Dois fótons de imagem da Cellular Dynamics na Medula Espinhal Rato

Jason G. Weinger; Milton L. Greenberg; Melanie P. Matheu; Ian Parker; Craig M. Walsh; Thomas E. Lane; Michael D. Cahalan

doi:10.3791/52580

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Artigo de método

Dois fótons de imagem da Cellular Dynamics na Medula Espinhal Rato

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DOI:

10.3791/52580

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22 de fevereiro de 2015

Jason G. Weinger¹ , Milton L. Greenberg² , Melanie P. Matheu⁴ , Ian Parker³ , Craig M. Walsh¹ , Thomas E. Lane⁵ , Michael D. Cahalan²

¹Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics, University of California, Irvine, ³Neurobiology and Behavior, University of California, Irvine, ⁴University of California San Francisco Diabetes Center, University of California, San Francisco, ⁵Pathology, University of Utah

Neste artigo

Resumo

Uma nova ex vivo preparação para a imagem latente o mouse medula espinhal. Este protocolo permite a dois fotões imagiologia de interacções celulares vivos ao longo da medula espinal.

Resumo

A microscopia de dois fótons (2P) é utilizada para revelar a dinâmica celular e as interações profundas dentro de tecidos vivos e intactos. Aqui, apresentamos um método para imagens de células vivas na medula espinhal murina. Esta técnica é exclusivamente adequada para analisar a dinâmica das células precursoras neurais (NPC) após o transplante em medulas espinhais submetidas a distúrbios desmielinizantes neuroinflamatórios. Os NPCs migram para locais de dano axonal, proliferam, se diferenciam em oligodendrócitos e participam da remielinização direta. Os NPCs são, portanto, um tratamento terapêutico promissor para melhorar as doenças desmielinizantes crônicas. Como os NPCs transplantados migram para as áreas danificadas no lado ventral da medula espinhal, a imagem intravital tradicional de 2P é impossível e apenas informações sobre interações estáticas estavam disponíveis anteriormente usando abordagens de coloração histoquímica. Embora esse método tenha sido gerado para obter imagens de NPCs transplantados na medula espinhal ventral, ele pode ser aplicado a vários estudos de células transplantadas e endógenas em toda a medula espinhal. Neste artigo, demonstramos a preparação e a imagem de uma medula espinhal com axônios que expressam proteínas fluorescentes amarelas aprimoradas e NPCs transplantados com expressão de proteínas fluorescentes verdes aprimoradas.

Introdução

Modelos de ratos de desmielinização, incluindo a encefalomielite autoimune experimental (EAE) e infecção intracraniana com neuroadapted vírus da hepatite do camundongo (MHV), são excelentes ferramentas para estudar vias moleculares e interações celulares associados à doença. Eles têm conduzido a e suportado a eficácia de terapias farmacêuticas aprovado pela FDA, principalmente contra a cessação de autoimunidade e inflamação ^1. No entanto, uma vez que a remielinização endógeno falhou, as terapias actualmente aprovadas não eficaz para reparar lesões de desmielinização do sistema nervoso central. Portanto, terapias focadas no reparo nesta fase da doença são f....