Civciv koryoallantoik membran (CAM) immün yetmezliklidir ve oldukça vaskülarizedir, bu da onu doğal bir in vivo tümör büyümesi ve anjiyogenez modeli yapar. Bu protokolde, CAM testi kullanılarak üç boyutlu, vaskülarize hepatosellüler karsinom (HCC) tümörlerinin büyütülmesi için güvenilir bir yöntem tanımlanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Civciv koriyoallantoik membran (CAM) CAM tümör implantasyonu için ideal bir sistem haline doğal bağışık yetmezliği ve çok kanlanan bir gübreleme gün sonra 7 gelişmeye başlar ve 12. gün olgunlaşır. Bundan başka, CAM tümör istilasını ve metastazını, çalışma için çekici bir model verme gibi, fibronektin, laminin, kolajen, integrin alfa (v) beta3 ve MMP-2 gibi hücre dışı matris proteinleri içerir. Bilim adamları uzun zamandır anjiyogenez bir model olarak kullanarak CAM fizyolojisi avantajlarından almış. Daha yakın zamanlarda, CAM assay'dir bazik in vitro çalışma ve daha karmaşık bir hayvan kanser modellerinde arasında bir köprü, muhtelif kanserler bakımından bir in vivo model sisteminde ksenograft olarak çalışmak için modifiye edilmiştir. CAM deneyi maliyet ve zaman etkin bir biçimde kullanılabilir biyolojik ilgili sisteminde tümör büyümesi, anti-tümör terapisi, ve pro-tümör molekül yollarının çalışması için izin verir. Burada, CAM xen gelişimini açıklarkadar% 93 embriyonik sağkalım oranları ve güvenilir tümör hepatosellüler karsinom (HCC) ve ograft modeli üç boyutlu, vaskülarize tümörlerin büyümesine yol açan take.
Giriş
Hepatosellüler karsinom (HCC) Dünyada 1 kanser ölümlerinin 3. önde gelen nedenidir. Şu anda HCC hastalarının sadece% 30 potansiyel küratif cerrahi tedavi 2 için uygundur, ve sistemik kemoterapi 3 etkili değildir. Bu nedenle yeni tedavilere HCC için acil bir karşılanmamış bir klinik ihtiyaç ve yeni maddelerin etkin bir test için uygun bir model sistemlerinde gelişme vardır. Tavuk koriallantoik zar (CAM) tahlili in vivo potansiyel anti-tümör ilaç test üretilebilir, uygun maliyetli ve hızlı, orta hacimli bir yöntem sağlar.
CAM tahlil anjiyogenez 4 incelemek için yaygın olarak ku....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Yumurta Kuluçka
- 8 günlük spesifik patojenden serbest embriyolu yumurtaların elde edilir.
- Yumurta tepsisi, yukarı bakacak damgalı biter dönen yumurta yerleştirin ve bir yumurta kuluçka içine döner tepsiye yerleştirin. 36 ° C de 48 saat ve% 50 nem yumurta inkübe edin.
2. CAM Damlama ve Yumurta Açılış
- Inkübatör yumurta toplamak. Yumurta rafa yerleştirin yumurta, yukarı tarafında damgalı ve laminer akış kaputu getirmek.
- Oda ve kaput ışıkları kapatın.
- CAM damarsal yanı sıra hava kesesi maruz yumurta Candler hafifçe yumurta damgalı ucunu tutun.
NOT: Yumurta Candler gelişen embr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Protokolde önemli adımlar Temsilcisi resimler burada gösterilmektedir. Şekil 1A gelişen embriyo, hava kesesi ve CAM damarsal görselleştirmek için Candler kullanımını gösterir. Şekil 1B-1C yaparak CAM bırakarak sürecini göstermek iki delik ve ardından güvenlik ampul kullanarak negatif basınç uygulayarak ve Şekil 1D bir başarıyla kalem işaretli delik altında büyük hava kabarcığı ile CAM düştü gösterir. Şekil 1E ve Şekil 1F gerekli hale ge.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol Çeşitli önemli adımlar büyük olasılıkla gelişmiş embriyonik hayatta yanı sıra tümör büyümesi artan güvenilirlik oluşturmaktadır. Hava kesesi için emme uygulayarak uzak kabuk CAM Damlama (yumurta, künt diseksiyon, vb albümin kaldırmak için bir iğne kullanarak) diğer mevcut yöntemlere göre daha az invaziv. Bu yöntem için gerekli olan iki küçük delik oluşturmak için steril bir itme pimi kullanılarak protokolünün en zor kısmıdır. Çok fazla güç kullanarak raptiye ile aşırı penetrasyon yoluyla CAM ve damarsal hasa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
A.S., araştırmacı tarafından başlatılan bir klinik araştırmayı desteklemek için Advaxis Pharmaceutical şirketinden fon alıyor.
Teşekkürler
A.S. kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH), Ulusal Diş ve Kraniyofasiyal Araştırma Enstitüsü (5R03DE021741-02) ve Ulusal Kanser Enstitüsü (1K08CA154963-01A1) tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir.
Howard Hughes Tıp Enstitüsü, HHMI Tıbbi Araştırma Görevlileri Programı aracılığıyla ML için fon sağladı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Premium kuluçkalık yumurtalar | Charles River N | /A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Yumurta kuluçka makineleri | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Döner yumurta tepsileri | GQF | 1611 Otomatik Yumurta Çevirici | |
| Yumurta mumcusu | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Dremel 100 15/16 kesme diskli döner alet | Dremel | 100-N/7 | |
| Steril forseps, itme pimi, diseksiyon makası, Scotch bant | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Kriyojenik şişeler, silikon rondelalı dış dişli | Corning | 430659 | |
| Clostridium histolyticum | Sigma | C9891'den |
Kaynaklar
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
