$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
חלוקה שווה של הכרומוזומים בין תאי הבת 2 במהלך חלוקת תא היא תנאי הכרחית להבטחת יציבות גנטית 1. אי דיוקים במהלך הפרדת כרומוזום הם סימן היכר של ממאירות וקשורים עם מחלה מתקדמת 2-4. מחסום הרכבת הציר (SAC) הוא מנגנון מעקב המיטוטי שמחזיק בחזרה תאים בmetaphase עד שכל כרומוזום יחיד קימה מצורפת דו קוטבי יציבה לכישור המיטוטי 1. SAC מפעיל הפונקציה שלה על ידי הפרעה לactivating APC / C מקטע Cdc20 לחסום proteolysis של securin וcyclin B ובכך הפרדת כרומוזום ויציאה המיטוטי. התקשרות לא תקינה של כרומוזומים מונעת השתקה של SAC איתות וגורמת לעיכוב מתמשך של APC / C Cdc20 עד שהבעיה תיפתר, כדי למנוע missegregation כרומוזום, aneuploidy וגידולים ממאירים 1.
רוב המחקרים שעסקוnfluence של התקשרות לא תקינה כרומוזומלית בproteolysis התלוי C APC / נצל שיבוש ציר באמצעות depolymerizing או microtubule ייצוב-תרופות להתערב בקובץ מצורף לmicrotubules כרומוזומלית. מאז התערבות בקינטיקה microtubule יכולה להשפיע התחבורה והלוקליזציה של רגולטורים קריטיים, הליכים אלה לשאת סיכון של גרימת אפקטים מלאכותיים 5.
כדי ללמוד איך SAC מפריע APC / C proteolysis התלוי של cyclin B במהלך מיטוזה בשלוות נפש אוכלוסיות תאים, הקים מערכת היסטון H2-GFP מבוסס-שאפשרה ניטור סימולטני של יישור metaphase של כרומוזומים mitotic וproteolysis של cyclin 6 B .
לתאר פרופילי proteolytic, יצר מולקולת כתב B cyclin chimeric עם מחצית C-מסוף SNAP 6 (איור 1). בתגובת תיוג עצמי, SNAP-המחצית היא מסוגלת ליצור קשרים כימיים עםalkylguanine-נישאים (מצע SNAP) 7,8 (איור 1). מולקולות מצע SNAP זמינות ולבצע מגוון רחב של fluorochromes השונה. מולקולות cyclin chimeric B-SNAP להיות מתויגות על תוספת של מצע SNAP קרום החדיר למדיום הגידול 7 (איור 1). בעקבות תגובת התיוג, עוצמת קרינת B-SNAP cyclin צונחת בתגובה כמו אופן ועוצמות קרינה משקפת רמות של cyclin B 6 שפלה (איור 1) הדופק מרדף. המערכת שלנו מאפשרת ניטור של המיטוטי proteolysis התלוי C APC / במספר גדול של תאים (או מספר אוכלוסיות תאים) במקביל. כך, המערכת עשויה להיות כלי רב ערך כדי לזהות סוכנים / מולקולות קטנות כי הם מסוגלים להפריע לפעילות פרוטאוליטי בmetaphase לanaphase מעבר. יתר על כן, כסינתזה של cyclin B במהלך מיטוזה באחרונה הציע כan mechanis חשובמ 'בטיפוח בלוק המיטוטי בעכברים ובבני אדם על ידי רמות cyclin B ביטוי יציבות 9,10 שמירה, מערכת זו אפשרה לנו לנתח proteolysis B cyclin כאלמנט אחד של שיווי משקל מאוזן 6.