Aquí, presentamos un protocolo para la preparación y la administración estereotáxicas de linfocitos humanos alogénicos en ratones inmunodeficientes con los tumores cerebrales primarios humanos ortotópico. Este estudio proporciona una prueba de concepto para la viabilidad y la eficacia antitumoral de inmunoterapias celulares entregados intrabrain.
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Artículo de método
Estereotáctica transferencia adoptiva de células inmunes citotóxicas en modelos murinos de xenoinjertos de Glioblastoma Multiforme de Orthotopic humanos
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
Glioblastoma multiforme (GBM), el cáncer cerebral primario más frecuente y agresiva en los adultos, se asocia generalmente a un pronóstico pobre, y escasas terapias eficaces se han propuesto en la última década. Entre los candidatos prometedores para el diseño de estrategias terapéuticas novedosas, han sido objeto de inmunoterapias celulares para eliminar altamente invasiva y radiorresistente quimioterapia las células del tumor, probablemente involucrados en una recaída rápida y fatal de este cáncer. Así, administraciones de allogeneic efectores GBM-reactivo de células inmunitarias, como humanos Vϒ9Vδ2 los linfocitos T, en las proximidades del tumor representa una oportunidad única para ofrecer eficiente y altamente concentrado de agentes terapéuticos directamente en el sitio de tumores malignos de cerebro. Aquí, presentamos un protocolo para la preparación y la administración estereotáxicas de linfocitos humanos alogénicos en ratones inmunodeficientes con los tumores cerebrales primarios humanos ortotópico. Este estudio proporciona una prueba de concepto preclínica para la viabilidad y la eficacia antitumoral de estas inmunoterapias celulares que dependen de inyecciones de stereotactic de linfocitos alogénicos humanos en camas de tumor intrabrain.
Introducción
GBM (que grado astrocitoma IV), es el más frecuente y agresivo cáncer cerebral primario en adultos. A pesar de tratamientos agresivos que combinan cirugía y radio-quimioterapia, GBM permanece asociado con un pronóstico extremadamente pobre (supervivencia media de 14,6 meses y una mortalidad de 2 años > 73%)1. Esto pone en evidencia que algunos avances terapéuticos eficientes han sido validados en la última década2. Entre los candidatos para el diseño de estrategias terapéuticas más eficaces3,de4,5, inmunoterapias
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Protocolo
Los siguientes temas animales que procedimiento se realizó según las directrices (acuerdo #00186.02, Comité de ética regional de Pays de la Loire (Francia)). PBMCs humanos se aislaron de la sangre de donantes sanos informados (Etablissement Français du Sang Nantes, Francia). Todas las medidas se realizan bajo condiciones estériles.
1. expansión de inespecífica de los linfocitos citotóxicos efectores T
- Preparar e irradiar células de alimentador en 35 Gy. Para la estimulación de 2 x 105 - 4 x 105 células efectoras preparar PBMCs6 de 10 x 10 y 1 x 106 BLCLs de tres donantes distintos y salu....
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Resultados
Este estudio describe la estrategia de transferencia adoptiva de células efectoras inmunes celulares en el cerebro de ratones portadores de tumor, basado en inyecciones estereotácticas realizadas directamente en la cama del tumor.
Para minimizar cualquier riesgo de lesión cerebral asociada a un volumen de inyección grande, la suspensión de células efectoras debe ser concentrada (20 x 106 células en 15-20 μl de PBS). P.......
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Discusión
Una transferencia adoptiva de seleccionado nativa o las células efectoras inmunes ingeniería representa un enfoque prometedor para tratar eficazmente los tumores, como los cánceres de cerebro infiltrativa, teniendo cuidado de limitar reactividades contra las células no transformadas15, 16,17,18. Sin embargo, el sistema nervioso central, que comprende el cerebro, tiene un particular estado inmu.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen al personal del Hospital de la Universidad animal (UTE) de Nantes para la cría de animales y cuidado, celular y tisular de instalaciones centrales de la Universidad de Nantes (MicroPICell) de la proyección de imagen para la proyección de imagen y la citometría (Cytocell) de Nantes por su asistencia técnica experta. Este trabajo fue financiado por el INSERM, CNRS, Université de Nantes, Institut National du Cancer (INCa #PLBio2014-155), Ligue Nationale contre le cáncer (AO 2017 InterRegional) y el consorcio europeo ERA-Net Transcan2 (Immunoglio). El equipo está financiado por la Fundación pour la Recherche Medicale (DEQ20170839118). Este trabajo fu....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| PBMC | de 3 donantes sanos diferentes | ||
| BLCL de | 3 donantes diferentes | ||
| Roswell Park Memorial Institute medio (RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Dutscher | S1810-500 | |
| L-glutamina | Gibco | 25030-024 | |
| penicilina/estreptomicina | Gibco | 15140-122 | |
| IL-2 | Novartis | proleukin | |
| PHA-L | Sigma | L4144 | |
| Marco estereotáxico | Stoelting Co. | 51600 | |
| Adaptador de ratón para marco estereotáxico | Stoelting Co. | 51624 | |
| inyector de bomba de microjeringa | WPI | UMP3-4 | |
| Jeringa NanoFil | WPI | NF34BV-2 | |
| Ratones NSG | Charles River | NSGSSFE07S | |
| Ketamina | Merial | Imalgè ne 1000 | |
| Xylazine | Bayer | Rompur 2% | |
| Tijeras | WPI | ||
| WPI | 501215 | ||
| OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
| Xylocaine | Astrazeneca | 3634461 |
Referencias
- Stupp, R., Roila, F. Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).
- Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. Standards of care for treatment of....
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Reimpresiones y permisos
