Un Modificado<em&gt; In vitro</em&gt; Invasión Ensayo para determinar el papel potencial de hormonas, citoquinas y / o factores de crecimiento en la invasión de células del cáncer de Mediación

Resumen

Este artículo de video describe un método in vitro modificado para examinar el papel de las hormonas, citocinas y/o factores de crecimiento en la invasión de células cancerosas.

Resumen

Suero de la sangre sirve como un quimioatrayente hacia el cual las células cancerosas migran e invaden, facilitando su intravasación en microvasos. Sin embargo, las moléculas reales hacia el que las células migran siendo difícil de alcanzar. Este ensayo de invasión modificado ha sido desarrollado para identificar objetivos que impulsan la migración celular y la invasión. Esta técnica compara el índice de invasión en tres condiciones para determinar si una hormona específica, factor de crecimiento o citoquina juega un papel en la mediación el potencial invasivo de una célula de cáncer. Estas condiciones incluyen i) de suero bovino fetal normal (FBS), ii) con carbón vegetal FBS (CS-FBS), que elimina hormonas, factores de crecimiento y citoquinas y iii) CS-FBS + molécula (denotado "X"). Un cambio significativo en la invasión de células con CS-FBS en comparación con FBS, indica la implicación de las hormonas, citoquinas o factores de crecimiento en la mediación del cambio. Las moléculas individuales se pueden agregar de nuevo a CS-FBS para ensayar su capacidad de volververso o rescatar el fenotipo invasión. Además, dos o más factores pueden combinarse para evaluar el efectos aditivos o sinérgicos de los múltiples moléculas en la conducción o inhibir la invasión. En general, este método permite al investigador determinar si las hormonas, citoquinas, y / o factores de crecimiento juegan un papel en la invasión de células sirviendo como quimioatrayentes o inhibidores de la invasión para un tipo particular de célula de cáncer o un mutante específico. Mediante la identificación de factores quimiotácticos y los inhibidores específicos, este ensayo de invasión modificado puede ayudar a dilucidar las vías de señalización que dirigen la invasión de células de cáncer.

Introducción

Un nuevo ensayo de invasión se ha desarrollado con el objetivo de identificar la participación de hormonas específicas, citoquinas y / o factores de crecimiento como quimioatrayentes en la invasión de células de cáncer. La capacidad de las células tumorales para invadir a través de la matriz extracelular (ECM) es una característica del fenotipo metastásico ^1-3. Cámaras de invasión se han utilizado ampliamente como herramientas in vitro para estudiar la invasión de células de cáncer y la migración y pueden proporcionar conocimiento en cuanto a los mecanismos de invasión tumoral in vivo y la metástasis en. Las cámaras co....

Protocolo

1. Prepare los diferentes medios de comunicación y componentes adicionales

1. Antes del experimento, que consiste en preparar los medios DMEM u otros medios especificados con la adición de FBS normales, tratado con carbón vegetal FBS, o FBS tratado con carbón vegetal más el componente a ensayar. Tenga en cuenta que varios componentes pueden ser probados en cada experimento.
2. Pesar y diluir las hormonas, factores de crecimiento o citoquinas apropiadamente para ser disueltos en el suero tratado con carbón vegetal a la concentración fisiológica.

2. Preparar la matriz de colágeno en el hielo

1. Preparar 2 ml de ....

Resultados

El índice de invasión se calcula para cada condición de acuerdo a la normalización a una línea celular no invasivo. Para nuestros experimentos, utilizamos la línea celular de melanoma 1205Lu y variantes establecido líneas celulares estables como nuestras líneas invasivos, así como la variante no invasiva premaligna, WM793 de la que se derivaron las células 1205Lu ¹⁰ que sirve como un control lógico. También utilizamos colágeno I como la matriz invasión, ya que es el componente principal de la dermis. Esto est.......

Discusión

Metástasis tumoral es un proceso de varios pasos. Las células deben romper a través de la membrana basal, intravasate en cualquiera del sistema linfático o de la sangre microvasos, en los que se transporten a sitios distantes. Las células tumorales entonces extravasan y colonizan en un macrometástasis ^12. La progresión a través de la epitelial a mesenquimal (EMT), invasión tumoral y la metástasis se ha mejorado por las hormonas esteroides ^13,14, factores de crecimiento ^{15-18, 19-21} y cit.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Insertos de control BioCoat con 8.0 y micro; m Membrana de PET	Corning 354578		12 en cada una de las dos placas de 24 pocillos. PET = polietileno teraftalato
Colágeno I, cola	de rata Corning	354236	Source = tendón de cola de rata, pureza = 90%
Fijador; Diff-Quick	Thermo Fisher Scientific	NC9844047	Fijador a base de metanol, hematoxilina/eosina
Suero fetal bovino	Life	Technologies 16000	Designado como FBS
Suero fetal bovino despojado con carbón	vegetal Life Technologies	12676	Designado como CS-FBS
Suero fetal bovino	Thermo Scientific Hyclone	SH30070	Designado como FBS
Suero fetal bovino despojado con carbón	Thermo Scientific Hyclone	SH30068	designado como CS-FBS

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