Hierin wird ein Verfahren zur Bestimmung der Assoziation und Konkurrenz zwischen den Königreichen (bakteriell und pilzlich) für die Adhärenz an virusinfizierten HeLa-Zell-Monoschichten beschrieben. Dieses Protokoll kann auf mehrere Kombinationen von Prokaryoten, Eukaryoten und Viren ausgeweitet werden.
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Methodenartikel
Bestimmung von Biofilm Initiation auf Virus-infizierte Zellen durch Bakterien und Fungi
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Studie von polymikrobiellen Interaktionen über die taxonomische Königreiche, die Pilze, Bakterien und Viren sind nicht zuvor in Bezug auf, wie virale Mitglieder des microbiome beeinflussen nachfolgende Mikroben-Interaktionen mit diesen Virus infizierten Wirtszellen untersucht worden. Das Zusammenleben von Virus mit Bakterien und Pilzen besteht hauptsächlich darin, die auf den Schleimhäuten der Mundhöhle und des Genitaltrakts. Mucosal Zellen, insbesondere solche mit persistenten chronischen oder persistenten latenten Virusinfektionen, könnte einen erheblichen Einfluss auf die Mitglieder des microbiome durch Virus Veränderung in der Anzahl und Art der Rezeptoren zum Ausdruck gebracht haben. Änderung in Wirtszellmembran Architektur in veränderter Fähigkeit der nachfolgenden Mitglieder der normalen Flora und opportunistischen Erregern würde den ersten Schritt in die Biofilmbildung, das heißt, die Einhaltung zu initiieren. Diese Studie beschreibt ein Verfahren zur Quantifizierung und visuelle Untersuchung des HSV Wirkung auf die Einleitung BIOFILm - Bildung (Adhärenz) von S. aureus und C. albicans.
Einleitung
Der menschliche microbiome umfasst unterschiedliche Organismen aus verschiedenen taxonomischen Königreiche, die im Körper geografischen Regionen teilen. Die Einhaltung der Zelloberflächen ist ein wichtiger erster Schritt in die Biofilmbildung, die Teil des microbiome Kolonisierung ist. Eingeschlossen in die microbiome können Viren sein, die chronische und persistente Infektionen verursachen. Die chronische Zellinfektion durch diese Viren kann eine Veränderung in mutmaßlichen Rezeptor Verfügbarkeit führen. 1,2 Zusätzlich Zelleintritt durch intrazelluläre Erreger auch Wirts Membranfluidität / Hydrophobizität, die wiederum verändern können Anbringung we....
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Protokoll
1. HSV-Stämme und Handhabung
Hinweis: Recombinant kein Ausbreiten HSV-1 (KOS) gL86 und HSV-2 (KOS) 333gJ - mit beta-Galactosidase - Reporteraktivität verwendet wurden von V. Twiari 36,37 zur Verfügung gestellt.
- Verwenden Sie Virus aus einem Los und bei -80 ° C bei einer 1: 1-Verhältnis von Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 20% fötalem Rinderserum (FBS) und Magermilch bis zur Verwendung. Vor viral Menge Lagerung, Viruskonzentration von o - Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid (ONPG) und 5-Brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid (X-Gal) Assay bestimmen.
- Bestimmen die Lebensfähigkeit des Virus und ....
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Ergebnisse
Der Grad der Zuverlässigkeit der Daten , die aus System in diesem Bericht beschrieben wird , in Abbildung 2 af 38 gezeigt. Durch die Verwendung dieses Systems die Modulation von Staphylokokken und Pilz Wechselwirkung mit viral infizierte Zellen und deren Wirkung auf jedes Anhaften des anderen können abgegrenzt werden. Diese Arten von Studien erfordern mikroskopische Untersuchung der Wechselwirkung , wie in den 3 und 4 gezeigt .......
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Diskussion
Derzeit liegen keine Informationen über komplexe Wechselwirkungen zwischen permanent zu semi-permanenten Mitglieder des Host microbiome , die mehrere taxonomische Domänen kreuzen, dh prokaryotischen, eukaryotischen und viral. Deshalb entwickelten wir ein neuartiges in System - vitro - Modell Biofilm Einleitung von S. zu studieren aureus und C. albicans auf HSV-1 oder HSV-2 infizierten HeLa 229 (HeLa - Zellen) 38. Die HeLa-Zellen Modellsystem stellt einen e.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Dieses Projekt wurde unterstützt von der Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) und dem Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| C.albicans | |||
| BBL Sabouraud Dextrose | BD | 211584 | |
| Fungisel Agar | Dot Scientific | 7205A | |
| S.aureus | |||
| Mannitol Salz Agar | Troy Biologicals | 7143B | |
| Schafblut-Agar | Troy Biologicals | 221239 | |
| Hela-Zellen | |||
| 1x DMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium, mit 4,5 g/L Glucose und L-Glutamin, ohne Natriumpyruvat | Corning | 10-017-CM | |
| Gentamicin 50 mg/ml | Sigma | 1397 | 50 µ g/ml Endkonzentration im vollständigen DMEM |
| Trypsin EDTA (0,05 % Trypsin, 0,53 M EDTA)Lösung 1x | Corning | 25-052-CI | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11150 | 10 % Endkonzentration im vollständigen DMEM |
| strong>Sonstiges Medium und Reagenzien | |||
| ONPG | Thermo Scientific | 34055 | |
| Ultra-Pure X gal | Invitrogen | 15520-018 | |
| 1x HBSS (Hanks' Balanced Salt Solution) | Corning | 20-021-CV | |
| 1x PBS | Dot Scientific | 30042-500 | |
| RIPA Lysis | Life Technologies | 89901 | |
| Staining | |||
| Methanol | Fisher Scientific | A433P-4 | |
| HSV 1& 2, spezifisch für | gD ViroStat | 196 | |
| DAPI | SIGMA | D8417-5MG | |
| Gram Crystal Violet | Troy Biologicals | 212527 | |
| Supplies | |||
| Petrischale 100 x 15 | Dot Wissenschaftliche | 229693 | |
| Petrischale 150 x 15 | Kord Valmark | 2902 | |
| 96-Well-Platten | Evergreen Scientific | 222-8030-01F | |
| 24-Well-Platten | Evergreen Scientific | 222-8044-01F | |
| Kulturröhrchen 100 x 13 | Thomas Scientific | 9187L61 | |
| Deckglaser-Kreise, 12 mm | Deckglaser | CB00120RA1 |
Referenzen
- Palu, G., et al. Effects of herpes-simplex virus type-1 infection on the plasma-membrane and related functions of HeLa S3 cells. J Gen Virol. 75, 3337-3344 (1994).
- Vitiello, G., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
