Summary
يصف لنا طريقة لقياس تنشيط وظائف المستجيب بوساطة لجنة التيسير بالأجسام المضادة التي تستهدف هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا. يمكن تكييفها مع هذا التحليل أيضا لتقييم القدرة [مونوكلونل] أو [بولكلونل] سيرا استهداف glycoproteins السطحية الفيروسية الأخرى للحث على الحصانة بوساطة لجنة التيسير.
Abstract
الأجسام المضادة تلعب دوراً حاسما في اقتران الاستجابات المناعية الفطرية والتكيف ضد مسببات الأمراض الفيروسية من خلال مستضد ملزمة مجالات ومناطق Fc. هنا، ونحن تصف كيفية قياس التنشيط من نادي اكتب وظائف المستجيب بالأجسام المضادة استهداف هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا باستخدام خط الخلية جوركات المهندسة وراثيا معربا عن تفعيل لجنة التيسير 1-FcγR-باستخدام هذا الأسلوب، يمكن تحديد مساهمة تفاعلات Fc FcγR محددة يمنحها المناعية باستخدام فحص في المختبر .
Introduction
وقسمت تقليديا الحصانة التي يوفرها لقاح الإنفلونزا الموسمية من hemagglutination تثبيط (مرحبا) المقايسة1، الذي يقيس وجود الأجسام المضادة التي تستهدف موقع مستقبلات ملزم هيماغلوتينين. هذه الأجسام المضادة النشطة مرحبا يمكن أن يضفي حصانة تعقيم، ولكن عموما ضيقة في اتساع تلك الحماية، وتوفير الحصانة لفقط تحديد سلالات قليلة من فيروس الإنفلونزا. عزل ووصف رد الفعل على نطاق واسع [مونوكلونل تعترف هيماغلوتينين (ها) تشير إلى تطوير لقاح الإنفلونزا العالمي هو في متناول اليد، 2،،من34 5 , 6 , 7 , 8-أحد الأهداف الرئيسية من لقاح الإنفلونزا العالمي للحث على استجابة جسم قوي نحو المناطق المصانة من الإنفلونزا فيروس9،10،،من1112 , 13 , 14 , 15 , 16-على نطاق واسع ورد الفعل من الأجسام المضادة التي تعترف هذه يحافظ [ابيتوبس]، تتألف من إبطال وعدم تحييد الأجسام المضادة17،18، تبين أن تتطلب تفاعل Fc-FcγR للأمثل الحماية في فيفو وتسليط الضوء على مساهمة لجنة التيسير بوساطة الحصانة للاستجابة المناعية الإجمالية لفيروس الإنفلونزا19،20.
يرتبط الحماية تشكل عاملاً حاسما في تقييم مناعة ضد العدوى. هذه المقاييس تسمح للعلماء والأطباء لتقدير فعالية اللقاحات، وأهمية البيانات، وأثناء العلاج. ربط المنشأة الوحيدة للحماية ضد عدوى فيروس الإنفلونزا هو مقايسة تثبيط هيماجلوتيناتيون. يرتبط بتخفيض 50% في خطر المرض1،21 -عيار من 01:40 ويعكس وجود الأجسام المضادة التي تمنع تراص باستهداف مستقبلات ملزم موقع يقع على رأس كروي ها. ومع ذلك، تجدر الإشارة أيضا إلى أن الاستجابات تي خلية ربط أفضل من الحماية ضد عدوى فيروس الإنفلونزا لدى كبار السن. من المثير للاهتمام، تقرير صدر مؤخرا يشير إلى أن النشاط تثبيط النورامينيداز قد تكون مؤشرا أفضل من الحصانة للأنفلونزا22. لحسن الحظ، نموذجية في المختبر فحوصات مثل فحوصات تثبيط تحييد أو النورامينيداز يمكن قياس الأجسام المضادة المحددة ساق أو النورامينيداز هكتار. معظم هذه الاختبارات التقليدية في المختبر ، ومع ذلك، فقط تأخذ في الاعتبار الدالة لمنطقة مستضد ملزمة الجسم ولا تقيس دور منطقة Fc. بالإضافة إلى ذلك، المساهمة غير تحييد الأجسام المضادة التي تحمي عن طريق نادي مستقبلات المشاركة في فيفو لا الكشف عن17،18. من أجل قياس الحماية من الأجسام المضادة التي تحفز الحصانة Fc بوساطة مثل جسم الخلية التابعة بوساطة سيتوتوكسيسيتي (ADCC)، يلزم مقايسة قوية في المختبر .
