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Immunology and Infection

Mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulated चूहे मॉडल: आंतों लिम्फेटिक दवा परिवहन के आकलन के लिए आवेदन

Published: March 6, 2015 doi: 10.3791/52389
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Drug Delivery, Disposition, and Dynamics, Monash Institute of Pharmaceutical Sciences, Monash University (Parkville Campus)

Abstract

आंतों लसीका प्रणाली द्रव परिवहन, लिपिड अवशोषण और प्रतिरक्षा समारोह में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। लसीका बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी पर एकाग्र कि लसीका वाहिकाओं और नोड्स की एक श्रृंखला के माध्यम से छोटी आंत से सीधे बहती है। Mesenteric लिम्फ वाहिनी के cannulation इस प्रकार आंत से बह mesenteric लिम्फ के संग्रह के लिए सक्षम बनाता है। Mesenteric लिम्फ और लिपोप्रोटीन अंश (लिपिड, lipophilic अणुओं और एपीओ-प्रोटीन) (जैसे साइटोकिन्स और पेट हार्मोन के रूप में तरल पदार्थ, पेप्टाइड्स और प्रोटीन) प्रतिरक्षा कोशिकाओं (99% लिम्फोसाइटों), जलीय अंश की एक सेलुलर अंश के होते हैं। mesenteric लिम्फ वाहिनी केन्युलेशन मॉडल इसलिए लसीका प्रणाली के माध्यम से एकाग्रता और आंत से कारकों की एक श्रृंखला के परिवहन की दर को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। विभिन्न चुनौतियों के जवाब में इन कारकों में परिवर्तन (जैसे, आहार, एंटीजन, ड्रग्स) और रोग में (जैसे, सूजन आंत्र रोग, एचआईवी, मधुमेह) भी कर सकते हैं खई निर्धारित की। ब्याज के विस्तार के क्षेत्र में एक आंतों लिपिड अवशोषण रास्ते के साथ संबद्ध है कि मौखिक रूप से प्रशासित lipophilic दवाओं और prodrugs के अवशोषण में लसीका परिवहन की भूमिका है। यहाँ हम का वर्णन है, विस्तार से, आंतों की प्रसव के बाद कई घंटे के लिए लसीका प्रणाली के माध्यम से दर और लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की हद के मूल्यांकन के लिए सक्षम बनाता है जो एक mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulated चूहे मॉडल। विधि लिम्फ में अन्य मानकों की माप करने के लिए आसानी से अनुकूल है। हम प्रयोगात्मक सफलता की पुष्टि करें और प्राप्त डेटा की व्याख्या करने के लिए पर शिक्षा प्रदान करने के लिए इस जटिल शल्य चिकित्सा पद्धति की स्थापना जब से सामना हो सकता है कि कठिनाइयों का विस्तृत विवरण है, साथ ही विफल रही है और सफल प्रयोगों से प्रतिनिधि डेटा प्रदान करते हैं।

Introduction

लसीका प्रत्येक छोटी आंतों विल्ली एक के भीतर निहित हैं कि एकल lacteals पर निकलती है कि एक यूनिडायरेक्शनल प्रक्रिया के माध्यम से छोटी आंत से बहती है। Lacteals इस प्रकार के तरल पदार्थ, अणुओं और कोशिकाओं और लसीका गठन के लिए अपेक्षाकृत पारगम्य हैं lacteals में इन कारकों के प्रवेश के साथ शुरू होती है। lacteals में प्रारंभिक लिम्फ बाद में लसीका microvessels का एक नेटवर्क है, संग्रह (अभिवाही) लसीका वाहिकाओं, mesenteric लिम्फ नोड्स और अंततः के बाद नोडल (अपवाही) लसीका वाहिकाओं की एक श्रृंखला के माध्यम से आंत से बहती है। नोड्स के भीतर, लिम्फ विनिमय खून से नोड में प्रवेश नोड निवासी प्रतिरक्षा कोशिकाओं के रूप में अच्छी तरह के रूप में सामग्री के साथ होता है, जहां दिमाग़ी साइनस की एक श्रृंखला के माध्यम से गुजरता है। छोटी आंत से बह सभी लिम्फ अंततः अपवाही बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी और बाद में Cisterna chyli में converges। Cisterna chyli भी लिम्फ दुम परिधि के ऊतकों, ईशान intest जमा करता हैinal, यकृत और काठ क्षेत्रों और मध्यस्थानिका और शरीर के कपाल भागों से लसीका के साथ मिलकर वक्ष लसीका वाहिनी में मिलती है। वक्ष लसीका वाहिनी बाईं आंतरिक कंठ और अवजत्रुकी नसों के जंक्शन पर शिरापरक प्रणाली में सीधे लिम्फ खाली। बेहतर mesenteric लिम्फ डक्ट से सीधे लिम्फ के संग्रह में सक्षम बनाता है जो यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल, इस प्रकार आंतों लसीका प्रणाली के माध्यम से प्रणालीगत (सामान्य) परिसंचरण को आंत से सीधे गुजर विभिन्न कारकों का विश्लेषण की सुविधा।

आंतों लसीका प्रणाली को सौंपा प्रमुख शारीरिक कार्यों, द्रव संतुलन बनाए रखने के लिए लिपिड और lipophilic अणु अवशोषण की सुविधा के लिए, और उचित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया एक सक्षम करने के लिए कर रहे हैं। ट्यूमर कोशिकाओं और वायरस भी 2-4 और महत्वपूर्ण परिवर्तन कई भड़काऊ और चयापचय विकृतियों 5-7 में lymphatics के भीतर होते आंतों lymphatics के माध्यम से प्रचार। सकताअन्त्रपेशी विभिन्न कोशिकाओं और अणुओं की एकाग्रता और परिवहन दर की एक आंत्र lymphatics के माध्यम से थोक द्रव का प्रवाह के विश्लेषण के साथ ही मात्रा का ठहराव के लिए सक्षम बनाता भीतर mesenteric लिम्फ वाहिनी के nulation लिम्फ इकट्ठा करने के लिए। विभिन्न चुनौतियों (जैसे, आहार, एंटीजन, ड्रग्स) और रोग मॉडल में के जवाब में एकाग्रता या इन कारकों में से पारगमन में परिवर्तन (जैसे, कोलाइटिस, एचआईवी, मधुमेह) भी मूल्यांकन किया जा सकता है। यह बड़े पैमाने पर विश्लेषण किया है और यहां की तुलना की जा सकती है जो प्रत्येक लिम्फ घटक वर्णन करना असंभव है जबकि, mesenteric लिम्फ simplistically जलीय, लिपिड और सेलुलर चरणों के होते हैं। जलीय चरण में ब्याज की घटकों जैसे एंटीजन या tolerogens 8, ऐसे साइटोकिन्स और मस्तूल सेल मध्यस्थों 9, और इस तरह के incretins के रूप में 10 चयापचय मध्यस्थों के रूप में प्रतिरक्षा दूत के रूप में पेप्टाइड्स और प्रोटीन शामिल हैं। बाद के नोडल mesenteric लिम्फ के सेलुलर अंश lymphocyt की (99% से अधिक) लगभग पूरी तरह से होते हैंतों 11। विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं (वृक्ष के समान कोशिकाओं, मस्तूल कोशिकाओं, आदि) के पूर्व नोडल मेसेंतेरिक lymphatics प्रवेश लेकिन नोड 12 के भीतर रहते हैं। अभिवाही लसीका के भीतर कोशिकाओं ब्याज की हैं, तो यह mesenteric लिम्फ को हटाने के माध्यम से इन कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए संभव है mesenteric लिम्फ वाहिनी 12 की केन्युलेशन से पहले कई दिनों नोड्स। इस रास्ते में अभिवाही और अपवाही लसीका नलिकाओं सीधे जुड़े हुए हैं और अभिवाही लसीका में लसीका कोशिकाओं mesenteric लिम्फ वाहिनी में सीधे गुजरती हैं। आंतों lymphatics के माध्यम से गुजर विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं के पारगमन और फेनोटाइप इस प्रकार की जांच की जा सकती है। शायद तिथि करने के लिए mesenteric लिम्फ इकट्ठा करने के लिए उद्धृत सबसे आम कारण है, हालांकि, आंतों प्रसंस्करण, अवशोषण और आहार लिपिड और lipophilic अणुओं 10 के परिवहन का अध्ययन है।

घूस के बाद, आहार लिपिड उदाहरण के लिए, ट्राइग्लिसराइड से फैटी एसिड और monoglyceride, phosp करने के लिए (पच जाता हैफैटी एसिड और lysophospholipid, और फैटी एसिड और कोलेस्ट्रॉल, आदि) के लिए कोलेस्ट्रॉल एस्टर को holipid और पित्त से amphiphiles के अलावा के माध्यम से छोटे मिसेल और vesicular संरचनाओं में आंत्र लुमेन भीतर छितरी (फॉस्फोलिपिड, कोलेस्ट्रॉल और पित्त लवण) और की कार्रवाई अग्नाशय एंजाइमों 10,13। यहाँ से वे enterocytes में अवशोषित कर रहे हैं। अवशोषित घटकों का एक अनुपात अवशोषण कोशिकाओं (enterocytes) के भीतर ट्राइग्लिसराइड्स, फॉस्फोलिपिड और कोलेस्ट्रॉल एस्टर फार्म करने के लिए फिर से esterified कर रहे हैं। ये फिर से esterified लिपिड स्रावित पित्त, श्लैष्मिक लिपिड पूल या आंतों रक्त की आपूर्ति 13 से exogenously किया जाता लिपिड घटकों और अंतर्जात लिपिड घटकों के संयोजन से इकट्ठा कर रहे हैं। यहाँ से esterified लिपिड या तो enterocytes भीतर जमा हो जाती है या एक साथ विभिन्न apoproteins और अन्य lipophilic अणुओं के साथ आंतों लिपो प्रोटीन (chylomicrons, बहुत कम घनत्व लिपो प्रोटीन (वीएलडीएल)) (में इकट्ठे 10,13। आंतों lacteals आंतों रक्त केशिकाओं की तुलना में उनके प्रवेश के लिए अधिक पारगम्य हैं के रूप में enterocytes बाहर निकलने के बाद, लिपो प्रोटीन विशेष रूप से मेसेंतेरिक लसीका प्रणाली के माध्यम से प्रणालीगत संचलन को आंत से ले जाया जाता है। अवशोषित लिपिड घटकों का एक अनुपात भी, जुड़े एकल, गैर लिपोप्रोटीन के रूप में रक्त केशिकाओं और पोर्टल शिरा के माध्यम से प्रणालीगत संचलन को आंत से पहुँचाया 14 अणु होते हैं। सामान्य में, हालांकि, पोर्टल शिरा परिवहन मार्ग लघु और मध्यम श्रृंखला लंबाई लिपिड के अवशोषण में केवल एक महत्वपूर्ण खिलाड़ी है।

