Herramientas para el diagnóstico de la malabsorción de ácidos biliares y miden transporte de ácidos biliares in vivo están limitados. Un enfoque innovador de animales vivos se describe que utiliza protones combinado (1 H), además de flúor (19F) de formación de imágenes por resonancia magnética; esta novedosa metodología tiene el potencial de traslación para la detección de problemas de absorción de ácidos biliares en la práctica clínica.
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Artículo de método
El uso de ácidos biliares y Multi-fluorados
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Resumen
Resumen
Junto con su papel tradicional de detergentes que facilitan la absorción de grasa, literatura emergente indica que los ácidos biliares son potentes moléculas de señalización que afectan a múltiples órganos; modulan la motilidad intestinal y la producción de hormonas, y alterar el tono vascular, metabolismo de la glucosa, el metabolismo de lípidos, y la utilización de energía. Los cambios en los ácidos biliares fecales pueden alterar el microbioma intestinal y promover la patología de colon incluyendo diarrea cholerrheic y el cáncer de colon. reguladores clave de la composición de ácido biliar fecal son la pequeña intestinal Apical Bile Acid Transporter dependiente de sodio (ASBT) y factor de crecimiento de fibroblastos-19 (FGF19). La reducción de expresión y función de ASBT disminuye los ácidos biliares del intestino efectos de adopción. Por otra parte, los datos in vitro sugieren que algunos medicamentos aprobados por la FDA inhiben la función ASBT. liberación de FGF19 deficiente aumenta la síntesis de ácido biliar hepática y la liberación en el intestino a niveles que superan ASBT. De cualquier disfunción o deficiencia ASBT FGF19 aumenta fácidos biliares ECAL y pueden causar diarrea crónica y promover la neoplasia de colon. Lamentablemente, herramientas para medir la bilis malabsorción de ácidos y las acciones de los fármacos sobre el transporte de ácidos biliares in vivo son limitadas. Para entender las complejas acciones de los ácidos biliares, se requieren técnicas que permiten la monitorización simultánea de los ácidos biliares en el intestino y los tejidos metabólicos. Esto nos llevó a concebir un método innovador para medir el transporte de ácido biliar en animales vivos usando una combinación de protones (1 H) y flúor (F 19) de formación de imágenes por resonancia magnética (MRI). Trazadores novedosos para flúor (19F) a base de resonancia magnética en vivo de los animales fueron creados y probados, tanto in vitro como in vivo. Ventajas de este enfoque incluyen la falta de exposición a la radiación ionizante y el potencial de traslación para la investigación y la práctica clínica.
Introducción
Junto con su función clásica como detergentes que facilitan la absorción de grasa desde el intestino, los ácidos biliares se han convertido en moléculas de señalización potentes que afectan a múltiples órganos, además de los asociados con su 1,2 circulación enterohepática. Además de controlar su propio metabolismo, los ácidos biliares modulan varios aspectos de la fisiología gastrointestinal (por ejemplo, la motilidad intestinal y la producción de la hormona incretina, fisiología colon, y la susceptibilidad al cáncer) y tienen efectos sistémicos sobre el tono vascular, la glucosa y el metabolismo de los lípidos, y la utilización de energía. Mientr....
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Protocolo
El siguiente protocolo se adhiere a las directrices aprobadas por el Comité Institucional de Cuidado de Animales y el empleo (IACUC) de la Universidad de Maryland Escuela de Medicina (IACUC Protocolo # 0415011, aprobada el 18 de junio de, 2015).
1. Los ratones con el gavage Etiquetada F-19 de los ácidos biliares
- Los ratones de alimentación por sonda con 150 mg / kg de peso corporal 19 ácidos biliares marcados-F. Llene una jeringa de 1 ml para el volumen necesario con 19 marcado con F solución de ácido biliar de la [cólico ácido-trifluoro-acetil lisina (CA-lys-TFA; en 1: 1 de polietilenglicol 400: fosfato de Dulbecco....
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Resultados
El uso de MFBA de resonancia magnética in vivo "ver" transporte de ácidos biliares en tiempo real tiene un gran potencial para la investigación y uso clínico. Por otra parte, los métodos descritos aquí para la resección de la vesícula biliar y el análisis bioquímico de su contenido utilizando cromatografía líquida y espectrometría de masas proporcionan un medio para confirmar resultados de las imágenes. Sin embargo, la validez de estos métodos requiere una dosificación.......
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Discusión
La síntesis de CA-lys-TFA y CA-sar-TFMA y el análisis in vitro de su transporte utilizando células de riñón canino Madin-Darby transfectadas de forma estable que expresan ASBT y las células embrionarias de riñón humano que expresa el polipéptido / taurocolato co-transporte de sodio (PNCT) se detalla en otras partes 13,14. Aquí, la atención se centra en la administración oral de MFBA por sonda a los animales vivos, seguido de la cosecha de la vesícula biliar, el hígado y la sangre para el análisis del.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales de Salud, Instituto Nacional de Diabetes y Enfermedades Digestivas y Renales (números de subvención R21 y T32 DK093406 DK067872 a JP.R.) y un premio al mérito VA (número de concesión 1BX002129 a JP.R.).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Duall tamaño-21 molinillo de papel tisú de vidrio | Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ | 885351-0022 | |
| Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T escáner de resonancia magnética de orificio horizontal | Bruker Biospin MRI GmbH, Alemania | Utilice el software complementario Paravision versión 5.1 (consulte el paso 3.5) | |
| Bruker 40 mm 19F/1H bobina de volumen lineal de doble ajuste | Bruker Biospin MRI GmbH, Alemania | Utilice el software complementario Paravision versión 5.1 (consulte el paso 3.5) | |
| Sistema UPLC Acquity de Waters con detector de cuadrupolo | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Híbrido con puente de etileno Acquity UPLC de Waters C8 1.7 μ m 2,1 x 50 mm columna | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Aguja de sonda Braintree | Scientific, INC. | N-010 | 20 G-1.5" bola curva de 2.25 mm |
| 2 Hemostáticos de acero inoxidable | VWR | 10755-018 | y 5 pulgadas, recta |
| Ketamina | MWI Veterinary Supply | 501090 | Ketamina zetamina 100 mg/ml |
| Xilacina | Akorn, Inc. | de 20 mg/ml | |
| Abbott | AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42 | 24-G x 0.75" |
Referencias
- Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases. Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).
- Vallim, T. Q., Edwards, P. A. Bile acids have the gall to function as hormones. Cell Metab. 10, 162-164 (2009).
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Reimpresiones y permisos