الطريقة الموضحة أدناه ويقيم قدرة الأجسام المضادة مورين للحث على مهام لجنة التيسير بوساطة من خلال استخدام خط خلية جوركات معدلة وراثيا معربا عن تفعيل الفاري اكتب 1 FcR، FcγRIV. مشاركة FcγR جسم ترانسدوسيس داخل الخلايا مما يشير إلى أن العامل النووي مشغلات لوسيفراس تنشيط خلايا T-وساطة النشاط. التحليل مزايا عديدة على التقنيات التقليدية التي تتطلب العزلة والثقافة من خلايا المستجيب الأساسي واستخدام التدفق الخلوي للكشف عن التنشيط للمستجيب بوساطة Fc مهام19،23،24 ،،من2526. أولاً، بسهولة يمكن تكييفها لإدماج أهداف الفيروسية المختلفة، FcγRs، والأجسام المضادة من مختلف الأنواع (البشرية ومورين) البروتوكول هو موضح هنا. ثانيا، استخدام خلية جوركات تعديل خط معربا عن FcγR مع جين مراسل لوسيفراس تحت عاملاً نووية لتنشيط خلايا تي (نفات) يسمح شكل كبير مقايسة التي يمكن تحليلها بسهولة باستخدام قارئ لوحة قياس التﻷلؤ. هنا، يتم استبدال تنشيط خلايا المستجيب الأولية التقليدية مع إدخال نفات-لوسيفراس على جسم الاستعانة FcγR على سطح الخلية جوركات. يسمح هذا الفحص تنسيق لوحة 96-جيدا لقياس عينات مختلفة تصل إلى أربعة في تريبليكاتيس مع سبعة تخفيف – عدد من العينات التي يمكن أن تكون مرهقة باستخدام التقنيات التقليدية. وهناك نقاط إضافية للنظر مع هذا التحليل التي قد تؤثر على تصميم تجارب وتفسير البيانات. يجب التعبير عن الهدف الفيروسية على سطح الخلية من أجل الاعتراف بالضد. للتخفيف من هذا، قد المغلفة مستضد المستهدفة (مثل البروتينات فيروسية داخلية) مباشرة على سطح لوحة. ومع ذلك، هذا لم بعد يتم دقة اختبار. بالإضافة إلى ذلك، تعديل خط الخلية جوركات تعرب عن نوع واحد فقط من تفعيل FcγR ولا تعبر عن أي FcγRs المثبطة، بينما خطوط الخلايا الابتدائية التعبير عن جميع المستقبلات في سياق فسيولوجية.
وقد استخدمنا سابقا هذا الفحص لإثبات أن خصوصية حانمه في سياق [بولكلونل] يلعب دوراً حاسما في تنظيم وظائف المستجيب بوساطة لجنة التيسير وأن التفعيل الأمثل للاستجابة تعتمد على جسم الخلية بوساطة يتطلب نقطتين من اتصل27،28. وهنا يصف لنا أسلوب الذي يقيم قدرة خاصة بساق الأجسام المضادة لإشراك وتفعيل الفاري تفعيل FcγRIV. على الرغم من أن هناك استثناءات29،30، عدد كبير من الأجسام المضادة لرد الفعل على نطاق واسع تستهدف منطقة ساق antigenically يحافظ هيماغلوتينين، وهكذا تلعب دوراً مهما في تنمية الإنفلونزا العالمي لقاح.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وأجريت التجارب بريفورميد في هذه المخطوطة المؤسسية مدونة للتالية "آيكان كلية الطب" الأخلاقيات والأنظمة.
1-التعبير عن هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا عن طريق تعداء أو الإصابة
تعداء:
- لوحة "الكلي الجنينية البشرية" (HEK 293T) الخلايا في كثافة من 2 × 104 خلايا/بئر في ثقافة الأنسجة بيضاء تعامل لوحة 96-جيدا، والسماح لها الجلوس لح 4 في حاضنة 37 درجةمئوية (مع 5% CO2).
