Здесь представлен полезный протокол для фиксации легких, который создает стабильное состояние для гистологического оценивания образцов легких по мышиной модели эмфиземы. Основным преимуществом этой модели является то, что она может исправить многие легкие с тем же постоянным давлением без коллапса легких или дефляции.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Фиксация легких под постоянным давлением для оценки эмфиземы у мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Эмфизема является важной особенностью хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). Исследования с участием эмфисематической мыши модели требуют оптимальной фиксации легких для получения надежных гистологических образцов легких. Из-за характера структурного состава легких, который состоит в основном из воздуха и ткани, существует риск того, что он разрушается или сдувается во время процесса фиксации. Существуют различные методы фиксации легких, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Метод фиксации легких, представленный здесь, использует постоянное давление, чтобы обеспечить оптимальную оценку тканей для исследований с использованием эмфисематичной модели легких мыши. Основным преимуществом является то, что он может исправить многие легкие с тем же условием в одно время. Образцы легких получаются у хронических мышей, подвергающихся воздействию сигарет. Фиксация легких осуществляется с использованием специализированного оборудования, которое позволяет производить постоянное давление. Это постоянное давление поддерживает легких в достаточно завышенном состоянии. Таким образом, этот метод генерирует гистологический образец легких, который подходит для оценки сигаретного дыма индуцированной мягкой эмфиземы.
Введение
ХОБЛ является одной из ведущих мировых причин смерти1. Сигаретный дым является наиболее важной причиной ХОБЛ, но механизмы патогенеза остаются неполно определенными. ХОБЛ демонстрирует две основные характеристики, включая постепенное ограничение воздушного потока и аномальную воспалительную реакцию легких. Эмфисематизивное расстройство часто возникает в легких пациентов ХОБЛ2. Патологические находки эмфиземы характеризуются разрушением альвеолярной стены3. Несколько видов животных были использованы для создания моделей ХОБЛ in vivo (т.е. собак, морских свинок, обезьян и грызунов)....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Следующие методы были одобрены комитетами по уходу и использованию животных Медицинской школы Университета Джунтендо. Были соблюдены Руководящие принципы по надлежащему проведению экспериментов на животных, Научный совет Японии, 1 июня 2006 года. Есть три основных шага в этом методе: 1) рассечение мыши, 2) легких exsanguination, и 3) фиксация тканей легких при содействии специализированного оборудования. Как правило, образцы легких обрабатываются для встраивания после 48 ч фиксации12,15,16,17,18.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Как описано ранее, специализированное оборудование, которое генерирует длительное постоянное давление, можно разделить на три части(рисунок 3А). Нижняя часть является точкой, в которой вставить образец легких(Рисунок 4A). Легкое подключено через канюлю (20 G) к кончику потока формалина с помощью трехстороннего стоп-петуха(рисунок 4B). Давление генерируется из различных уровней повер.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Процедура фиксации легких грызунов, представленная здесь, не нова; однако, эта система имеет несколько преимуществ. Во-первых, он может исправить многие легкие (максимум 20) с тем же условием в одно время. Общество токсикологической патологии утверждает, что давление для гравитации зависания варьируется от 22-25 смH2O22. Примечательно, что в нескольких исследованиях была проведена фиксация легких при давлении 25 см2O13,19,<.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют конкурирующих интересов, чтобы объявить.
Благодарности
Эта работа была частично поддержана JSPS KAKENHI Грант номер 26461199 (Т. Сато) и Институт по вопросам окружающей среды и гендерной медицины, Juntendo университета Высшей школы медицины, Грант номер E2920 (Т. Сато). Фандер не принимал никакого значения в разработке современных методов и в написании рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10% формалин (нейтральный буферный раствор формалина) | Wako | 060-01667 | |
| Изогнутые щипцы | Hammacher | HSC187-11 | |
| Канюля, размер 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Канюля, размер 22G | Terumo | SR-OT2225C | Канюля для обескровливания легких |
| Щипцы | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Нижняя емкость (акриловое стекло) | Tokyo Science | Изготовленный на заказ | Компонент оборудования, работающего под давлением |
| Роликовый насос | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Насосная машина для обескровливания легких |
| Роликовый насос RP-2000 | Eyela (Токио) Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Насос для оборудования высокого давления |
| Силиконовая трубка & Oslash; 9 мм | Sansyo | 94-0479 | Компонент оборудования для давления |
| Сомнопентил (64,8 мг/мл) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Пентобарбитал Натриевые |
| хирургические ножницы | Hammacher | HSB014-11 | |
| Шовная нить, размер 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Шприц, 1 мл | Terumo | SS-01T | |
| Шприц, 1 мл с иглой | Terumo | SS-01T2613S | |
| Шприц, 10 мл | Terumo | SS-10ESZ | |
| Трехходовой запорный кран | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Верхний контейнер (материал из акрилового стекла) | Tokyo Science | Индивидуальный компонент | оборудования под давлением |
Ссылки
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
