Determinación del vaciamiento gástrico con un no-invasivo [ 13 C]-octanoico prueba de aliento de fuego para la gastroparesia seguimiento en mujeres ratones NOD LTJ.
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Artículo de método
Evaluación del vaciamiento gástrico en ratones diabéticos no obesos mediante un [
En este artículo
Resumen
Resumen
Estudios de vaciamiento gástrico en ratones han sido limitada por la incapacidad de seguir cambios de vaciado gástrico en el mismo animal ya que las técnicas más comúnmente usadas requieren la matanza de los animales y de recuperación post mortem del 1,2 comida. Este método evita que los estudios longitudinales para determinar los cambios en el vaciado gástrico con la edad y la progresión de la enfermedad. El uso común [13 C]-octanoico prueba de aliento ácido 3 para los seres humanos ha sido modificado para su uso en ratones y ratas 4-6 y 7 que anteriormente mostró que esta prueba es fiable y sensible a los cambios en el vaciado gástrico en respuesta a los fármacos y durante progresión de la enfermedad diabética 8. En este vídeo de presentación del principio y la aplicación práctica de esta prueba modificada se explica. Al igual que en el anterior estudio, los ratones NOD LTJ se utilizan, un modelo de diabetes tipo 1 9. Una parte de estos ratones desarrollan los síntomas de la gastroparesia, una complicación de la diabetes caracterizado por un vaciado gástrico retardado sin obstrucción mecánica del estómago 10.
En este trabajo se muestra cómo entrenar a los ratones para probar, cómo preparar la comida de prueba y obtener 4 hr gástricas datos vaciado y cómo analizar los datos obtenidos. El analizador de isótopo de carbono usado en el presente estudio es adecuado para el muestreo automático de las muestras de aire de hasta 12 ratones al mismo tiempo. Esta técnica permite el seguimiento longitudinal de vaciamiento gástrico de los grupos más grandes de ratones con diabetes u otras enfermedades de larga duración.
Introducción
Este manuscrito describe los aspectos técnicos y metodológicos relacionados con la medición no invasiva del vaciamiento gástrico en ratones. Siguiendo el protocolo descrito aquí, los investigadores pueden fiable y reproducible seguir los cambios en el vaciado gástrico debido al desarrollo de la enfermedad, estudiar el impacto de los agentes farmacológicos en el vaciado gástrico y seguir la respuesta de vaciamiento gástrico para el tratamiento de las enfermedades subyacentes o defectos 6,8, 11,12. En las publicaciones anteriores, la aplicación de pruebas de aliento 13 C ácido octanoico ha demostrado ser una forma útil de medir el vaciado gástrico....
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Protocolo
1. La formación y habituación de los Ratones
- Antes del análisis, poner todos los ratones en las cámaras de ensayo para 2-4 horas con flujo de aire constante a fin de habituar a las condiciones de prueba. Esto reduce considerablemente los niveles de estrés que podrían causar detección aberrante del vaciamiento gástrico retardado. Tratar los ratones de la misma manera como si el experimento vaciado gástrico se ejecuta. Preparar yema de huevo (véase más adelante) sin añadir el ácido octanoico y alimentar a 0,2 g para cada ratón.
- Repita este proceso hasta que los ratones están suficientemente formados (típicamente de 2-3 veces). Los ratones normalmen....
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Resultados
A los datos representativos, creados a partir de tres diferentes ratones se muestra en la Figura 2. El gráfico negro representa los puntos de datos de un ratón con el vaciamiento gástrico normal. Se muestra la fracción de C 13 que se recupera en el aire exhalado expresada como un porcentaje de la dosis administrada por hora expresada como una función del tiempo. La curva azul es de un ratón con un vaciado gástrico acelerado con un valor medio T de 40 min y la curva roja es de un ratón con un .......
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Discusión
La técnica descrita en este documento permite repetida y no invasiva de medición in vivo de vaciado gástrico sólido en ratones. Este sistema tiene la ventaja de que los animales no se restringen en la cámara de medición, lo que les permite moverse y girar libremente. Como se trata de un entorno desconocido, los ratones todavía necesitan ser entrenados y acostumbrados a las cámaras de prueba para prevenir los efectos del estrés sobre el vaciado gástrico. En general, se supone que los datos de vaciado gástrico so.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto financieros.
Agradecimientos
Esta publicación vídeo fue posible gracias al financiamiento del Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (NIDDK) para el Proyecto de Programa de Subsidios "Biopatología del sistema entérico" DK 68055. Christopher T. Creedon fue apoyada por el Programa de Mentores de Rochester Public Schools.
Agradecemos al Sr. Gary Stoltz para la asistencia técnica, la Sra. Kristy Zodrow para asistencia secretarial y el Dr. Douglas Baer de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| NOMBRE | EMPRESA | N º de | COMENTARIOS |
| Una fuente de constante de suministro de aire, el flujo y la composición | central de suministro de aire en la instalación de investigación | ||
| 130 ml cámara de muestreo que tiene aire de entrada, de salida de aire, y la apertura de la administración de alimentos Tubos de plástico para el suministro de aire | Dentro de la casa construida | ||
| Ácido octanoico | Cambridge isótopo laboratorios (Andover, MA) | CLM-293-1 | |
Para preparar la comida huevo:
| Cualquier proveedor | Trata deser coherente con el proveedor de huevo ya que el contenido nutricional y la palatabilidad de los huevos puede afectar el vaciado gástrico y la ingestión de la comida | |
| El dióxido de carbono isótopo analizador | Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) |
Referencias
- Yeung, C. K., McCurrie, J. R. A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).
- Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A.
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Reimpresiones y permisos