- ترانسفيكت الخلايا مع 100 نانوغرام من الحمض النووي الترميز الفيروسية هيماغلوتينين وميكروليتر 0.2 من تعداء كاشف كل بئر في إجمالي حجم 50 ميكروليتر.
ملاحظة: على حد سواء هي تضعف كاشف بلازميد وترانسفيكتانت في 1 × غروب-الحد الأدنى الأساسي وسائل الإعلام (MEM) "خفضت مصل المتوسطة". - بعد حضانة لوحات في حاضنة 37 درجةمئوية مع 5% CO2 ح 18، قم بإزالة الوسائط تعداء.
2-العدوى
- خلايا الكلي الناب A549 لوحة أو مدين داربي في كثافة من 2 × 104 خلايا/بئر في ثقافة الأنسجة بيضاء تعامل لوحة 96-جيدا وتنمو على الأقل 18 ح في 37 °C حاضنة مع شركة 5%2.
- فيروس مخفف في 1 × MEM وتصيب الخلايا في عدد وافر إصابة من 3، 1 أو 0.33 ح 1 في حاضنة 37 درجةمئوية مع شركة 5%2. يجب أن يساوي مجموع حجم 100 ميكروليتر.
ملاحظة: x 10 MEM هو المخفف بالماء لجعل 1 × MEM العامل المخزون لتمييع الفيروسات المذكورة أعلاه. - إزالة بعد الإصابة العدوى، وإضافة 100 ميكروليتر من 1 × MEM في اللوحة في غياب التربسين.
- تنمو الخلايا المصابة ح 18 إلى 24 في حاضنة 37 درجةمئوية مع 5% CO2.
3-تقييم تفعيل فكرج/نفات-بوساطة النشاط لوسيفراس بالأجسام المضادة أو سيرا
- أولاً، استبدال وسائط النمو للخلايا المصابة أو transfected مع 25 ميليلتر من مقايسة وسائط الإعلام (1 x RPMI 1640 تستكمل مع 4% (المجلد/المجلد) منخفضة مفتش الجنيني البقري سيرا).
- في لوحة 96-بئر منفصلة، إجراء تخفيف أربعة إضعاف من الأجسام مضادة الفائدة ابتداء من 30 ميكروغرام/مل باستخدام وسائط المقايسة. إجراء تخفيف في تريبليكاتيس وتخطيط لوحة بمثال يتضح في الشكل 1A. تأكد من تضمين عنصر تحكم الذي يستبعد جسم (لا مراقبة الأجسام المضادة) فضلا عن عنصر تحكم خلفية (مقايسة المخزن المؤقت وحدها).
ملاحظة: للحصول على حد سواء 'لا جسم' والخلفية عناصر التحكم، إضافة 25 ميليلتر من المخزن المؤقت بالانزيم بدلاً من جسم. - نقل 25 ميكروليتر من الأجسام المضادة التي تضعف متسلسل من 3.2 خطوة إلى الآبار المقابلة على لوحة transfected الخلايا أو الخلايا المصابة.
- احتضان لوحة في حاضنة 37 درجةمئوية (مع 5% CO2) لمدة 15 دقيقة.
- إضافة 25 ميكروليتر الخلية جوركات المستجيب تعديل مناسب يعبر عن موريني فكجريف أو فكجريييا البشرية (75,000 من خلايا/جيد). كذلك ينبغي أن يكون الحجم الإجمالي لكل ميليلتر 75 وتركيز النهائي بدءاً الجسم 10 ميكروغرام/مل (الشكل 1B).
ملاحظة: لعنصر التحكم خلفية، إضافة 25 ميليلتر من المخزن المؤقت بالانزيم بدلاً من خلايا المستجيب. دراسة تعتمد على جسم الخلية بوساطة البلعمه، يمكن استخدام خلية جوركات تعديل التعبير عن فكجرييا البشرية. - احتضان لوحة في حاضنة 37 درجة مئوية مع 5% CO2 ح 6.
- ذوبان الجليد والعازلة الركيزة لوسيفراس الحارة في مياه 37 درجةمئوية لحوالي 1 ساعة قبل الاستخدام.
ملاحظة: لجعل المخزن المؤقت الركيزة لوسيفراس، إعادة تشكيل الركازة الإنزيم لوسيفراس المجففة بالتبريد في المخزن المؤقت للمقايسة المقدمة. يمكن تخزين المخزن المؤقت الركازة المعاد تشكيلها في-30 °C إلى-10 درجةمئوية لمدة تصل إلى ستة أسابيع. - إضافة 75 ميكروليتر/بئر لوسيفراس الركازة المخزن المؤقت لجميع الآبار باستثناء خلفية عنصر التحكم.
- قراءة في لومينوميتير.
- حساب إضعاف التعريفي بالمعادلة التالية: إضعاف التعريفي = (قيمة القيمة-خلفية التسبب)/(لا قيمة القيمة-الخلفية ماب).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
أظهرنا أن ماب ساق على حدة، 6F12، ولكن لا ماب الرأس الخاصة برئيس معين، PY102، وكان قادراً على تنشيط الخلايا القاتلة الطبيعية الأساسية التي أوبريجولاتينج CD107a والانترفيرون γ19. نموذج لجسم ساق على حدة قادرة على تنشيط الخلايا ناغورني كاراباخ البشرية الأساسية، نظهر أن ماب ساق على حدة، 6F12، يمكن تنشيط قوة الخلية جوركات تعديل التعبير عن FcγRIV مورين من ~ معدل. من ناحية أخرى، ماب الخاصة بالرأس، و PY102 ومراقبة مفتش لا (الشكل 2)28.
للتحقيق في حالة تعدد العدوى (وزارة الداخلية) يمكن أن تؤثر على تنظيم دورات تعريفية للخلايا جوركات، وإذ تعرب عن FcγRIV مورين، نحن إصابة الخلايا مدك مع X31 (انغماد إنفلونزا فيروس التعبير عن هيماغلوتينين والنورامينيداز من A/Hong كونغ/1/68 (H3N2) الفيروس مع الأجزاء الداخلية من A/Puerto ريكو/8/34 (H1N1)) مع موي 3، 1 أو 0.33. أربع وعشرين ساعة في وقت لاحق، تم إضافة 9 ح 10 منعزلة الخلايا المصابة مدك الخلايا جوركات الإعراب عن مورين FcγRIV والإنسان والمحيط الحيوي. في الشكل 3، نظهر أن الخلايا المصابة مع موي 3 يمكن أن يستحث التﻷلؤ أعلى بحوالي 3-fold من مدك الخلايا المصابة مع موي 0.33.
الشكل 1 : تخطيطي نموذج لوحة التخطيط وتشكيل المجموعات التجريبية. (أ) تركيز انطلاق لكل عينة جسم في 10 ميكروغرام/مل وتضعف تسلسلياً عبر اللوحة (العمود 1 إلى العمود 12) 4-fold. ويتم كل عينة في تريبليكاتيس. صف ز محجوز لمراقبة لا ماب والصف ح الخلفية. (ب) الحجم النهائي لكل مجموعة تجريبية قبل إضافة لوسيفراس الركازة المخزن المؤقت هو 75 ميليلتر. علما، بالعينة و 'لا توجد مجموعات ماب' 25 ميليلتر من خلايا المستجيب المضافة، بينما مجموعات التحكم الخلفية ميليلتر 75 مقايسة وسائط الإعلام. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : الخلايا تحريض جوركات تعديل التعبير عن فكجر بجسم [مونوكلونل] ساق. كانت إصابة خلايا A549 مع A/Puerto ريكو/8/34 (H1N1) مع موي 3. في 24 ساعة بعد الإصابة، مورين جوركات الإعراب عن FcγRIV وأضيفت الخلايا في تركيبة مع PY102 أو 6F12 أو عنصر تحكم مفتش. تحريض الخلايا جوركات قيمت قبل إشارة استضاءة ولدها لوسيفراس اليراع تحت عنصر الاستجابة نفات. أشرطة الخطأ = الانحرافات المعيارية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : يؤثر تعدد الإصابة بتحريض جسم ساق على حدة- كانوا مصابين بالخلايا مدك X31 (H3N2) مع موي 3، 1 أو 0.33. في 24 ساعة بعد الإصابة، خلايا معربا عن فكجر جوركات في تركيبة مع 9 ح 10 (تمييع ابتداء من 10 ميكروغرام/مل) وأضاف. تحريض الخلايا جوركات قيمت قبل إشارة استضاءة ولدها لوسيفراس اليراع تحت عنصر الاستجابة