In diesem Experiment wird eine Maus in ihre Schwanzvene mit Rhodamine B Isothiocyanat-Dextran injiziert, die Blutgefäße färben können. Nachdem die Leber exponiert und fixiert wurde, kann ein bestimmter Teil der Leber ausgewählt werden, um das tiefe Gewebe im lebenden Körper mittels Multiphotonenmikroskopie zu beobachten.
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Methodenartikel
Multiphotonmikroskopische Beobachtung von Gefäßen im Mauslebergewebe
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Beobachtung der intravaskulären Dynamik des Lebergewebes der Maus ermöglicht es uns, weitere eingehende Beobachtungen und Studien über gewebebedingte Erkrankungen der Mausleber durchzuführen. Eine Maus wird mit einem Farbstoff injiziert, der Blutgefäße färben kann. Um die Mausleber in vivo zu beobachten, wird sie freigelegt und in einem Rahmen fixiert. Mit einem Multiphotonenmikroskop werden zwei- und dreidimensionale Bilder der Blutgefäße im Lebergewebe gewonnen. Bilder der Gewebe an den ausgewählten Standorten werden kontinuierlich erfasst, um langfristige Veränderungen zu beobachten; die dynamischen Veränderungen der Blutgefäße in den Lebergeweben werden ebenfalls beobachtet. Die Multiphotonenmikroskopie ist eine Methode zur Beobachtung der Zell- und Zellfunktion in tiefen Gewebeabschnitten oder Organen. Die Multiphotonenmikroskopie hat eine Empfindlichkeit gegenüber Gewebemikrostrukturen und ermöglicht die Abbildung von biologischen Geweben mit hoher räumlicher Auflösung in vivo, wodurch die biochemischen Informationen der Organisation erfasst werden können. Multiphotonenmikroskopie wird verwendet, um einen Teil der Leber zu beobachten, aber die Leber zu fixieren, um das Bild stabiler zu machen, ist problematisch. In diesem Experiment wird ein spezieller Vakuumsauger verwendet, um die Leber zu fixieren und ein stabileres Bild der Leber unter dem Mikroskop zu erhalten. Darüber hinaus kann diese Methode verwendet werden, um dynamische Veränderungen bestimmter Substanzen in der Leber zu beobachten, indem solche Stoffe mit Farbstoffen markiert werden.
Einleitung
Blutgefäße können Nährstoffe für verschiedene Organgewebe des menschlichen Körpers liefern, und Austausch Substanzen. Gleichzeitig funktionieren viele Zytokine, Hormone, Medikamente und Zellen auch durch Gefäßtransport zu bestimmten Orten. Die Beobachtung von Gefäßveränderungen im Lebergewebe kann helfen, die Verteilung des Blutflusses im Lebergewebe und den Transport von Substanzen zu verstehen, und bei der Analyse bestimmter vaskulärer Erkrankungen helfen1,2.
Es gibt viele Möglichkeiten, die Blutgefäße der Leber bei Mäusen zu beobachten. Unter ihnen hat die optische Mikroskopie vi....
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Protokoll
Alle Tierpflege und -verfahren entsprachen der Politik des China Nanfang Hospital für Heide und Wohlbefinden (Antrag Nr.: NFYY-2019-73).
1. Mausvorbereitung
- Anästhesisieren Sie die Maus.
- Natriumpentobarbital (50 mg/kg) in einer Spritze vorbereiten.
- Schnappen Sie sich die Maus (8 Wochen altes Männchen C57BL/6) mit der linken Hand, so dass ihr Bauch nach oben und ihr Kopf niedriger als sein Schwanz ist. Desinfizieren Sie die Bauchhaut mit 75% Alkohol.
- Halten Sie die Spritze in der rechten Hand, durchbohren Sie den Bauch weiße Linie mit der Nadel leicht auf der rechten Seite der Haut um 3-5 mm. Stellen S....
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Ergebnisse
Die Verteilung der Blutgefäße in der Leber kann in Abbildung 1gesehen werden, die mit Multiphotonenmikroskopie erhalten wurde. Das Blutgefäß ist in eine Vielzahl von Zweigen unterteilt, die von einem Stamm austreten und auf den umgebenden Raum verteilt sind. Der äußere Umfang des Blutgefäßes ist rot, die innere Höhle ist dunkel, und es gibt viele Dinge im Inneren. Je klarer das Bild, desto näher an der Beobachtungsebene ist es. Es gibt auch einige rote Flecken um, wahrscheinlich, weil der Fa.......
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Diskussion
Die Beobachtung eines bestimmten lebenden Gewebes ist ein wirksames Mittel, um die Veränderungen, Lokalisierung und biologischen Wirkungen des Materials im Gewebe zu verstehen17. In diesem Experiment sind die wichtigen Schritte die Fixierung der Leber mit einer Organbildvorrichtung, die das Problem der Bewegungsartefakte durch Atmung und Herzschläge lösen kann, und der Einsatz eines Multiphotonenmikroskops zur Beobachtung. Mit dieser Methode werden die inneren Gewebe der Leber in vivo durch ein Mu.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81772133, 81902444), dem Guangdong Natural Science Fund (2020A1515010269, 2020A1515011367), dem Guangzhou Citizen Health Science and Technology Research Project (201803010034, 201903010072) und dem Military Medical Innovation Project (17CXZ008).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1 mL Spritze x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W Heizkissen | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolutes Ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Saugfähiger Wattebausch | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse chirurgisches Instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Inklusive Schere und Pinzette |
| Multiphotonenmikroskopie | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ-Bildgebungsleuchte | BiolinkOptics Technology | BL336 | Inklusive Saugnapf, Schlauch, Unterdruckpumpe und Halterung |
| Rhodamin B Isothiocyanat– Dextran | Sigma | R9379 | |
| Rasiermaschine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Natrium-Pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
Referenzen
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
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Nachdrucke und Genehmigungen