mesenteric लिम्फ का संग्रह इस प्रकार आंत से लिपो प्रोटीन और संबद्ध घटक (लिपिड, lipophilic अणु, एपीओ-प्रोटीन) के परिवहन के आकलन के लिए सक्षम बनाता है। लिपो प्रोटीन quantitated और mesenteric लिम्फ लिपो प्रोटीन, सामान्य रूप में, एक nascen में हैं कि लाभ के साथ होती जा सकता हैटी राज्य वे बड़े पैमाने पर इस तरह के लिपोप्रोटीन लाइपेस 15 के रूप में प्रणालीगत एंजाइमों द्वारा संशोधित नहीं किया गया है के बाद से। Mesenteric लिम्फ cannulated चूहे मॉडल शायद ऐतिहासिक दृष्टि से सबसे बड़े पैमाने पर आंत से लिपिड / लिपोप्रोटीन परिवहन के विश्लेषण के लिए वर्णित किया गया है, whilst ब्याज के विस्तार के एक क्षेत्र lipophilic दवाओं, prodrugs और अन्य xenobiotics 13,16 के परिवहन में lymphatics की भूमिका है जो यहाँ वर्णित मॉडल का ध्यान केंद्रित है। (आम तौर पर लंबी श्रृंखला ट्राइग्लिसराइड> 50 मिलीग्राम / ग्राम में प्रवेश पी> 5 और घुलनशीलता के साथ उन अपवादों को स्पष्ट कर रहे हैं, हालांकि) lipophilic दवाओं 17,18, 19 और अन्य xenobiotics 13,16 या तो निष्क्रिय या द्वारा आंतों lymphatics के लिए पहुँच प्राप्त कर सकते हैं prodrugs सक्रिय रूप से आंतों लिपोप्रोटीन परिवहन रास्ते 19 में एकीकृत।

चूहे mesenteric लिम्फ केन्युलेशन तकनीक इस तरह कई आवेदन किया है। Bollman एट अल। पहले एक techniq वर्णितमॉडल में बदलाव की तो एक नंबर वर्णित किया गया है के बाद से UE। 1948 20 में चूहों में mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulate करने के लिए। चूहा विभिन्न एनेस्थेटिक्स 21,22 साथ anaesthetized है जब उदाहरण के लिए, संग्रह हो सकता है, या होश में राज्य में whilst 23,24 आगे बढ़ 15 या स्वतंत्र रूप से रोका। (- 5 मिलीलीटर / घंटा आम तौर पर 0) 25 चूहे अलग पुनर्जलीकरण समाधान और इस तरह के पेट, आंत या parenterally में अलग दरों पर लिपिड और दवा फार्मूलों के रूप में अन्य पदार्थों प्रशासित किया जा सकता है। कुछ अध्ययनों में वक्ष लसीका वाहिनी के बजाय mesenteric लिम्फ वाहिनी वक्ष लसीका वाहिनी भी एक दूसरे से लसीका प्राप्त करता है, क्योंकि यह ब्याज की कारक पर निर्भर करता है, छोटी आंत से पारगमन overestimate सकता है, हालांकि lymphatics के माध्यम से आंत से परिवहन अनुमान लगाने के लिए cannulated है क्षेत्रों 22,26। लसीका केन्युलेशन मॉडल भी चूहों 15,27, मिनी गड़बड़ी सहित कई अन्य प्रजातियों में वर्णित किया गया हैजी एस 12, भेड़ 28,29, सूअरों 30 और कुत्तों 31। हालांकि, चूहे मॉडल सबसे व्यापक रूप से और लगातार उद्धृत है। होश में 25 में लसीका का संग्रह द्वारा पीछा या 22 चूहों और चूहों 15,27 anaesthetized mesenteric लिम्फ वाहिनी के केन्युलेशन के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल पहले प्रकाशित किया गया है और रुचि पाठक इन प्रोटोकॉल को निर्देश दिया है। इस प्रोटोकॉल एक कल्पना प्रारूप में तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए सबसे पहले है।

लसीका cannulated चूहे मॉडल, खर्च के मामले में सर्जरी और नैतिक विचारों की आसानी बड़ा पशु मॉडलों से अधिक लाभ है। माउस मॉडल की तुलना में जब माउस मॉडल ट्रांसजेनिक जानवरों 27 में और अधिक विस्तृत अध्ययन के लिए सक्षम बनाता है, हालांकि mesenteric लिम्फ केन्युलेशन सर्जरी भी चूहे में आसान है। बहरहाल, चूहे मॉडल, शरीर क्रिया विज्ञान में मतभेद के साथ जुड़े विशेष रूप से उन है कि, सीमा extrapolat की कुछ सीमाएं हैंअन्य पूर्व नैदानिक ​​और नैदानिक ​​स्थितियों पर आयन। उदाहरण के लिए, चूहे पित्त प्रवाह में निरंतर और उच्च प्रजाति के भोजन में जबकि भोजन का सेवन से स्वतंत्र है या लिपिड पित्त प्रवाह 32 को प्रोत्साहित। यह बड़ी प्रजाति और मनुष्यों में देखा जाता है कि प्रतिबिंबित चूहे में प्रतिनिधि पूर्व और बाद खाने का वातावरण प्राप्त करने के लिए चुनौतियां पैदा करता है। यथार्थवादी मानव खुराक के प्रशासन के 25 रूपों के बाद लसीका परिवहन का आकलन करने के लिए जब दवा वितरण के अध्ययन के लिए, बड़ी प्रजाति भी पसंद किया जा सकता। हाल के एक अध्ययन में, mesenteric लिम्फ में लिपिड परिवहन दरों प्रजातियों 27 के पार लिपिड परिवहन डेटा extrapolating में कुछ विश्वास प्रदान करता है जो एक बराबर द्रव्यमान और लिपिड के प्रकार के प्रशासन के बाद प्रजातियों (माउस, चूहे, कुत्ते) के पार तुलनीय होना पाया गया है। हालांकि, पशु आकार (यानी, कुत्ता> चूहा> माउस) के क्रम में रैंक एक मॉडल lipophilic दवा, halofantrine के परिवहन,। एक स्केलिंग कारक इस प्रकार पूर्व के लिए आवश्यक हो सकता हैअन्य प्रजातियों के चूहे से लसीका दवा परिवहन डेटा trapolate।

लसीका केन्युलेशन मॉडल की एक सीमा है, सामान्य रूप में, लसीका वाहिकाओं पोत 33 cannulated है एक बार बदल रहा है जो किसी दबाव ढाल के खिलाफ काम के बाद से लसीका प्रवाह और परिवहन संशोधित कर सकता है एक लसीका वाहिनी से सीधे कि निष्क्रिय लिम्फ संग्रह है। लसीका केन्युलेशन मॉडल भी तकनीक के साथ अपरिचित हैं कि प्रयोगशालाओं में स्थापित करने के लिए मुश्किल हो सकता है। वैकल्पिक मॉडल इस प्रकार वर्णित किया गया है। उदाहरण के लिए, ऐसे लिपो प्रोटीन और lipophilic अणुओं के रूप में आंतों लसीका प्रणाली के माध्यम से कारकों के पारगमन, परोक्ष रूप से रक्त का संग्रह के माध्यम से अध्ययन किया गया है। ऐसा ही एक मॉडल मौखिक मौजूदगी में प्रशासन और अवरोधकों के अभाव निम्नलिखित लिपिड और / या दवाओं के रक्त सांद्रता की तुलना शामिल है (उदाहरण के लिए, Colchicine, Pluronic L81, cycloheximide) लसीका परिवहन 34 ब्लॉक कि आंतों लिपोप्रोटीन उत्पादन की। लाभरक्त के नमूनों के संग्रह के माध्यम से परोक्ष रूप से लसीका परिवहन यों कि मॉडलों के इनवेसिव सर्जरी 35 की आवश्यकता नहीं है के रूप में यह मानव में लसीका परिवहन के कुछ मूल्यांकन सक्षम बनाता है। हालांकि, लसीका परिवहन के अवरोधकों विशिष्ट नहीं हैं और lymphatics के माध्यम से ले जाया जाता है कारक है कि पतला और इस तरह के आकलन पेचीदा जो प्रणालीगत संचलन में संशोधित कर रहे हैं। इन विट्रो विकल्प भी वर्णित किया गया है। उदाहरण के लिए, Caco-2 सेल या पृथक enterocyte संस्कृतियों और अधिक विस्तार में lymphatics 36-38 में प्रवेश कि अणुओं की आंतों स्राव अध्ययन करने के लिए उपयोग किया गया है। मानव आंतों microenvironment के अधिक प्रतिनिधि है कि एक उन्नत इन विट्रो मॉडल भी हाल ही में 39 में वर्णित किया गया। इस मॉडल में एक लसीका endothelial सेल परत lymphatics में आंत से पदार्थ के हस्तांतरण के बारे में अधिक विस्तृत विश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है जो Caco-2 कोशिकाओं के साथ सह सुसंस्कृत है। हालांकि, vitr मेंओ सिस्टम सेल विनिमय प्रवाह की कमी है और एक आंत्र लुमेन और अंतर्निहित रक्त और लसीका संवहनी आपूर्ति के साथ यानी एक दूसरे का संबंध हस्तांतरण। एक वैकल्पिक दृष्टिकोण में, Kassis एट अल। पोत संकुचन, लसीका प्रवाह और मेसेंतेरिक लसीका वाहिकाओं 33 में फ्लोरोसेंट लिपिड सांद्रता के बीच मात्रात्मक तुलना में सक्षम बनाता है जो सीटू इमेजिंग प्रणाली में एक दोहरे चैनल (उच्च गति उज्ज्वल क्षेत्र वीडियो और प्रतिदीप्ति) की स्थापना की। इन विट्रो प्रणालियों में ऊपर उल्लिखित पर इस मॉडल का एक लाभ यह lymphatics के माध्यम से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के पारित होने की सटीक ट्रैकिंग सक्षम बनाता है। बड़े पैमाने पर लिपिड (या दवा) परिवहन के निरपेक्ष माप, हालांकि, अभी तक इमेजिंग तरीकों का उपयोग कर स्थापित कर दिया। इन विट्रो और सिलिको में विशेष रूप से भी 40-42 प्रकाशित किया गया है आंतों lymphatics के माध्यम से lipophilic दवा परिवहन की हद तक की भविष्यवाणी करने के लिए दृष्टिकोण नहीं कर रहे हैं। कई ग के उदाहरण के लिए, पूर्व vivo आत्मीयताप्लाज्मा chylomicrons के लिए ompounds विवो 41 में उनके लसीका परिवहन के साथ काफी अच्छी तरह से सहसंबंधी पाया गया था। बाद में, एक ही समूह के कई भौतिक गुणों 40 के आधार पर chylomicrons के लिए दवा आत्मीयता की भविष्यवाणी करने सिलिको मॉडल में एक की स्थापना की। होल्म एट अल। भी एकमुश्त आणविक वर्णनकर्ता 42 के आधार पर lipophilic यौगिकों के लसीका परिवहन की भविष्यवाणी करने सिलिको मॉडल में एक अपेक्षाकृत जटिल स्थापना की। इन मॉडलों को अज्ञात दवाओं के लसीका परिवहन की हद तक की भविष्यवाणी करने के लिए एक उपयोगी दृष्टिकोण प्रदान कर सकता है। दवाओं की और विभिन्न प्रयोगशालाओं के पार एक विस्तृत श्रृंखला के साथ मॉडल की मान्यता, हालांकि, उनकी शुद्धता और reproducibility पुष्टि करने के लिए आवश्यक हो जाएगा।

