Due fotoni Imaging di Cellular Dynamics nel midollo spinale del mouse

Jason G. Weinger; Milton L. Greenberg; Melanie P. Matheu; Ian Parker; Craig M. Walsh; Thomas E. Lane; Michael D. Cahalan

doi:10.3791/52580

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Articolo metodologico

Due fotoni Imaging di Cellular Dynamics nel midollo spinale del mouse

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DOI:

10.3791/52580

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22 febbraio 2015

Jason G. Weinger¹ , Milton L. Greenberg² , Melanie P. Matheu⁴ , Ian Parker³ , Craig M. Walsh¹ , Thomas E. Lane⁵ , Michael D. Cahalan²

¹Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics, University of California, Irvine, ³Neurobiology and Behavior, University of California, Irvine, ⁴University of California San Francisco Diabetes Center, University of California, San Francisco, ⁵Pathology, University of Utah

In questo articolo

Sommario

Un nuovo ex vivo preparazione per l'imaging del midollo spinale di topo. Questo protocollo consente a due fotoni imaging interazioni cellulari vivi tutto il midollo spinale.

Abstract

La microscopia a due fotoni (2P) viene utilizzata per rivelare le dinamiche e le interazioni cellulari in profondità all'interno di tessuti viventi intatti. Qui, presentiamo un metodo per l'imaging di cellule vive nel midollo spinale murino. Questa tecnica è particolarmente adatta per analizzare le dinamiche delle cellule precursori neurali (NPC) dopo il trapianto nel midollo spinale sottoposte a disturbi demielinizzanti neuroinfiammatori. Le NPC migrano verso i siti di danno assonale, proliferano, si differenziano in oligodendrociti e partecipano alla rimielinizzazione diretta. Le NPC sono quindi un trattamento terapeutico promettente per migliorare le malattie demielinizzanti croniche. Poiché le NPC trapiantate migrano verso le aree danneggiate sul lato ventrale del midollo spinale, l'imaging 2P intravitale tradizionale è impossibile e in precedenza erano disponibili solo informazioni sulle interazioni statiche utilizzando approcci di colorazione istochimica. Sebbene questo metodo sia stato generato per visualizzare le NPC trapiantate nel midollo spinale ventrale, può essere applicato a numerosi studi su cellule trapiantate ed endogene in tutto il midollo spinale. In questo articolo, dimostriamo la preparazione e l'imaging di un midollo spinale con assoni che esprimono proteine fluorescenti gialle potenziate e NPC trapiantate che esprimono proteine fluorescenti verdi potenziate.

Introduzione

Modelli murini di demielinizzazione, tra cui l'encefalomielite sperimentale autoimmune (EAE) e l'infezione intracranica con neuroadapted mouse virus dell'epatite (MHV), sono ottimi strumenti per studiare percorsi molecolari e interazioni cellulari associati con la malattia. Essi hanno portato e sostenuto l'efficacia della FDA ha approvato terapie farmacologiche, rivolti principalmente la cessazione di autoimmunità e infiammazione ^1. Tuttavia, una volta che la rimielinizzazione endogena ha fallito, le terapie attualmente approvate non riparano efficacemente lesioni demielinizzati nel sistema nervoso centrale. Pertanto, le terapie di riparazi....