Sequential Anwendung von Glasplättchen die Drucksteifigkeit der Maus Objektiv zu beurteilen: Stamm und morphometrische Analysen

Zusammenfassung

Altersbedingte Zunahmen der Augenlinsensteifigkeit sind mit Presbyopie verbunden. Dieses Protokoll beschreibt eine einfache, kostengünstige Methode zur Messung der Steifigkeit von Mauslinsen. Mauslinsen werden, wie menschliche Linsen, mit zunehmendem Alter steifer. Diese Methode ist präzise und kann für Objektive von größeren Tieren angepasst werden.

Zusammenfassung

Die Augenlinse ist ein transparentes Organ, das Licht bricht und konzentriert sich auf die Netzhaut ein klares Bild zu bilden. Beim Menschen Vertrag Ziliarmuskeln die Linse zu verformen, zu einer Erhöhung führt in der Linse "optische Leistung auf nahe Objekte scharf, ein Verfahren, wie Unterkunft bekannt. Altersbedingte Veränderungen in der Linsensteifigkeit haben Presbyopie in Verbindung gebracht worden, eine Verminderung der Linse die Fähigkeit aufzunehmen, und durch Erweiterung, die Notwendigkeit für eine Lesebrille. Auch wenn die Maus Linsen aufnehmen oder nicht entwickeln Presbyopie, Mausmodelle können einen unschätzbaren genetisches Werkzeug für das Verständnis Objektiv Pathologien bieten, und die beschleunigte Alterung bei Mäusen beobachtet, ermöglicht die Untersuchung von altersbedingten Veränderungen in der Linse. Dieses Protokoll zeigt, eine einfache, präzise und kostengünstiges Verfahren für Maus Linsensteifigkeit Bestimmung unter Verwendung von Glasdeckgläser sequentiell Druckbelastungen auf die Linse Erhöhung anzuwenden. Repräsentative Daten bestätigen, dass die Maus Linsen steifer mit dem Alter, wiemenschliche Linsen. Dieses Verfahren ist sehr gut reproduzierbar und kann potenziell Testlinsen von größeren Tieren zu mechanisch skaliert werden.

Einleitung

Die Linse ist ein transparentes und avaskuläres Organ in der vorderen Augenkammer, das für die feine Fokussierung des Lichts auf die Netzhaut verantwortlich ist. Eine klare Basalmembran, die als Linsenkapsel bezeichnet wird, umgibt eine Masse länglicher Faserzellen, die von einer vorderen Monoschicht aus Epithelzellen bedeckt^{sind 1,2}. Das lebenslange Wachstum der Linse hängt von der kontinuierlichen Proliferation und Differenzierung der Epithelzellen am Linsenäquator in neue Faserzellen ab, die konzentrisch zu früheren Generationen von Faserzellen hinzugefügt werden². Im Laufe der Zeit verdichten sich die Linsenfaserzellen, was zu einem starren Z....

Protokoll

Alle Tier Verfahren wurden in Übereinstimmung mit Empfehlungen im Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch die National Institutes of Health und im Rahmen einer genehmigten Protokoll, das von der Institutional Animal Care und Use Committee am Scripps Research Institute durchgeführt.

1. Objektiv Dissection

1. Euthanize Mäuse gemäß den Empfehlungen in den National Institutes of Health "Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren" und zugelassene Institution Tier Protokolle verwenden.
2. Enucleate das Auge von Mäusen mit einer gebogenen Pinzette. Drücken Sie das Gewebe um das Auge mit der Zange....

Ergebnisse

Die Steifigkeit und die Abmessungen der 2-, 4- und 8-Monate alten Maus Linsen wurden gemessen. Die Mäuse wurden alle Wildtyp-Tiere auf einem reinen Hintergrund C57BL6 Stamm aus der Zuchtanlage TSRI Tier erhalten, und jede Linse wurde mit 1 bis 10 Deckgläser geladen. Die axialen und äquatorialen Stämme wurden als Funktion der aufgebrachten Last berechnet, indem die axialen und äquatorialen Durchmesser der Linse nach der Zugabe von jedem Deckglas zu messen und dann jede Änderung des Durchm.......

Diskussion

Es gibt mehrere wichtige Überlegungen bei der Verwendung dieser Methode Linse Steifigkeit zu messen. Zuerst werden die Deckgläser auf die Linse bei einem leicht schrägen Winkel aufgetragen (8-8,5 °) in Bezug auf den Boden der Kammer (θ). Dies wird eine sehr kleine Komponente der Last anwenden aquatorial anstatt axial. Allerdings ist diese äquatorialen Last als vernachlässigbar , da sin θ ≈ 0,1 ^19. Wenn dieses Verfahren für größere Linsen angepasst ist, müsste der Winkel der Deckgläser auf den Boden der Kammer.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Feine Pinzette gerade Zange	Fine Scientific Tools	11252-40
Mikrodissektionsschere, gerade Schneide	Fine Scientific Tools	15000-00
Gebogene Pinzette	Fine Scientific Tools	11272-40
Greifzange	Hammacher	HSC 702-93	Optionale
Sezierschale	Fisher Scientific	12565154
60 mm Petrischale	Fisher Scientific	0875713A
1x phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Life Technologies	14190
18 x 18 mm Glasdeckgläser	Fisher Scientific	12-542A
Messkammer mit Vertiefungen zur Aufnahme von Linsen			Sonderanfertigung (siehe Abbildung 1)
Rechtwinkliger Spiegel	Edmund Optics	45-591
Lichtquelle	Schott/Fostec	8375
Beleuchtetes Präpariermikroskop	Olympus	SZX-ILLD100	Mit SZ-PT Fototubus
Digitalkamera	Nikon	Coolpix 990