Mesenteric लिम्फ वाहिनी के cannulation इस प्रकार सीधे छोटी आंत और कारकों (कोशिकाओं, प्रोटीन की जटिल सरणी के पारगमन दर draining लिम्फ की सामग्री की जांच करने के लिए एकमात्र साधन बनी हुई है,एक vivo स्थिति में लिम्फ में पेप्टाइड्स, लिपिड, ड्रग्स)। इस के साथ साथ हम mesenteric लिम्फ और anaesthetized चूहों से प्रणालीगत रक्त का संग्रह में सक्षम बनाता है कि mesenteric लिम्फ वाहिनी और मन्या धमनी की केन्युलेशन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्रतिनिधि डाटा मॉडल मेसेंतेरिक लसीका प्रणाली के माध्यम से आंत से लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे प्रदर्शित करता है। यह मॉडल और एक समस्या निवारण गाइड स्थापित करने में सामना किया जा सकता है कि कठिनाइयों की चर्चा के बाद है। एक बार स्थापित मॉडल आंतों लसीका परिवहन की जांच के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है।

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Protocol

इस पांडुलिपि में वर्णित पढ़ाई स्थानीय पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया और अनुसंधान और शिक्षण के दिशा-निर्देशों में पशुओं की देखभाल के लिए आस्ट्रेलिया और न्यूजीलैंड परिषद के अनुसार आयोजित किया गया। किसी भी जानवर की प्रक्रिया शुरू करने से पहले, उचित अनुमति स्थानीय संस्था / संगठन के माध्यम से प्राप्त किया जाता है कि सुनिश्चित करते हैं। सभी पशु सर्जरी के साथ के रूप में, सर्जरी सड़न रोकनेवाला शर्तों के तहत और एक नैतिक और सफल परिणाम सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है जब एनेस्थेटिक्स, दर्दनाशक दवाओं और एंटीबायोटिक दवाओं प्रशासित रहे हैं कि, उचित रूप से प्रशिक्षित ऑपरेटरों द्वारा किया जाता है कि सुनिश्चित करते हैं।

1. तैयारी दिवस सर्जिकल प्रक्रिया से पहले

  1. यदि जरूरी हुआ तो सर्जरी से पहले चूहे रात तेजी से। चूहे सुनिश्चित करें पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच गया है।
  2. तैयार करें समाधान चूहे को दिलाई जाए।
    1. ऐसे बाँझ खारा या Ringers के समाधान के रूप में एक पुनर्जलीकरण समाधान तैयार है।
    2. तैयार है एकesthetic के समाधान की आवश्यकता के रूप में। यहाँ वर्णित प्रयोगों में इस्तेमाल संवेदनाहारी "ketamine 100 मिलीग्राम की 1.9 मिलीग्राम / एमएल, Xylazine 100 मिलीग्राम / एमएल की 0.5 मिलीग्राम, एमएल acepromazine 10 मिलीग्राम / के 0.2 मिलीग्राम और खारा के 2.5 मिलीग्राम और संयोजन के द्वारा" कॉकटेल एक "तैयार के शामिल ketamine 100 मिलीलीटर मिलीग्राम / और 0.1 मिलीलीटर acepromazine 10 मिलीग्राम / एमएल के 1 मिलीलीटर से मिलकर कॉकटेल 2 "। नोट: यह समय की एक लंबी अवधि के लिए संज्ञाहरण के एक शल्य चिकित्सा विमान प्रदान कर सकते हैं के रूप में साँस isoflurane या sevoflurane पसंद किया जा सकता।
    3. वैकल्पिक रूप से, उदाहरण के लिए, एक लिपिड पायस में दवा युक्त एक सूत्रीकरण तैयार करते हैं। भंडारण और प्रशासन की अवधि में तैयार करने की स्थिरता को आश्वस्त करने के लिए उपयुक्त स्थिरता अध्ययन करते हैं।
      नोट: निर्माण और दवा की सही प्रकृति लसीका दवा परिवहन के अध्ययन के उद्देश्य के रूप में प्रत्येक अध्ययन के साथ अलग अलग होंगे प्रशासित किया जाना तैयार करने और दवा एडमिनिस्ट्रेशन के एक समारोह के रूप में लसीका दवा परिवहन की दक्षता का मूल्यांकन करने के लिए सबसे अधिक बार हैstered।
      1. पहले से 43 के रूप में वर्णित चित्रा 4 और यहाँ पाँच में प्रतिनिधि प्रयोगों में उपयोग निर्माण, तैयार किया जाता है। संक्षेप में, फॉस्फेट बफर खारा (पीएच 6.9) में 5 मिमी सोडियम taurocholate से मिलकर एक जलीय चरण की 5.6 मिलीलीटर में फैलाव के लिए पहले 14 सी ओलिक एसिड (2-5 μCi) और 40 मिलीग्राम ओलिक एसिड में halofantrine (200 माइक्रोग्राम प्रति) शामिल।
      2. 2-monoolein युक्त योगों के लिए, ओलिक एसिड चरण युक्त halofantrine के रूप में एक ही समय में जलीय चरण के लिए, अन्य घटकों के साथ दो-monoolein की 7.1 मिलीग्राम जोड़ें। 2-monoolein अपेक्षाकृत अस्थिर है और एक-monoolein को isomerises के रूप में चूहे को तुरंत पहले प्रशासन को दो-monoolein युक्त योगों तैयार करें।
      3. इसके बाद आरटी पर 2 मिनट के लिए ultrasonication द्वारा योगों रासायनिक पायसी।
        नोट: पहले 43 में वर्णित किया गया है,) emul का दृश्य निरीक्षण मैं द्वारा योगों की स्थिरता की निगरानीध्रुवीकृत प्रकाश के तहत सायन तुरंत तैयार होने के बाद और किसी भी चरण में परिवर्तन और / या जुदाई का एक संकेत प्रदान करने के लिए गतिशील प्रकाश बिखरने का उपयोग कर dosing निम्नलिखित पायस अलग कर दिया चरण नहीं है कि, द्वितीय) कण आकार विश्लेषण सुनिश्चित करने, और halofantrine सांद्रता के तृतीय) विश्लेषण का उपयोग करने के लिए एक मान्य एचपीएलसी परख।
  3. लसीका प्रवेशनी फ्लश करने के लिए खारा में विरोधी कौयगुलांट 10 मिलीग्राम से युक्त समाधान / मिलीलीटर EDTA के बाँझ पानी में या 10 आइयू / एमएल हेपरिन तैयार करें। कैरोटिड धमनी प्रवेशनी फ्लश करने के लिए खारा में 10 आइयू / एमएल हेपरिन - इसके अलावा 2.5 युक्त विरोधी कौयगुलांट समाधान तैयार है।
  4. Mesenteric लिम्फ वाहिनी (0.8 मिमी आयुध डिपो, 0.5 मिमी आईडी), मन्या धमनी (0.96 मिमी आयुध डिपो, 0.58 मिमी आईडी या 0.8 मिमी आयुध डिपो, 0.5 मिमी आईडी) और ग्रहणी (0.96 मिमी आयुध डिपो, 0.58 मिमी आईडी में सम्मिलन के लिए पॉलीथीन cannulas तैयार करें )
    1. लसीका Cann के लिए 15 सेमी - मन्या धमनी और ग्रहणी प्रवेशनी और 10 के लिए 30 सेमी - आवश्यक लंबाई (आमतौर पर 25 से cannulas कटयूला) और () चित्रा 1 देखें एक बाँझ सर्जिकल ब्लेड का उपयोग कर cannulas की नोक पर एक बेवल जगह है।
      नोट: यह प्रवेशनी प्रविष्टि की आसानी बढ़ जाती है और प्रवेशनी रुकावट के बाद प्रविष्टि की घटनाओं को कम कर देता है।
    2. आकार को काटने, फिर वापस पर ही प्रवेशनी के एक छोटे से हिस्से पाशन एक लाइटर या गर्म थाली के साथ यह हीटिंग और से intraduodenal प्रवेशनी में एक जम्मू आकार लंगर बिंदु प्लेस (चित्रा 1 देखें)।
  5. (1.3 चरण में तैयार) एक विरोधी कौयगुलांट समाधान युक्त एक 25 जी सुई और सिरिंज के लिए लिम्फ प्रवेशनी संलग्न। विरोधी कौयगुलांट समाधान के साथ लसीका प्रवेशनी भरें और प्रवेशनी हे में समाधान छोड़ना / एन लिम्फ संग्रह के दौरान लिम्फ प्रवेशनी में थक्का बनने की घटनाओं को कम करने के लिए।
  6. लसीका और रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए ट्यूब तैयार करें। लसीका और रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए लिम्फ संग्रह ट्यूब, लेबल ट्यूब पूर्व तौलना और विरोधी कौयगुलांट समाधान जोड़ें। पर्याप्त विरोधी कौयगुलांट solut जोड़ेंएकत्र लिम्फ या खून में 20 आइयू / एमएल हेपरिन - आयन एक बाँझ पानी में 1 मिलीग्राम / मिलीलीटर EDTA के अंतिम एकाग्रता या 10 को प्राप्त करने के लिए।

शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया शुरू करने के लिए 2. तैयारी तुरंत पहले

