाने अंडे नहीं मछली में प्रजनन में सुधार के उपायों लेने के साथ मदद करता है.
लार्वा की स्थापना
लार्वा के दूध पिलाने 5 DPF (दिनों के बाद निषेचन) से शुरू करना चाहिए. युवा लार्वा आकार में 100 microns (जैसे, ZM100) या Paramecium और रोटीफर्स (जो विकास को बढ़ावा देने) के रूप में रहते हैं भोजन के सूखे भोजन के साथ खिलाया जा सकता है. भोजन आकार धीरे – धीरे बढ़ाया जा सकता है200 (ZM200 उदाहरण के लिए) microns या 300/400 microns (ZM300 उदाहरण के लिए). वयस्क मछली की आबादी प्रति लीटर पानी में 6-7 के आसपास मछली होना चाहिए. इस अभ्यास में बीओडी (बायोलॉजिकल ऑक्सीजन डिमांड) के टैंक को बेहतर रखरखाव के लिए सिफारिश की है.
The authors have nothing to disclose.
लेखकों के लिए उसकी सहायता के लिए प्रयोगशाला उपभोग्य सामग्रियों के प्रबंधन के छलनी Esmaili में धन्यवाद देना चाहूंगा. ए.ए. अल्जाइमर रोग अनुसंधान और देखभाल, मेडिकल साइंसेज, एडिथ Cowan विश्वविद्यालय के स्कूल के लिए सेंटर ऑफ एक्सीलेंस से एक पीएचडी छात्रवृत्ति के प्राप्तकर्ता है. एम सी रोटरी क्लब, पर्थ से पीएचडी धन का समर्थन प्राप्त है. AM जीवी, के.टी., और RNM McCusker अल्जाइमर रिसर्च फाउंडेशन द्वारा वित्त पोषित कर रहे हैं.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
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Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
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Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |