Biz neonatal serebral korteks ve yetişkin omurilik canlı mikroglia verimli ve hızlı izolasyon / kültür yöntemleri özetlemektedir. Kortikal mikrogliya diseksiyonu ve kaplama ilk diseksiyonu sonrasında yer ~ 10 gün alarak sonraki mikrogliyal hasat ile, 90 dakika içinde yapılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yenidoğan ve Erişkin Merkezi sinir sisteminin Kültüre Mikroglia
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Mikroglia gibi, bu MSS gelişiminde olgunlaşma, multipl skleroz ve spinal kord yaralanması gibi fizyolojik ve patolojik süreçlerde kritik önemli rolleri olan, merkezi sinir sistemi (MSS) yerleşik makrofaj benzeri hücreler ve. Mikroglia aktif ve MS veya inme kaynaklanan iskemik beyin travması görüldüğü aksonal hasar nöronal yaralanma veya stimülasyon, harekete için işe edilebilir. MSS Bu bağışıklık üyeleri de patolojik olmayan koşullarda sinaptik plastisite rol olduğu düşünülmektedir. Biz diğer merkezi sinir sistemi hücre tipleri ve hücre kültürü enkaz varlığı olarak karıştırıcı değişkenler, en aza indirirken canlı hücre sayıları en üst düzeye çıkarmak amaçlanmıştır yenidoğan ve yetişkin dokulardan kültür mikrogliya için protokolleri kullanır. Biz tüm süreci uygulanabilir ve tekrarlanabilir hale getirir büyük ve kolayca ayırt MSS bileşenleri (örneğin korteks, spinal kord segmentleri), kullanmaktadır. Yetişkin hücrenin kullanımınıbirçok patolojiler özellikle doğum sonrası omurilik etkiler okudu olarak s, neonatal beyin mikroglia kullanımına uygun bir alternatiftir. Bu kültür sistemleri de doğrudan ya da inhibe etmek veya mikrogliyal aktivasyonun teşvik edebilir bileşiklerin etkisini test etmek için yararlıdır. Mikrogliyal aktivasyonun, yetişkin merkezi sinir sisteminde hastalıkların sonuçları şekil bu yana, neonatal ve yetişkin mikroglia kültürlenir ve incelenmiştir edilebileceği in vitro sistemler için bir ihtiyaç vardır.
Giriş
Mikroglia en yakın yapı ve fonksiyon 1 periferik makrofaj benzeri MSS, yerleşik bağışıklık hücreleri bulunmaktadır. Son zamanlarda doğum sonrası mikroglial hücreleri ilkel myeloid öncü hücrelerden elde ve doğum sonrası hematopoetik ataları yetişkin beyin 2 mikroglia kaynağı olduğu önceki kavramı upending, embriyogenez sekizinci gün önce oluşturulan olduğu gösterilmiştir. Onlar çeşitli nörolojik hastalıklarda önemli rol oynayan ve hızlı bir şekilde pro-inflamatuar ve anti-inflamatuar sitokinler 3 bırakarak enfeksiyon veya yaralanma yanıt verebilir. Böylece mikroglia hastalığın ilerlemesini etkileyecek manipüle edilebilir MSS bağımsız b....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Diseksiyon (Gün 0)
- Hipotermi ile p0-2 fare yavrular için anestezi neden. Doku dezenfekte% 70 etanol batırılmış bir Kimwipe ile yavrular başkanları silin.
- 10 cm kültür plaka başına 4 yavrular kullanarak, bir makas ile kafaları çıkarın. Buz Hank tampon içeren bir petri başkanları yerleştirin.
- Göz çukurları ile kavisli bir forseps kullanarak kafaları demir ve dikkatli bir şekilde düz microforceps ile kafatası kaplayan deri kaldırmak.
- Değil delinme veya hasar korteks için dikkatli kullanarak, düz microforceps ile kafatası kemikleri çıkarın. En etkili bir şekilde bu bölgede atılır olarak, başın tabanında yer alır beyincik, yanın....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Dinlenme ve aktive mikroglial hücreleri bir örneği Şekil 1'de gösterilmiştir. Mikroglia kaplama sonra 24 saat görüntülendi (Şekil 1a) ve dallanmış (dinlenme) morfoloji gösterirler edildi. Astar reaktif maruz kalmak, hücreler olarak mikrogliyal morfolojisi değişiklikler bakteriyel lipopolisakkarid (LPS) sonuçları (Şekil 1b) aktif olur.
Kaplama için hücre sayımı bir örnek Şekil 2'de gösterilmiştir. Hücre artıklar.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Mikroglia MSS normal işleyişi yanı sıra çeşitli patolojiler için inflamatuar yanıtları modüle. Mikroglia tarafından fonksiyonel sinaptik yeniden normal beyin dengesinin 15 bakım sorumlu tutulmuştur. Nörojenik kaskad sırasında, hipokampus 4, 16 dentat girus gelen nöral progenitör hücrelerin boşluk katılmak. Bu nedenle, mikrogliya birden fazla ayrı işlevlere sahip olan boyunca gelişim ve yetişkinlik büyük tarama alanı kapsayacak yenidoğan ve yetişkin mikroglia, çalışma hangi bir kültür sistemi gelişt.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Biz onların tavsiye ve yararlı yorumlar için Tsirka laboratuar üyeleri teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma JCN RB, bir NSF-3MT IGERT ve LT için bir Turner Tez dostluk ve NSF-3MT IGERT için, 12PRE12060489 SET R01NS42168 tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| EDTA, 5mM | Invitrogen | 15567-028 | |
| Lidokain, 60mM | Sigma | L-5647 | |
| Tripan Mavi | Sigma | T8154 | |
| Tripsin / EDTA | Cellgro | 25-052-CI | |
| DMEM, 1X | Cellgro | 10-017 | |
| Sodyum Piruvat | Cellgro | 25-000-Cl | |
| Gentamisin Sülfat | Biowittaker | 17-518Z | |
| 35 x 10mm doku kültürü kabı | Falcon | 353001 | |
| Poli-D-Lizin, 100 & mu; g/ml | Seyreltik 1:20 | ||
| HBSS, 1X | Cellgro | 20-023-CV |
Kaynaklar
- Ransohoff, R. M., Perry, V. H. Microglial Physiology: Unique Stimuli, Specialized Responses. Ann. Rev. Immunol. 27, 119-145 (2009).
- Ginhoux, F., Greter, M., Leboeuf, M., Nandi, S., See, P., Gokhan, S., Mehler, M., Conway, S., Ng, L., Stanley, E., Samokhavalov, I., Merad, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