  1. वे पेटेंट कर रहे हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए बाँझ खारा या विरोधी कौयगुलांट समाधान के साथ निस्तब्धता द्वारा सभी cannulas की जाँच करें।
  2. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के लिए चूहा तैयार करें।
    नोट: mesenteric लिम्फ वाहिनी खाया है या mesenteric लिम्फ दूधिया और उच्च लिपिड लदान के साथ अपारदर्शी हो जाता है के रूप में तेल की एक खुराक प्रशासित किया गया कि चूहों में अधिक दिख रहा है। पूर्व शुरू होने सर्जरी के लिए 2 घंटा - जैसे जैतून या सोयाबीन तेल 0.5 के रूप में - (1 मिलीलीटर 0.1 के आसपास) कुछ ऑपरेटरों, विशेष रूप से सर्जरी करने के लिए नए उन, इसलिए चूहों एक तेल के साथ पूर्व dosed हैं जब यह आसान mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulate के लिए मिल । हालांकि, पूर्व dosing तेल यह तेल खुराक पूर्व करने के लिए आदर्श नहीं हो सकता है कि इस तरह लिम्फ में लिपिड, lipophilic दवाओं और अन्य कारकों की लसीका परिवहन प्रभावित करता हैप्रयोग के उद्देश्य पर निर्भर करता है।
    1. सर्जरी और नमूना संग्रह अवधि के दौरान चूहे anesthetize।
      1. उदाहरण के लिए, कॉकटेल की 1.5 मिलीग्राम / किलो के चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से संज्ञाहरण आरंभ मैं एक 25 जी सुई से जुड़ी एक 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग चूहों गर्दन के पीछे एक त्वचा गुना में (कदम 1.2.2) से। (कदम 1.2.2) से कॉकटेल दो की 0.44 मिलीग्राम / किग्रा एक 25 जी सुई से जुड़ी एक 1 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग आवश्यक है, के रूप में लगभग एक घंटे की intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से संज्ञाहरण बनाए रखें।
      2. सर्जरी एनेस्थीसिया की गहराई श्वसन दर, गलमुच्छा आंदोलन, मांसपेशियों टोन और इस तरह के पैर के बन्द रखो के रूप में उत्तेजनाओं को प्रतिक्रियाओं को देख कर पर्याप्त है कि यह सुनिश्चित शुरू करने से पहले। आवश्यकता के रूप में अतिरिक्त संज्ञाहरण प्रशासन।
    2. कैरोटिड धमनी प्रवेशनी के लिए लसीका और ग्रहणी केन्युलेशन के लिए पेट के दाहिने हिस्से में शामिल हैं जो शल्य क्षेत्रों से फर, और गर्दन और छोड़ दिया हंसली क्षेत्र दाढ़ीtion।
    3. Aseptically povidine आयोडीन समाधान या chlorhexidine समाधान और एक 70% इथेनॉल स्क्रब का उपयोग कर शल्य चिकित्सा के क्षेत्रों को साफ करें। 70% इथेनॉल के साथ एक अंतिम सफाई के साथ खत्म, प्रत्येक क्षेत्र के लिए इस तीन बार दोहराएँ।
  3. एक गर्म शल्य पैड (37 डिग्री सेल्सियस) के ऊपर एक साफ चादर पर पृष्ठीय लेटना में पशु रखें।

Mesenteric लिम्फ वाहिनी के 3. cannulation

  1. इसके दाईं ओर ऑपरेटर की ओर का सामना करना पड़ के साथ पशु रखें। के साथ या आवश्यकता के रूप में एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप की सहायता के बिना सर्जरी प्रदर्शन।
  2. एक सीधे 4 सेमी चीरा लगभग 2 सेमी ribcage (तटीय मार्जिन) नीचे सही दिशा करने के midline (xyphoid प्रक्रिया) से बढ़ा एक बाँझ स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर के साथ पेट की मांसपेशियों दीवार के ऊपर परत को खोलें (चित्रा 2B देखें)।
  3. एक छोटे से जोड़ी के साथ सही दिशा को midline के लिए पार्श्व 5 मिमी - 4 से पेट की मांसपेशियों की दीवार के शेष परतों खोलेंशल्य कैंची की (चित्रा 2B देखें)।
  4. बाएं पेट की मांसपेशियों दीवार के नीचे छोटी आंत वापस लेना और 2 का उपयोग कर यह जगह में रखने के लिए - सामान्य नमक के साथ संतृप्त बाँझ धुंध के 3 टुकड़े।
  5. Mesenteric लिम्फ वाहिनी के दृश्य को कम करने के लिए सही गुर्दे के स्तर पर चूहे की पीठ के तहत क्षैतिज रखा एक 10 मिलीलीटर की प्लास्टिक सिरिंज से अधिक चूहे पुल।
  6. - (; चित्रा -2 देखना एक pulsating गहरे लाल रक्त वाहिका) मेसेंतेरिक धमनी का अधिकार गुर्दे को सीधा और तुरंत व्याख्यान चबूतरे वाला और समानांतर है कि व्यास में 1 मिमी एक पोत लगभग 0.5: बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी का पता लगाएँ।
    नोट: गैर-उपवास या तेल पूर्व dosed चूहों में पोत, सफेद अपारदर्शी और यह काफी पारदर्शी है जिसमें उपवास चूहों की तुलना में कल्पना करने के लिए आसान है।
  7. एक दूसरे, छोटे गौण लसीका वाहिनी है, तो यह निर्धारित करने के लिए बड़ी बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी और मेसेंतेरिक धमनी को तुरंत दुम क्षेत्र का निरीक्षणवर्तमान। अगर मौजूद है, वाहिनी विच्छेद और superglue के साथ occluding, या वाहिनी के चारों ओर एक सिवनी बांधने से नली के माध्यम से लसीका का प्रवाह अवरुद्ध आंत से बह लिम्फ की पूरी मात्रा बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी से इकट्ठा किया जाता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए।
  8. दाएं गुर्दे की कम मार्जिन पर पेरी-गुर्दे वसा बिस्तर के माध्यम से सीधे संदंश की एक जोड़ी के पास, और बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी के साथ एक समानांतर दिशा में तुरंत रग कावा नीचे संयोजी ऊतक परतों के माध्यम से।
  9. संदंश की नोक लिम्फ प्रवेशनी की पकड़ ले और एक छोर तुरंत mesenteric लिम्फ वाहिनी से सटे और सही गुर्दे के स्तर पर पशु से exteriorised दूसरे के साथ पेरी-गुर्दे वसा बिस्तर के माध्यम से यह पुल का उपयोग करना।
  10. कुंद विच्छेदन द्वारा संयोजी और वसा ऊतकों की परतों overlying से mesenteric लिम्फ वाहिनी पृथक। पियर्स या लिम्फ वाहिनी को नुकसान नहीं ख्याल रखना।
  11. लसीका वाहिनी को अलग-थलग करने के बाद, एक छोटे से हो करसूक्ष्म कैंची, जौहरी संदंश की तेज टिप या एक 25 जी सुई के साथ या तो लसीका वाहिनी में ले। पूरी तरह से पोत तोड़ने के लिए नहीं ख्याल रखना।
  12. लसीका प्रवेशनी पूरी तरह से कोई हवा अंतराल के साथ विरोधी कौयगुलांट समाधान (एक सिरिंज का उपयोग और 25 जी सुई) से भर जाता है कि सुनिश्चित करें। संदंश का एक छोटा सा जोड़ी की सहायता के साथ छोटे से छेद के माध्यम से mesenteric लिम्फ वाहिनी के अंदर 4 मिमी - लिम्फ प्रवेशनी लगभग 2 डालें।
  13. कुछ मिनटों के लिए लिम्फ प्रवेशनी को ध्यान से देखें। केन्युलेशन सफल हुआ तो प्रवेशनी से मुक्त एकत्रित अंत से आंतों लसीका के एक क्रमिक प्रवाह को ध्यान से देखें। 3.12 - केन्युलेशन सफल नहीं है, तो दोहराने 3.8 कदम।
  14. केन्युलेशन सफल होता है, लसीका वाहिनी में प्रवेश द्वार छेद पर पशु चिकित्सा चिपकने की एक छोटी सी बूंद रखकर प्रवेशनी सुरक्षित। अतिरिक्त पशु चिकित्सा चिपकने के आवेदन के माध्यम से पोत रोक देना नहीं ख्याल रखना।
  15. पशु चिकित्सा चिपकने वाला सेट करने के लिए इंतजार कर, obser whilstकेन्युलेशन प्रक्रिया सफल रहा था कि यह सुनिश्चित करने के लिए कई मिनट के लिए लसीका का प्रवाह किया है। केन्युलेशन की सफलता के कुछ एक बार, ध्यान से उदर गुहा में रखा गया है कि धुंध के टुकड़े को हटाने और अपनी मूल स्थिति में छोटी आंत जगह है।
  16. विरोधी कौयगुलांट युक्त लिम्फ संग्रह ट्यूब प्लेस मुक्त बह लिम्फ इकट्ठा करने के लिए प्रवेशनी के अंत में (कदम 1.6 देखें)।
  17. अगला, पुनर्जलीकरण समाधान और / या योगों के निषेचन के लिए ग्रहणी cannulate।

ग्रहणी 4. cannulation

  1. पुनर्जलीकरण समाधान के साथ भरा एक सिरिंज (जैसे, 10 एमएल) के लिए ग्रहणी प्रवेशनी संलग्न।
  2. खींच कोमल नीचे पर पेट से पता चलता है, जो छोटी आंत के खंड (अधिक रक्त वाहिकाओं के साथ) उज्ज्वल गुलाबी के रूप में ग्रहणी को पहचानें।
  3. लगभग 2 सेमी पेट और ग्रहणी (जठरनिर्गम) के जंक्शन से नीचे ग्रहणी में एक छोटे से पंचर छेद बनाओ का उपयोग करएक बाँझ 23 जी सुई।
  4. पंचर छेद के माध्यम से ग्रहणी प्रवेशनी की जम्मू आकार झुका अंत डालें। Cyanoacrylate गोंद की एक बूंद के साथ जगह में सुरक्षित है।
  5. एक प्रेरणा पंप में लोड पुनर्जलीकरण सिरिंज प्रवेशनी संलग्न करके चूहे के जलयोजन शुरू। साहित्य के अनुसार पुनर्जलीकरण दरों की सीमा होती है 0.5-3 मिलीलीटर / घंटा 15,25।
  6. लसीका और ग्रहणी केन्युलेशन के पूरा होने के बाद, sutures के साथ पेट की मांसपेशियों की दीवार में चीरा बंद करें। तब चीरा के पक्ष के साथ ऊतक चिपकने वाला (Cyanoacrylate) की कुछ बूँदें लागू करने और एक साथ चीरा के दोनों किनारों पर त्वचा pinching द्वारा त्वचा चीरा बंद करें।