نفات. أشرطة الخطأ = الانحرافات المعيارية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الأسلوب الموصوفة هنا يسمح للمستخدم لقياس قدرة جسم [مونوكلونل] هكتار على حدة للمشاركة FcγRIV موريني. هو أعرب عن مستضد المستهدفة، هيماغلوتينين فيروس الإنفلونزا، على سطح الخلايا بعد الإصابة بالفيروس أو تعداء بلازميد الحمض النووي. المقايسة زيادة قابلة لاستخدام البروتينات الفيروسية المختلفة أعرب عن السطح في تركيبة مع FcγRs الأخرى (البشر أو الفئران). بالإضافة إلى ذلك، وقد استخدمنا عينات الأمصال لتقييم قدرة الأجسام المضادة في سياق [بولكلونل] للحث على وظائف المستجيب Fc (البيانات لا تظهر)، التي قد توفر معلومات أكثر أهمية عند دراسة الاستجابة المناعية التكيفية الناجمة عن العدوى أو التطعيم. يمكننا التكهن بالإضافة إلى ذلك أنه يمكن تعديل المقايسة لقياس الاستقراء من الأجسام المضادة التي تعترف البروتينات الفيروسية الداخلية مباشرة طلاء اللوحات مع البروتين للذوبان. ومع ذلك، هذه المنهجية لم يتم اختبار صارم.
التعريفي لوظائف المستجيب تعتمد على جسم يمكن تتأثر بعوامل عدة، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على المستجيب للنسبة المستهدفة (إضافة عدد من الخلايا المستجيبة للبئر الواحد)، تركيز الأجسام المضادة المستخدمة، مدة حضانة المرض بين خلايا المستجيب والمستهدفة، وتركيز المصل مفتش المنخفضة المستخدمة في المخزن المؤقت للمقايسة.
تاريخيا، يشمل التحليل القياسي لقياس النشاط سيتوتوكسيسيتي الخلوية المعتمدة على جسم من الأجسام المضادة أو الأمصال [بولكلونل] الطبيعية القاتل (ناغورني كاراباخ) خلايا أولية حصادها من الجهات المانحة. مشاركة FcγR وتفعيل المسار داخل الخلايا يتحدد عادة بالتعبير عن تنشيط علامات CD107a و/أو IFN-γ19،،من2324،31. على الرغم من أن التحليل الكلاسيكي يستخدم خلايا المستجيب أكثر صلة بالموضوع كما أنها قد لا تم وراثيا، قد يؤثر على تنشيط الخلية ناغورني كاراباخ تباين الجهات المانحة بسبب الاختلافات الجينية في FcγR ويؤدي إلى تباين دفعة لدفعة. وتشمل فحوصات البديلة المستخدمة كالأمهات البديلات لنشاط ADCC أليسا المستندة إلى ديمر FcγR أو إطلاق سراح كروم مما أسفر عن مقتل25من المقايسة. على الرغم من استخدام أليسا المستندة إلى ديمر FcγR إنتاجية عالية، الفحص قد لا تكون الناحية الفسيولوجية ذات الصلة حسب هذا التحليل لا يستخدم خلايا المستجيب32. بينما التدابير المقايسة الإصدار الكروم مباشرة القتل، أنها ليست إنتاجية عالية ويتطلب خلايا أولية ناغورني-كاراباخ وهي تعتمد الجهات المانحة33مرة أخرى. أسلوب واحد في الآونة الأخيرة وصف استخدام مورين هيبريدوماس تي خلية ستابلي معربا عن تشيميريك FcγR-CD3ζ سلسلة الجزيئات وتدابير التنشيط عن طريق إفراز إيل-2. تحليل ووصف مشابه للأسلوب الموصوفة هنا، الأمر الذي يجعل استخدام خلية تي المعدلة كبديل لخلية المستجيب التعبير عن المفرد تفعيل FcγR34. بدلاً من ذلك، يمكن استخدام خط خلية (NK92.05-CD16) الإعراب عن FcγRIIIa كخلية المستجيب و upregulation من مستضد تحبب CD107a كعلامة تنشيط. ومع ذلك، تجدر استخدام فيريونس والفيروسية الببتيدات لوحات أليسا في البروتوكول الأخير على كما البروتينات المغلفة على السطوح مسعور قد لا الخص دائماً هيكل الفسيولوجية المستضدات35.
