3D Органотипической Совместное культивирование Модель поддержки Медуллярный тимуса эпителиальных клеток пролиферации, дифференцировки и Promiscuous экспрессии генов

Sheena Pinto; Hans-Jürgen Stark; Iris Martin; Petra Boukamp; Bruno Kyewski

doi:10.3791/52614

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

3D Органотипической Совместное культивирование Модель поддержки Медуллярный тимуса эпителиальных клеток пролиферации, дифференцировки и Promiscuous экспрессии генов

10.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52614

⸱

30 июля 2015 г.

Sheena Pinto^*¹ , Hans-Jürgen Stark^*² , Iris Martin² , Petra Boukamp² , Bruno Kyewski¹

¹Division of Developmental Immunology, German Cancer Research Center (DKFZ), ²Genetics of Skin Carcinogenesis, German Cancer Research Center (DKFZ)

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Изучение медуллярных эпителиальных клеток тимуса in vitro было в значительной степени неудачным, поскольку современные системы 2D-культивирования не имитируют сценарий in vivo. Описанная здесь 3D-система культивирования - модифицированная модель органотипической культуры кожи - доказала свое превосходство в повторении пролиферации mTEC, дифференцировке и поддержании неразборчивой экспрессии генов.

Аннотация

Развитие внутриотраслевой тимуса Т-клеток требует сложной трехмерной сетчатой структуры, состоящей из различных стромальных клеток, то есть, не-Т-клеток. Тимоциты пройти этот эшафот в хорошо скоординированным временной и пространственной того в то время как последовательно проходя обязательные контрольные точки, т.е. Т-клеток коммитирование, а затем поколения репертуара Т-клеточного рецептора и отбора до их экспорта в периферии. Два основных типа клеток, образующих житель этого эшафот являются корковых (cTECs) и мозгового тимуса эпителиальные клетки (mTECs). Ключевой особенностью является mTECs так называемый беспорядочный выражение многочисленных тканевых антигенов ограничено. Эти ткани ограниченным антигены представлены незрелых тимоцитов, прямо или косвенно, mTECs или дендритных клеток тимуса, соответственно в результате аутотолерантности.

Подходящие модели в пробирке эмуляции пути развития и функции cTECs и mTECs настоящее время лаковыекороль. Это отсутствие адекватных экспериментальных моделей, например мешает анализ разнородной экспрессии генов, которая до сих пор мало изучены на клеточном и молекулярном уровне. Мы адаптировали 3D органотипической модель совместного культуры к культуре экс естественных условиях изолированных mTECs. Эта модель была первоначально разработана для выращивания кератиноцитов таким образом, чтобы генерировать эквивалента кожи в пробирке. 3D-модель сохраняется ключевые функциональные особенности Mtec биологии: (I) пролиферации и терминальной дифференцировки CD80 ^вот, Aire-отрицательной в CD80 ^{привет,} Aire-положительных mTECs, (II) отзывчивость к RANKL, и (III) устойчивого выражения FoxN1, Aire и тканей ограниченным гены в CD80 ^привет mTECs.

Введение

Разработка тимоцитов составляют около 98% от тимуса, а остальные 2% состоит из множества клеток, которые в совокупности составить в строму тимуса (т.е. эпителиальные клетки, дендритные клетки, макрофаги, В-клетки, фибробласты, эндотелиальные клетки). Наружные корковые клетки эпителия (cTECs) обеспечить эмиграцию про-Т-клеток из костного мозга, Т индукции клеточных клонов в мультипотентных предварительно Т-клеток и позитивной селекции самостоятельной MHC ограничено тимоцитов. Внутренние мозговые тимуса эпителиальные клетки (mTECs) участвуют в индукции толерантности этих тимоцитов с высоким сродством ТКР для самостоятельной пептид / МНС комплексов по обе вызыв....