कैरोटिड धमनी के 5. cannulation

कैरोटिड धमनी केन्युलेशन पहले या mesenteric लिम्फ वाहिनी के केन्युलेशन के बाद किया जा सकता है। कुछ ऑपरेटरों से पहले पीओ को कम करने के लिए इतनी के रूप में लसीका वाहिनी cannulating को मन्या धमनी cannulate करना पसंद करते हैंपशु जब चलती tentially लिम्फ प्रवेशनी dislodging।

  1. धमनी में डालने के लिए ट्यूबिंग के हिस्से की पहचान करने के उठाव सिरे से कैरोटिड धमनी प्रवेशनी पर 2.5 सेमी एक निशान रखें। विरोधी कौयगुलांट समाधान के साथ भरा एक सिरिंज से जुड़ी एक 23 या 25 जी सुई के लिए (उठाव के बिना यानी,) प्रवेशनी के दूसरे छोर से कनेक्ट और विरोधी कौयगुलांट समाधान कोई हवा अंतराल मौजूद हैं सुनिश्चित करने के साथ प्रवेशनी भरें।
  2. केन्युलेशन सुविधा के लिए, ऑपरेटर की ओर इशारा करते हुए बढ़ाकर गर्दन और सिर के साथ पृष्ठीय लेटना में संवेदनाहृत चूहा जगह है। कुछ ऑपरेटरों चूहे की पूंछ ऑपरेटर की ओर इशारा करते हुए के साथ इस तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए पसंद करते हैं कि ध्यान दें।
  3. बाण के समान विमान में श्वासनली के बाईं ओर से ऊपर त्वचा की परत के माध्यम से 1.5 सेमी अनुदैर्ध्य चीरा - एक 1 रखें।
  4. अंतर्निहित बनती गर्दन की मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए कुंद टिप संदंश का उपयोग चमड़े के नीचे संयोजी ऊतक काटना।
  5. गर्दन की मांसपेशियों को टी वापस लेनाओ (~ 1 सेमी त्वचा की सतह और स्पंदन नीचे स्थित) छोड़ दिया मन्या धमनी प्रकट करते हैं। कुंद विच्छेदन से धमनी से overlying संयोजी ऊतक साफ करें।
  6. ध्यान से सटे vagal तंत्रिका ट्रैक को नुकसान नहीं ख्याल रख रही है, कुंद ऊतक संदंश का उपयोग धमनी की एक ~ 1 सेमी खंड पृथक। खोलने और आसपास के ऊतकों और वेगस तंत्रिका से मुक्त करने के लिए धमनी के दोनों ओर के साथ खड़ी कुंद टिप संदंश बंद करके इस प्रदर्शन करते हैं।
  7. ठीक टिप संदंश का प्रयोग, मन्या धमनी के नीचे दो रेशम टांके धागा और पृथक धमनी खंड के प्रत्येक के अंत में उन्हें जगह है। चूहे के दिल और हंसली (चित्रा 3A) से ऑपरेटर और दूर करने के लिए सिवनी निकटतम बंद टाई।
  8. धमनी (3B चित्रा) के नीचे सीधे ठीक टिप संदंश की एक जोड़ी रखकर धमनी के माध्यम से रक्त के प्रवाह को रोक देना।
  9. ठीक टिप आईरिस कैंची का प्रयोग, धमनी (के बारे में 1/3 के ऊपर की सतह पर एक छोटा सा चीरा जगहरास्ते नीचे अलग क्षेत्र के ऊपर से)। Heparinised नमक के साथ धमनी की सतह पर किसी भी गिरा खून निकलवाने और धीरे कपास युक्तियों का उपयोग पोंछे।
  10. घुमावदार टिप संदंश की एक जोड़ी के साथ धमनी में प्रवेशनी की नोक डालें। एक बार डाला, रक्त प्रवाह occluding सीधे ठीक टिप संदंश को हटाने और प्रवेशनी डालने के लिए वापस और अन्य लीक से खून रोकने के लिए धमनी के अंदर प्रवेशनी धारण करने के लिए दो संदंश की जोड़ी, एक का उपयोग कर धमनी में प्रवेशनी 2.5 सेमी अग्रिम।
  11. धमनी के अंदर प्रवेशनी पकड़ और रक्त प्रवाह को रोक देना कदम 5.8 में धमनी के नीचे रखा गया था कि सीधे ठीक टिप संदंश दूर करने के लिए एक छोटे से धमनी दबाना का प्रयोग करें।
  12. प्रवेशनी में विरोधी कौयगुलांट समाधान इंजेक्शन और रक्त की एक छोटी राशि (चित्रा -3 सी) वापस ड्राइंग द्वारा प्रवेशनी की प्रत्यक्षता की पुष्टि करें। तब थक्कारोधी समाधान के साथ प्रवेशनी फ्लश और एक लाइटर की लौ या एक प्रवेशनी प्लग का उपयोग अंत सील।
  13. वें टाईकदम 5.8 में धमनी के तहत रखा दो टांके के साथ जगह में ई प्रवेशनी।
  14. धमनी दबाना निकालें और धमनी और प्रवेशनी चारों ओर एक तिहाई सीवन सुरक्षित। Sutures के साथ घाव गर्दन को बंद करें।

6. शल्य चिकित्सा के बाद की अवधि और निर्माण आसव

  1. संज्ञाहरण के तहत और गर्म पैड पर चूहे बनाए रखने के लिए जारी रखें।
  2. Cannulations के पूरा होने के बाद कम से कम 0.5 घंटे के लिए ग्रहणी में पुनर्जलीकरण समाधान के अर्क के माध्यम से चूहा rehydrate। केन्युलेशन निम्नलिखित प्रारंभिक अवधि के दौरान - (0.5 मिलीग्राम / घंटा ~ 0.1) और जल्द ही एक स्थिर आधारभूत की वृद्धि लसीका प्रवाह की दर में कमी का निरीक्षण करें (0.4-2.5 मिलीलीटर / घंटा पुनर्जलीकरण दर पर निर्भर करता है)।
  3. वसूली की अवधि के बाद, प्रवेशनी के माध्यम से ग्रहणी में (लिपिड, दवाओं, आदि से युक्त) ब्याज के निर्माण दिखे। वैकल्पिक रूप से, निर्माण के प्रवाह की दर को विनियमित करने के लिए एक प्रेरणा पंप का उपयोग करें। नोट: प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित में जानवरों anaes रहनासर्जरी और लसीका संग्रह अवधि के दौरान thetised और अतिरिक्त पीड़ाशून्यता की आवश्यकता नहीं है कि इस तरह के संज्ञाहरण के तहत euthanised कर रहे हैं। प्रोटोकॉल संशोधित किया गया है और जानवरों उपयुक्त एनलजेसिया और पोस्ट ऑपरेटिव केयर की आवश्यकता होगी तो चेतना हासिल करने के लिए सक्षम हैं, तो।
  4. सूत्रीकरण निषेचन के पूरा होने पर निर्जलीकरण को रोकने के लिए ग्रहणी में सामान्य नमक के साथ 1.5-3 मिलीलीटर / घंटा की दर से चूहे rehydrate जारी है।
  5. आवश्यकता के रूप में पेट के निचले हिस्से पर कोमल नीचे धक्का के माध्यम से मूत्राशय से (2.3 कदम के अनुसार) तापमान बनाए रखने के लिए 37˚C गरम शल्य पैड पर एक्सप्रेस मूत्र चूहा रखने के लिए और कदम 2.2 के अनुसार (नेत्र मरहम हर घंटे पुन: लागू करने के लिए आगे बढ़ें। 3)। पशु प्रक्रिया के बाद होश में आने के लिए है अगर नियमित रूप से शरीर की स्थिति में परिवर्तन की सिफारिश की है।

लसीका और रक्त के नमूनों की 7. संग्रह लिपिड और दवा अवशोषण का आकलन करने के लिए

  1. लगातार में लिम्फ लीजिएविरोधी कौयगुलांट युक्त ट्यूबों। आवश्यक समय के अंतराल पर बदले ट्यूब (उदाहरण के लिए, प्रति घंटा)।
  2. निर्धारित समय बिंदुओं पर रक्त के नमूने ले लीजिए।
    1. वापस लगभग सील अंत से 2 सेमी प्रवेशनी झुकने से प्रवेशनी के माध्यम से रक्त के प्रवाह को रोक देना। सील अंत काट या प्रवेशनी प्लग निकाल कर प्रवेशनी खोलना।
    2. रक्त पूरे प्रवेशनी भरता है जब तक एक खाली सिरिंज का प्रयोग, प्रवेशनी से heparinised खारा वापस ले लें।
    3. एक नया खाली सिरिंज का प्रयोग, विरोधी कौयगुलांट युक्त एक ट्यूब में रक्त और जगह की वांछित मात्रा वापस ले लें।
    4. पहली सिरिंज का उपयोग करना, अनावश्यक खून की कमी को कम करने के लिए नमूना पहले लिया खून की जगह। यह सीधा कोई हवाई बुलबुले प्रवेशनी में प्रवेश सुनिश्चित करना है कि पकड़े जबकि इंजेक्शन से पहले, सिरिंज झटका।
    5. एक सिरिंज का प्रयोग, विरोधी कौयगुलांट समाधान के साथ चूहे से हटा रक्त की मात्रा की जगह। किसी भी थक्का सकता है शेष के रूप में कोई अवशिष्ट रक्त प्रवेशनी में दिख रहा है कि यह सुनिश्चित करेंऔर प्रवेशनी ब्लॉक।
    6. बेंड प्रवेशनी unsealed अंत से लगभग 2 सेमी रक्त प्रवाह अवरुद्ध और सिरिंज दूर करने के लिए। एक लाइटर की लौ या एक प्रवेशनी प्लग का उपयोग, प्रवेशनी reseal।
  3. चूहे से रक्त और लसीका संग्रह के पूरा होने पर,> 100 मिलीग्राम / किग्रा सोडियम pentobarbitone की intraperitoneal प्रशासन के माध्यम से चूहा euthanize।
  4. हर बार की अवधि के दौरान एकत्र लिम्फ की बड़े पैमाने पर मापने के द्वारा लसीका प्रवाह की दर का निर्धारण करते हैं।
  5. लिपिड और नशीली दवाओं के अवशोषण क्षमता का आकलन करने के लिए, उदाहरण के लिए, एचपीएलसी, एचपीएलसी एमएस या वाणिज्यिक किट का उपयोग कर के लिए, लसीका और रक्त का प्रयोग करने में दवा और लिपिड की एकाग्रता उपाय।
  6. एकत्र मापा सांद्रता और लसीका की मात्रा के उत्पाद से लसीका में दवा और लिपिड की जन परिवहन की गणना।