الأسلوب الموصوفة هنا مقايسة تنسيق 96-جيدا، ويجعل استخدامها من الناحية الفسيولوجية ذات الصلة وأعرب أصلاً أهداف الفيروسية ويمكن تعديله للأجسام المضادة مورين أو البشرية. جوركات الخلايا المحورة وراثيا يمكن الحفاظ على الثقافة و cryopreserved36. ولو حاليا الخلايا المستجيب إكسبريس FcγR تفعيل واحد فقط، العديد من المزايا لاستخدام هذا البروتوكول المذكورة في هذه الدراسة ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار عند قياس دالة تعتمد على جسم الخلية بوساطة المستجيب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ويعلن المؤلف لا تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وقد تم تمويل هذا المشروع في الجزء مع الأموال الفيدرالية من المعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية، والمعاهد الوطنية للصحة، وزارة الصحة والخدمات الإنسانية، تحت سيرس العقد P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A549 cells | ATCC | CCL-185 | Adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells |
| HEK 293T cells | ATCC | CRL-3216 | Human embryonic kidney cells |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668019 | Transfection reagent |
| 1X Opti-MEM Reduced Serum Medium | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| White tissue culture treated 96-well plate | Corning, Inc. | 3917 | Assay plates |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| Jurkat cell expressing murine FcgRIV | Promega | M1201 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIIa | Promega | G7010 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIa | Promega | G9901 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Luminometer | BioTek | Synergy H1 Multi-Mode reader | Luminescence plate reader |
| Bio-Glo Luciferase Assay System | Promega | G7940 | Contains luciferase assay buffer and luciferase assay substrate |
| Madin Darby canine kidney cells | ATCC | CCL-34 | Canine kidney cells |
References
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al. Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells. PloS One. 3 (12), e3942 (2008).
- Ekiert, D. C., et al. Antibody recognition of a highly conserved influenza virus epitope. Science. 324 (5924), 246-251 (2009).
- Ekiert, D. C., et al. A Highly Conserved Neutralizing Epitope on Group 2 Influenza A Viruses. Science. 333 (6044), 843-850 (2011).
- Tan, G. S., et al. A pan-H1 anti-hemagglutinin monoclonal antibody with potent broad-spectrum efficacy in vivo. J Virol. 86 (11), 6179-6188 (2012).
- Tan, G. S., et al. Characterization of a Broadly Neutralizing Monoclonal Antibody That Targets the Fusion Domain of Group 2 Influenza A Virus Hemagglutinin. J Virol. 88 (23), 13580-13592 (2014).
- Friesen, R. H. E., et al. A common solution to group 2 influenza virus neutralization. PNAS. 111 (1), 445-450 (2014).
- Dreyfus, C., et al. Highly Conserved Protective Epitopes on Influenza B Viruses. Science. 337 (6100), 1343-1348 (2012).
- Krammer, F., Palese, P., Steel, J. Advances in Universal Influenza Virus Vaccine Design and Antibody Mediated Therapies Based on Conserved Regions of the Hemagglutinin. Curr Top Microb and Immunol. , Chapter 408 (2014).
- Impagliazzo, A., et al. A stable trimeric influenza hemagglutinin stem as a broadly protective immunogen. Science. , (2015).
- Nachbagauer, R., Krammer, F. Clinical Microbiology and Infection. Clin Microb Infect. , 1-7 (2017).
- Krammer, F. Novel universal influenza virus vaccine approaches. Current opinion in virology. 17, 95 (2016).
- Steel, J., et al. Influenza virus vaccine based on the conserved hemagglutinin stalk domain. mBio. 1 (1), (2010).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Margine, I., Palese, P. Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly protective stalk-specific antibodies. J Virol. 87 (12), 6542-6550 (2013).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Tan, G. S., Palese, P. Hemagglutinin Stalk-Reactive Antibodies Are Boosted following Sequential Infection with Seasonal and Pandemic H1N1 Influenza Virus in Mice. J Virol. 86 (19), 10302-10307 (2012).
- Hai, R., et al. Influenza viruses expressing chimeric hemagglutinins: globular head and stalk domains derived from different subtypes. J Virol. 86 (10), 5774-5781 (2012).