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Representative Results

एक प्रतिनिधि प्रयोग के परिणाम चित्रा 4 और 5 चित्रा में दिखाए जाते हैं mesenteric लिम्फ केन्युलेशन मॉडल का उपयोग आंतों प्रसव के बाद लसीका प्रणाली के माध्यम से संचयी हद तक और लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की दर quantitate करने के लिए। इस प्रयोग में, मॉडल lipophilic के 200 माइक्रोग्राम प्रति बफर फॉस्फेट में 5.6 मिलीलीटर 5 मिमी की सोडियम taurocholate में छितरी हुई है और 7.1 मिलीग्राम 2-monoolein - दवा halofantrine 40 मिलीग्राम ओलिक (5 μCi 14 सी-ओलिक एसिड 2 सहित) एसिड युक्त तैयार करने में दो घंटे से अधिक चूहों के ग्रहणी में दिलाई खारा पीएच 6.9। सूत्रीकरण प्रशासन के बाद चूहों 2.8 मिलीग्राम / ग्रहणी में संचार सामान्य नमक के साथ घंटा की दर से rehydrated थे। लिम्फ 10 घंटा के लिए हर घंटे बदल ट्यूबों में लगातार एकत्र किया गया था। सभी एक ही compon युक्त तैयार करने के लिए पहले से वर्णित एक प्रोटोकॉल के अनुसार, सूत्रीकरण तैयार किया गया था, और प्रयोग का प्रदर्शनयह छोड़कर पिता 2-monoolein 43 शामिल नहीं किया था।

1.3 मिलीग्राम / घंटा - 4 चित्र में दिखाया गया है, इन प्रयोगात्मक शर्तों में सफलतापूर्वक cannulated चूहों के लिए मतलब लसीका प्रवाह की दर 0.4 के बीच थी। केन्युलेशन निम्नलिखित 3 घंटा और फिर वृद्धि हुई - कुछ चूहों में लसीका प्रवाह की दर पहले 1 में से थोड़ा कम था। यह आमतौर पर लसीका केन्युलेशन निम्नलिखित देखा जाता है। इसके अलावा एक असफल प्रयोग के लिए लसीका प्रवाह की दर 4 चित्र में दिखाया गया है। इस मामले में प्रवाह की दर वसूली अवधि के दौरान सफल प्रयोगों में देखा है कि अधिक से काफी कम बने रहे। इसी तरह, ट्राइग्लिसराइड और halofantrine की संचयी लसीका परिवहन असफल प्रयोग (चित्रा 5 ए और बी) में काफी कम था। सफल समूह में मतलब संचयी halofantrine परिवहन खुराक की 15.1% थी, संचयी ट्राइग्लिसराइड परिवहन 61 10 घंटा से अधिक मिलीग्राम और प्रशासित आर के अनुपात थालसीका में पहुँचाया adiolabelled बहिर्जात लिपिड खुराक 54% (चित्रा 5C) था। इन मूल्यों को दो-monoolein 43 (1 टेबल) के अभाव के अलावा एक ही घटक है कि निहित एक समान तैयार करने के लिए पहले से देखा है कि काफी अलग नहीं हैं। इस monoglyceride के एक स्रोत के अभाव में फैटी एसिड से युक्त योगों monoglyceride होते हैं जो उन लोगों के लिए लिम्फ में इसी प्रकार के लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन का समर्थन कर सकते हैं कि पता चलता है। इस परिणाम चर्चा अनुभाग में आगे बताया गया है।

चित्रा 5D halofantrine और प्रशासन के बाद समय के साथ लसीका में ट्राइग्लिसराइड परिवहन की दर के लिए प्रतिनिधि डेटा से पता चलता है। लसीका में दोनों ट्राइग्लिसराइड और नशीली दवाओं के परिवहन दर लिपिड और दवा प्रशासन के बाद कुछ घंटों के चोटियों और फिर आधारभूत स्तर के लिए आए। के रूप में, दवा transpor की दर आंतों लसीका लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन प्रयोगों में विशिष्ट हैदवा के रूप में ट्राइग्लिसराइड परिवहन के लिए देखा है कि हर बार की अवधि के दर्पण के दौरान लिम्फ में टी ट्राइग्लिसराइड अमीर लिपो प्रोटीन के साथ मिलकर लिम्फ में ले जाया जाता है।

चित्र 1
चित्रा 1. एक मन्या धमनी या लिम्फ प्रवेशनी की beveled टिप के आकार, और एक ग्रहणी प्रवेशनी की जम्मू के आकार का beveled टिप की चित्रात्मक प्रस्तुति।

चित्र 2
चित्रा (ए) लसीका वाहिनी cannulate करने के लिए तैयार करने में मुंडा पेट, (बी) के पेट की मांसपेशियों दीवार एक सीधे 4 सेमी चीरा लसीका वाहिनी का उपयोग करने की सही दिशा को midline से विस्तार देने के साथ खुला, और 2. फोटो (सी ) पीले सर्कल में बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी () सही गुर्दे को सीधा। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा धमनी के नीचे रखा सीधे ठीक टिप संदंश की एक जोड़ी के साथ occluded बंद बंधे ऑपरेटर, (बी) पृथक मन्या धमनी और रक्त का प्रवाह करने के लिए करीब एक साथ दो रेशम sutures के साथ पृथक (ए) मन्या धमनी की 3. फोटो, और (सी) जगह में प्रवेशनी और प्रत्यक्षता के साथ एक मन्या धमनी वापस रक्त की एक छोटी राशि ड्राइंग द्वारा जाँच की जा रही है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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समय। चूहे से अधिक mesenteric लिम्फ प्रवाह की दर (μl / घंटा) के लिए चित्रा 4. प्रतिनिधि डेटा 200 माइक्रोग्राम प्रति halofantrine, (2 μCi 14 सी-ओलिक एसिड) के साथ 40 मिलीग्राम ओलिक एसिड और 7.1 मिलीग्राम 2-monoolein 5.6 में से युक्त एक सूत्रीकरण दिलाई गई 2 घंटा - 0 से फॉस्फेट बफर खारा में 5 मिमी सोडियम taurocholate (पीएच 6.9) के मिलीलीटर। दिखाया गया डेटा N के लिए SEM के ± मतलब कर रहे हैं = 3 सफल प्रयोगों (बंद हलकों, ●) और एन = एक असफल परिणाम (खुला त्रिकोण, Δ)।

चित्रा 5
Mesenteric लिम्फ में लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन के लिए चित्रा 5. प्रतिनिधि डेटा। (ए) मॉडल दवा halofantrine (HF,% खुराक), (ख) ट्राइग्लिसराइड (टीजी, एमजी) और (सी) बहिर्जात फैटी एसिड (% डॉस की संचयी परिवहनई), और के परिवहन की दर (डी) टीजी (एमजी / घंटा) और HF μCi 14 2 के साथ 200 माइक्रोग्राम प्रति halofantrine, 40 मिलीग्राम ओलिक एसिड (युक्त तैयार करने के प्रशासन के बाद समय के साथ mesenteric लिम्फ में (% खुराक / घंटा) सी-ओलिक एसिड) और 0 से फॉस्फेट बफर खारा में 5.6 मिलीलीटर 5 मिमी सोडियम taurocholate (पीएच 6.9) में 7.1 मिलीग्राम 2-monoolein - 2 घंटा। दिखाया गया डेटा N के लिए SEM के ± मतलब कर रहे हैं = 4 सफल प्रयोगों (बंद हलकों, ●) और एन = एक असफल परिणाम (खुला त्रिकोण, Δ)। Exogenous फैटी एसिड परिवहन असफल प्रयोग में मापा जाता है लेकिन असफल प्रयोगों में आम तौर पर कम है नहीं किया गया था। असफल प्रयोग के लिए डेटा स्पष्टता के लिए पैनल डी से छोड़ा जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

एम के बिनाonoolein 2-monolein के साथ
मीन SEM के मीन SEM के
Halofantrine (% खुराक) 15.1 0.8 15 1.6
ट्राइग्लिसराइड (एमजी) 67 4 61 6
कुल फैटी एसिड (μmol) 261 16 248 23
Exogenous ओलिक एसिड (μmol) 82 5 65 6
अंतर्जात फैटी एसिड (μmol) 180 17 183 28

40 मिलीग्राम ओलिक एसिड युक्त योगों में लसीका वाहिनी cannulated चूहों mesenteric के लिए 200 माइक्रोग्राम प्रति halofantrine के प्रशासन के बाद 10 घंटा से अधिक संचयी लसीका परिवहन डेटा की तालिका 1. तुलना (containinसाथ और 7.1 मिलीग्राम 2-monoolein। डेटा के बिना फॉस्फेट बफर खारा (पीएच 6.9) में 5 मिमी सोडियम taurocholate में emulsified जी एक μCi 14 सी-ओलिक एसिड) एन = 4 चूहों के लिए ± SEM के मतलब का प्रतिनिधित्व करते हैं। कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण मतभेद दो समूहों के बीच देखा जाता है।

एक दो-monoolein रीढ़ की हड्डी से जुड़ी ओलिक एसिड लिम्फ में मापा बहिर्जात ओलिक एसिड परिवहन के लिए जिम्मेदार नहीं है के रूप में इस अंतर्जात फैटी एसिड परिवहन का एक सटीक उपाय नहीं है 2-monoolein साथ dosed समूह में।

बी 2-monoolein बिना dosed समूह में halofantrine और कुल फैटी एसिड परिवहन के लिए डेटा पहले से संदर्भ में 43 की चित्रा 5 में प्रकाशित हुआ था और मेज प्रारूप में यहाँ reproduced है।