- Dunand, C. J. H., et al. Both Neutralizing and Non-Neutralizing Human H7N9 Influenza Vaccine-Induced Monoclonal Antibodies Confer Protection. Cell Host and Microbe. 19 (6), 800-813 (2016).
- Tan, G. S., et al. Broadly-Reactive Neutralizing and Non-neutralizing Antibodies Directed against the H7 Influenza Virus Hemagglutinin Reveal Divergent Mechanisms of Protection. PLoS Path. 12 (4), e1005578 (2016).
- DiLillo, D. J., Tan, G. S., Palese, P., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing hemagglutinin stalk-specific antibodies require FcγR interactions for protection against influenza virus in vivo. Nat Med. 20 (2), 143-151 (2014).
- DiLillo, D. J., Palese, P., Wilson, P. C., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing anti-influenza antibodies require Fc receptor engagement for in vivo protection. J Clin Invest. 126 (2), 605-610 (2016).
- Potter, C. W., Oxford, J. S. Determinants of immunity to influenza infection in man. Brit Med Bull. 35 (1), 69-75 (1979).
- Memoli, M. J., et al. Evaluation of Antihemagglutinin and Antineuraminidase Antibodies as Correlates of Protection in an Influenza A/H1N1 Virus Healthy Human Challenge Model. mBio. 7 (2), e00417 (2016).
- Jegaskanda, S., et al. Age-associated cross-reactive antibody-dependent cellular cytotoxicity toward 2009 pandemic influenza A virus subtype H1N1. J Infect Dis. 208 (7), 1051-1061 (2013).
- Jegaskanda, S., et al. Cross-Reactive Influenza-Specific Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Antibodies in the Absence of Neutralizing Antibodies. J Immunol. 190 (4), 1837-1848 (2013).
- Jegaskanda, S., Wheatley, A. K., Kent, S. J. ScienceDirectAntibody-dependent cellular cytotoxicity and influenza virus. Curr Opin Virol. 22 (C), 89-96 (2017).
- Srivastava, V., et al. Identification of Dominant Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity Epitopes on the Hemagglutinin Antigen of Pandemic H1N1 Influenza Virus. J Virol. 87 (10), 5831-5840 (2013).
- He, W., et al. Epitope specificity plays a critical role in regulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza A virus. PNAS. 113 (42), 11931-11936 (2016).
- Leon, P. E., et al. Optimal activation of Fc-mediated effector functions by influenza virus hemagglutinin antibodies requires two points of contact. PNAS. , 201613225 (2016).
- Benjamin, E., et al. A Broadly Neutralizing Human Monoclonal Antibody Directed against a Novel Conserved Epitope on the Influenza Virus H3 Hemagglutinin Globular Head. J Virol. 88 (12), 6743-6750 (2014).
- Ekiert, D. C., Kashyap, A. K., et al. Cross-neutralization of influenza A viruses mediated by a single antibody loop. Nature. 488 (7417), 526-532 (2013).
- He, W., et al. Broadly Neutralizing Anti-Influenza Virus Antibodies: Enhancement of Neutralizing Potency in Polyclonal Mixtures and IgA Backbones. J Virol. 89 (7), 3610 (2015).
- Kristensen, A. B., et al. Antibody Responses with Fc-Mediated Functions after Vaccination of HIV-Infected Subjects with Trivalent Influenza Vaccine. J Virol. 90 (12), 5724-5734 (2016).
- Greenberg, S. B., Criswell, B. S., Six, H. R., Couch, R. B. Lymphocyte cytotoxicity to influenza virus-infected cells. II. Requirement for antibody and non-T lymphocytes. J Immunol (Baltimore, Md. : 1950). 119 (6), 2100-2106 (1977).
- Corrales-Aguilar, E., Trilling, M., et al. A novel assay for detecting virus-specific antibodies triggering activation of Fcγ receptors. J Immunol Meth. 387 (1-2), 21-35 (2013).
- de Vries, R. D., et al. Influenza virus-specific antibody dependent cellular cytoxicity induced by vaccination or natural infection. Vaccine. 35 (2), 238-247 (2017).
- Cheng, Z., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Meth. 414 (1), 69-81 (2014).