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Discussion

चूहे mesenteric लिम्फ केन्युलेशन मॉडल विभिन्न पदार्थों की चुनौती के लिए एकाग्रता और विभिन्न कोशिकाओं और आंत से लसीका में और जवाब में पाए जाते हैं कि इन में परिवर्तन (जैसे लिपिड और दवाओं के रूप में) के अणुओं के परिवहन की दर की प्रत्यक्ष मात्रा का ठहराव के लिए सक्षम बनाता (आहार , प्रतिजन, दवाओं, योगों, आदि) 10,27 और रोग (कैंसर, वायरस, कोलाइटिस, इंसुलिन प्रतिरोध, आदि) 5-7। लसीका में एकत्र घटक भी आगे अतिरिक्त प्रयोगों में इस्तेमाल किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, कोशिकाओं 44, fractionated लिपो प्रोटीन और लसीका या ऐसे लिपो प्रोटीन या कोशिकाओं के रूप में उसके घटकों, दवाओं, radiolabels और फ्लोरोसेंट जांच सहित मार्कर के साथ भरी हुई सुसंस्कृत हो सकता है। ये तो अधिक सीधे उनके कार्य, चयापचय, निकासी और / या ऊतक स्वभाव पैटर्न 45-47 मूल्यांकन करने के लिए प्राप्तकर्ता जानवरों में फिर से संचार किया जा सकता है। चूहे लिम्फ केन्युलेशन मॉडल अन्य संगठनों पर कई फायदे हैंईआर में इन विट्रो, सीटू, सिलिको में, और इन विवो मॉडल में शुरूआत में वर्णित किया गया है। सबसे महत्वपूर्ण बात, केन्युलेशन लसीका तरल पदार्थ में घटकों की पूरी मात्रा के लिए सीधी पहुँच सक्षम बनाता है जो केवल विधि है। एक अनुभवी ऑपरेटर के हाथों में प्रदर्शन किया जब मॉडल> ​​80% की, मजबूत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और प्रयोगात्मक सफलता दर हासिल किया जा सकता है। हालांकि, सर्जिकल तकनीक शुरू में विशेष रूप से तकनीक से परिचित नहीं है कि एक प्रयोगशाला में, मास्टर करने के लिए मुश्किल हो सकता है।

कई कदम mesenteric लिम्फ केन्युलेशन मॉडल की सफलता के लिए महत्वपूर्ण हैं। पहली शल्य चिकित्सा उपकरणों और प्रवेशनी प्रकार और तैयारी का सही विकल्प है। हमारी प्रयोगशाला आयाम आयुध डिपो 0.8 एक्स आईडी 0.5 मिमी के साथ पीई cannulas उपयोग करता है। हालांकि, अन्य प्रयोगशालाओं में एक ही आयाम 15 के परमवीर चक्र cannulas के साथ सफलता का अनुभव किया है। प्रवेशनी और की नोक bevelling भी रोकने में मदद करता है एक विरोधी कौयगुलांट में यह पूर्व भिगोनेका रोड़ा, और भीतर के थक्के के गठन, प्रवेशनी के बाद प्रविष्टि (कदम 3.13)। कुछ ऑपरेटरों विशेष रूप से महत्वपूर्ण लगता है कि शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया का पहला कदम लसीका वाहिनी (कदम 3.10) के ऊपर संयोजी और वसा ऊतकों की परतों को साफ करने के ख्याल रख रही है। इस ऊतक और लसीका वाहिनी के बीच बजाय लसीका वाहिनी में प्रवेशनी की प्रविष्टि से बचने के लिए मदद करता है। लसीका वाहिनी नाजुक है और क्षति के लिए आसान है के रूप में हालांकि, इस सफाई कदम मुश्किल है। दूसरों को एक माइक्रोस्कोप आवश्यक नहीं है लगता है, हालांकि कुछ के लिए, इस कदम और प्रवेशनी की प्रविष्टि सबसे सफलतापूर्वक एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप की सहायता से पूरा कर रहे हैं। वाहिनी में प्रवेशनी डालने जब दिशा और bevelled टिप करने के लिए प्रविष्टि रिश्तेदार की गहराई पोत दीवार (कदम 3.12) द्वारा occluded किया जा रहा है प्रवेशनी को रोकने के क्रम में कुछ विचार की आवश्यकता है। प्रत्येक ऑपरेटर अपने स्वयं के व्यक्तिगत पसंद को खोजने के लिए जाता है। इसके अलावा महत्वपूर्ण सीए के भीतर हवा बुलबुला गठन से बचाव हैnnula प्रविष्टि के दौरान हवा अंतराल लिम्फ के मुक्त प्रवाह (कदम 3.12) के लिए दबाव वापस लागू के रूप में। अंत में, जगह में प्रवेशनी सुरक्षित करने के लिए पशु चिकित्सा चिपकने के आवेदन प्रवेशनी टिप (कदम 3.14) पतन और रोक देना पोत पैदा कर सकता है वाहिनी के शीर्ष पर सीधे रखा चिपकने के रूप में वाहिनी में प्रविष्टि के बिंदु से नीचे होना चाहिए।

एक सर्जरी सफल है के रूप में सबसे आसान प्रारंभिक गाइड लसीका के प्रवाह की दर है। प्रवेशनी जगह लिम्फ में एक बार आम तौर पर पहले 30 मिनट में धीरे-धीरे प्रवाह शुरू होता है और फिर बढ़ जाती है। आमतौर पर, चूहों में सफल cannulations के लिए प्रवाह दरों> 250 जी पहले घंटे में> 0.1 मिलीग्राम / घंटा कर रहे हैं और 4 चित्र में दिखाया गया है तो स्थिर राज्य में> 0.4 मिलीग्राम / घंटा के लिए वृद्धि हुई है। इस कोर्स के आधार पर भिन्न हो सकता है । इस वजह से हो सकता है प्रयोगात्मक हालत समस्या निवारण के संदर्भ में, कोई लिम्फ प्रवेशनी या प्रवाह की दर के माध्यम से बह रहा है अगर कम है:

    प्रवेशनी वाहिनी में सही ढंग से नहीं डाला गया था
  1. प्रवेशनी वाहिनी में है, लेकिन पोत दीवार की तरफ से occluded
  2. प्रवेशनी वाहिनी में है, लेकिन गलत स्थिति में लागू चिपकने वाला द्वारा occluded
  3. प्रवेशनी वाहिनी में है और प्रवेशनी में एक हवाई बुलबुले का प्रवाह धीमा है
  4. एक थक्का प्रवेशनी के भीतर का गठन किया है

सावधान निरीक्षण आमतौर पर अंतर्निहित कारक पता चलता है। ऑपरेटर प्रवेशनी पहली जगह में सही ढंग से नहीं रखा गया था मानना ​​है कि अगर फिर से प्रविष्टि आवश्यक है तो (यानी, लिम्फ कभी नहीं बह रहा था)। प्रवेशनी सही जगह में होना प्रतीत होता है, तो जाँच करने के लिए पहली कारक एक हवाई बुलबुले या थक्का मौजूद है या नहीं। एयर बुलबुले आम तौर पर लसीका प्रवाह और अस्थायी रूप से धीमी गति से प्रवाह के रूप में प्रवेशनी से गुजरना होगा। यह, उदाहरण के लिए, से जुड़ी एक 25 जी सुई का उपयोग प्रवेशनी पर वापस ड्राइंग द्वारा एक 1 मिलीलीटर सिरिंज हवाई बुलबुले या थक्के को हटाने के लिए कभी कभी संभव है। कोई हवाई बुलबुले या थक्का यदि वहाँ यह चूहा फिर से स्थिति और / या मोड़ या थोड़ा प्रवेशनी खींचने की कोशिश करने के लिए उपयोगी हो सकता है। यह कभी कभी यह पोत दीवार के खिलाफ अवरुद्ध नहीं है कि इस तरह के प्रवेशनी फिर से संगठित कर सकते हैं। कभी कभी के साथ या प्रवेशनी के छोटे आंदोलन के बिना चिपकने वाला हटाने लिम्फ भी फिर से प्रवाह करने के लिए सक्षम बनाता है। सब विफल रहता हालांकि, अगर प्रवेशनी reinserted की जरूरत है। प्रवेशनी पहला प्रयास पर सही ढंग से नहीं डाला गया था जब हमारे अनुभव में प्रयोगों कम सफल रहे हैं। हालांकि, शल्य बचाव संभव है। पैदा कर सकते हैं कि एक और जटिलता की वजह से चूहों के बीच शारीरिक विचरण करने केन्युलेशन में कठिनाई है। उदाहरण के लिए, mesenteric लिम्फ वाहिनी कभी कभी एक अजीब दिशा में गुजरता है या बड़ा बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी को मेसेंतेरिक धमनी के विपरीत दिशा में एक सहायक लसीका वाहिनी है। मामले में है (छोटी आंत से बह लिम्फ की पूरी मात्रा के संग्रह की आवश्यकता होती है, जो प्रयोगों में) lymphatics के माध्यम से आंत से कुल लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन का आकलन करते समय, सहायक लसीका वाहिनी सभी लिम्फ बेहतर लसीका वाहिनी को निर्देश दिया है कि इस तरह के occluded की जरूरत है। इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए मुश्किल है, लेकिन गौण वाहिनी के चारों ओर एक सिवनी बांधने या गौण वाहिनी विच्छेद और पशु चिकित्सा चिपकने वाला (कदम 3.6) के साथ यह occluding द्वारा प्रयास किया जा सकता है। एक सहायक लसीका वाहिनी की उपस्थिति लसीका दवा परिवहन प्रयोगों में प्रयोगात्मक विफलता में परिणाम है कि मुख्य कारकों में से एक है। सहायक पोत पूरी तरह से occluded नहीं है, तो लसीका प्रवाह और लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की उम्मीद की तुलना में काफी कम हैं।

यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल में पशु लिम्फ संग्रह अवधि के दौरान anesthetized बनी हुई है। (बल्कि नीचे वर्णित के प्रति जागरूक मॉडल की तुलना में) से anesthetized चूहे मॉडल सर्जरी के रूप में प्रयोगात्मक throughput के बढ़ जाती है और प्रयोग नहीं बल्कि कई दिनों से एक और शल्य चिकित्सा सफलता आर में आयोजित किया जा सकता हैयह स्थिर पशुओं में प्रवेशनी प्रत्यक्षता बनाए रखने के लिए आसान है, के रूप में खाया अधिक है। अनेस्थेसिया सैद्धांतिक रूप से खाली पेट, आंतों लिपिड प्रसंस्करण और लसीका प्रवाह और परिवहन को कम कर सकते हैं। हमारे अनुभव में, हालांकि, लसीका लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन surfactants के साथ छितरी पच-पूर्व और पूर्व छितरी वाहनों (जैसे, फैटी एसिड और monoglyceride micellar प्रणालियों के भीतर (बाईपास पेट खाली करने के लिए) सीधे ग्रहणी में दवा दिलाई anesthetized चूहों में समान हैं ) एक बराबर ट्राइग्लिसराइड 21,23,27 में पेट में मौखिक gavage के माध्यम से दवा दिलाई होश में चूहों की तुलना में। दरअसल, पिछले 10 वर्षों में हमारी प्रयोगशाला में आंतों लसीका दवा परिवहन प्रयोगों के बहुमत की वजह से हासिल किया जा सकता है कि उच्च throughput करने से anesthetized मॉडल में आयोजित किया गया है। इन प्रयोगों में हम सबसे अक्सर फैटी (जैसे, ओलिक एसिड) एसिड और surfactant 43 युक्त योगों में दवाओं दिलाई है।फैटी एसिड आंतों लसीका लिपो प्रोटीन में शामिल करने के लिए पहले ट्राइग्लिसराइड्स में संश्लेषित कर रहे हैं और इस ट्राइग्लिसराइड का ग्लिसरॉल रीढ़ की हड्डी (यानी 2-monoglyceride या ग्लिसरॉल-3-फास्फेट) के लिए फार्म घटकों के स्रोत की आवश्यकता है। यह एक ग्लिसरॉल स्रोत के अभाव में फैटी एसिड की प्रशासन कम लसीका परिवहन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं कि पता चलता है। फैटी एसिड का प्रशासन, तथापि, बहिर्जात प्रशासित फैटी एसिड और लसीका लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन से 43 अंतर्जात लिपिड के योगदान के प्रत्यक्ष गणना सक्षम बनाता है। साथ ही, 2-monoglyceride महंगा है और यह आसानी से आंतों की लुमेन में ग्लिसरॉल को पच जाता है, जो एक-monoglyceride को isomerises के रूप में आम तौर पर अस्थिर है। यहां बताया अध्ययन में हम आगे कहा कि लसीका लिपिड का प्रदर्शन और नशीली दवाओं के परिवहन या तो जनसंपर्क में एक फैटी एसिड (जैसे, ओलिक एसिड) और surfactant (पित्त नमक) के साथ मॉडल दवा halofantrine के प्रशासन के बाद बराबर है तैयारesence या ग्लिसरॉल स्रोत 2-monoolein (तालिका 1) के अभाव। ग्लिसरॉल के अंतर्जात सूत्रों का कहना है इस प्रकार बराबर लसीका प्रवाह और लिपिड और एक ग्लिसरॉल स्रोत के अभाव में फैटी एसिड होता है (उदाहरण के लिए, ओलिक एसिड) के साथ इस मॉडल दवा के प्रशासन के बाद दवा परिवहन का समर्थन करने के लिए पर्याप्त दिखाई देते हैं। यह प्रतिनिधि लसीका परिवहन डेटा सरल फैटी एसिड योगों के साथ प्राप्त किया जा सकता है कि आत्मविश्वास प्रदान करता है।

जरूरत पड़ने पर संवेदनाहृत मॉडल आसानी से एक सचेत मॉडल के लिए बढ़ा दिया गया है। होश में मॉडलों में योगों पेट में सीधे gavaged जा सकता है या ग्रहणी या नसों में संचार, प्रत्यक्ष तुलना में अधिक physiologically प्रासंगिक माना जा सकता है गैर-लिम्फ cannulated होश में जानवरों और परिणामों में आयोजित फार्माकोकाइनेटिक पढ़ाई करने के लिए किया जा सकता है। होश में पशुओं में अनुमति दी लंबे समय अवधि भी डॉ के लिए और अधिक पूरा फार्माकोकाइनेटिक प्रोफाइल के संग्रह की इजाजत देने का लाभ दिया हैसंवेदनाहृत प्रयोगों में, खून प्रोफाइल को विशेष रूप से लंबे समय से आधा जीवन दवाओं के लिए, अक्सर अधूरी हैं, जबकि रक्त में यूजी सांद्रता। ऊपर वर्णित के रूप में, हालांकि, होश में लिम्फ cannulated अध्ययन के लिए सफलता की दर कम है और प्रयोगों को पूरा करने के लिए लंबे समय तक ले। साहित्य में वर्णित होश में लिम्फ केन्युलेशन मॉडल के दो प्रकार के होते हैं। लसीका केन्युलेशन सर्जरी के बाद होश में रोका मॉडल 15 में, पशु बस अपने सामने पर कर दिया जाता है और एक संग्रह ट्यूब में externalised और डाला लिम्फ प्रवेशनी के साथ प्रयोग के शेष के लिए एक उपयुक्त संयम में रख दिया गया। जानवर तो होश में आने और शल्य प्रक्रिया हे / एन से उबरने के लिए अनुमति दी है। इस मॉडल के साथ सफलता की दर अनुभवी ऑपरेटरों के हाथ में बहुत अच्छा है, लेकिन यह लिम्फ संग्रह के लिए आवश्यक समय की लंबी अवधि के लिए जानवरों को नियंत्रित करने के लिए नैतिकता निकासी प्राप्त करने के लिए मुश्किल हो सकता है। एक वैकल्पिक मॉडल लिम्फ एकत्र किया जाता है, जहां हैसचेत और स्वतंत्र रूप से घूम रहा चूहों से। यह मॉडल पहले से 25 विस्तृत किया गया है। इस मॉडल में लंबे cannulas mesenteric लिम्फ वाहिनी, ग्रहणी और मन्या धमनी में डाला जाता है। cannulas तो गर्दन के पीछे exteriorized और एक कुंडा प्रणाली के माध्यम से रखा जाता है, त्वचा के नीचे नलिका कर रहे हैं। चूहे एक दोहन कुंडा से जुड़ी है और चेतना हासिल करने के लिए और शल्य प्रक्रिया हे / एन से उबरने के लिए अनुमति दी में रखा गया है। पशु एक चयापचय पिंजरे और लसीका और रक्त के नमूनों के भीतर मुक्त आवाजाही पिंजरे के बाहर externalised cannulas से एकत्र किया जा सकता है।

Mesenteric लिम्फ केन्युलेशन उनकी नवजात अवस्था में लिम्फ घटकों के प्रत्यक्ष मूल्यांकन सक्षम बनाता है जो केवल उपकरण बनी हुई है। सर्जरी के बड़े जानवरों और परिणाम प्रजातियों 27 के पार यथोचित तुलनीय दिखाई देते हैं, की तुलना में मॉडल कम महंगे छोटे और बड़े जानवरों की तुलना में कम जटिल है के रूप में लिम्फ केन्युलेशन सबसे अधिक बार चूहों में वर्णित है। चूहे मोडएल प्रयोगात्मक जरूरत है और सफलता की दर के अनुसार अनुभवी ऑपरेटरों के हाथों में उच्च है संशोधित किया जा सकता है। मॉडल भी विस्तार, आंतों लसीका घटकों के चयापचय या समारोह में, जांच करने के लिए इन विट्रो में या vivo अध्ययन में एक दूसरे के साथ मिलकर किया जा सकता है। एक बार mesenteric लिम्फ cannulated चूहे मॉडल इस प्रकार एकाग्रता, परिवहन, समारोह और (प्रणालीगत संचलन के लिए अंत में प्रवाह है और कई मामलों में) लसीका प्रणाली को आंत से सीधे गुजरती कि विभिन्न मापदंडों के चयापचय मूल्यांकन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है की स्थापना की।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sterile saline Baxter healthcare AHB 1307 Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50
70 % ethanol in water Any Any brand can be used
Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4) Livingstone International JJ60243L Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=JJ60243L
Betadine solution Livingstone International BU0510 Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=BU0510
Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml) PROVET VICTORIA  KETA I 1 http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml) PROVET VICTORIA  TRO-3828 http://www.provet.com.au/
ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml) PROVET VICTORIA  VTG-DACP010020 http://www.provet.com.au/
Sodium pentobarbitone PROVET VICTORIA  24529 Any brand can be used. Example here is Lethabarb® 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au
Heparin (35000I.U. in 35 mL) Sigma Pharmaceuticals 337220 http://sigmaco.com.au/
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate Sigma-Aldrich E1644 Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma. 
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm Microtube extensions PE8050 Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96 x0.58 mm, 30 m
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm Microtube extensions PE9658 Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8 x0.5 mm, 30 m
Ruler Any Any brand can be used
Markers Any Any brand can be used
Cigarette lighter Any Any brand can be used
Veterinary adhesive Any Any brand can be used
23 gauge needles Livingstone International DN23GX0.75LV Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=
6&search=DN23GX0.75LV
25 gauge needles Livingstone International DN25GX1.0LV Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search=
DN25GX1.0LV
1 ml syringe Livingstone International T3SS01TA Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=T3SS01TA
10 ml syringe Livingstone International T3SS10SA Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=T3SS10SA
Gauze swabs Livingstone International GSC075 Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5x7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=GSC075
Cotton buds Livingstone International CTAST075DP Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=CTAST075DP
Heating pad Ratek WT1 Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.
Surgical light Harvard Apparatus 72-0215 with 72-0267 Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
-1_HAI_ProductDetail and  http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_
-1_HAI_ProductDetail___
Surgical microscope Zeiss 495005-0014-000 Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Silk suture Livingstone International DTSK163019F4 Any brand can be used. Example here is  

3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=DTSK163019F4
Scalpel blades Fine Science Tools (FST) 10020-00 Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Scalpel handle Fine Science Tools (FST) 10004-13 Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Small surgical scissors Fine Science Tools (FST) 14060-09 Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Forceps with serrated curved tip Fine Science Tools (FST) 11001-13 Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8x1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 x Iridectomy scissors Fine Science Tools (FST) 15000-08 Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16 
1 x Forceps with straight serated tip Fine Science Tools (FST) 11650-10 Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip Fine Science Tools (FST) 11251-10 Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x Forceps with smooth fine curved forceps Fine Science Tools (FST) 11063-07 Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
2 x Hemostats Fine Science Tools (FST) 13010-12 Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x Suture needle holder Fine Science Tools (FST) 12001-13 Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 x Artery clamp Fine Science Tools (FST) 18050-28 Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9x1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82
Oleic acid Sigma Aldrich O1008 When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU
14C-oleic acid Perkin  NEC317050UC  Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50µCi (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC
Sodium taurocholate Sigma Aldrich T4009 Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate ≥95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU
Halofantrine Glaxo Smith Kline Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline
Sodium phosphate monobasic Sigma Aldrich 71507 Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, >99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU
Sodium phosphate dibasic Sigma Aldrich 71643 Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU

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Mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulated चूहे मॉडल: आंतों लिम्फेटिक दवा परिवहन के आकलन के लिए आवेदन
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Trevaskis, N. L., Hu, L., Caliph, S. M., Han, S., Porter, C. J. H. The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport. J. Vis. Exp. (97), e52389, doi:10.3791/52389 (2015).

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