Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

In vitro Переваривание эмульсий в одной капле с помощью многофазного обмена моделируемых желудочно-кишечных жидкостей

Published: November 18, 2022 doi: 10.3791/64158
Automatic Translation
1, 2, 3, 1
1Department of Applied Physics, Faculty of Sciences, Campus de Fuentenueva, University of Granada, 2Department of Physical Chemistry, Faculty of Pharmacy, Campus de Cartuja, University of Granada, 3Department of Software Engineering, School of Computer and Telecommunication Engineering, Campus de Aynadamar, University of Granada

Summary

Подвесной баланс капельной поверхности пленки, реализованный с многофазным обменом, получившим название OCTOPUS, позволяет имитировать пищеварительные условия путем последовательного субфазного обмена исходного объемного раствора с моделируемыми желудочно-кишечными жидкостями. Моделируемое пищеварение in vitro контролируется путем регистрации in situ межфазного напряжения переваренного межфазного слоя.

Abstract

Эмульсии в настоящее время используются для инкапсуляции и доставки питательных веществ и лекарств для лечения различных желудочно-кишечных заболеваний, таких как ожирение, обогащение питательными веществами, пищевая аллергия и заболевания пищеварительной системы. Способность эмульсии обеспечивать желаемую функциональность, а именно достигать определенного участка в желудочно-кишечном тракте, ингибировать/замедлять липолиз или облегчать усвояемость, в конечном итоге зависит от ее восприимчивости к ферментативной деградации в желудочно-кишечном тракте. В эмульсиях масло-в-воде липидные капли окружены межфазными слоями, где эмульгаторы стабилизируют эмульсию и защищают инкапсулированное соединение. Достижение индивидуальной усвояемости эмульсий зависит от их первоначального состава, но также требует мониторинга эволюции этих межфазных слоев, поскольку они подвергаются различным фазам желудочно-кишечного пищеварения. Подвесной баланс капельной поверхности, реализованный с многофазным обменом, позволяет моделировать переваривание эмульсий in vitro в одной водной капле, погруженной в масло, путем применения индивидуальной модели статического пищеварения. Транзит через желудочно-кишечный тракт имитируется субфазным обменом исходного капельного объемного раствора с искусственными средами, имитируя физиологические условия каждого отсека/стадии желудочно-кишечного тракта. Динамическая эволюция межфазного напряжения регистрируется in situ на протяжении всего моделируемого желудочно-кишечного пищеварения. Механические свойства переваренных интерфейсов, такие как межфазная дилатационная эластичность и вязкость, измеряются после каждой фазы пищеварения (пероральная, желудочная, тонкая кишка). Состав каждой пищеварительной среды может быть настроен с учетом особенностей пищеварительных состояний, включая желудочно-кишечные патологии и пищеварительные среды младенцев. Выявлены специфические межфазные механизмы, влияющие на протеолиз и липолиз, обеспечивающие инструменты для модуляции пищеварения с помощью межфазной инженерии эмульсий. Полученными результатами можно манипулировать для разработки новых пищевых матриц с индивидуальными функциональными возможностями, такими как низкая аллергенность, контролируемое потребление энергии и снижение усвояемости.

Introduction

Понимание того, как переваривается жир, что включает в себя эмульсионное пищеварение, важно для рационального проектирования продуктов с индивидуальной функциональностью1. Субстратом для переваривания жира является эмульсия, так как жир эмульгируется при потреблении путем механического воздействия и смешивания с биоповерхностностями во рту и желудке. Кроме того, большая часть жира, потребляемого людьми, уже эмульгирована (например, молочные продукты), и в случае младенцев или некоторых пожилых людей это единственная форма потребления. Следовательно, дизайн продуктов на основе эмульсии с определенными профилями пищеварения очень важен в питании1. Кроме того, эмульсии могут инкапсулировать и доставлять питательные вещества, лекарства или липофильные биоактивныевещества 2 для лечения различных желудочно-кишечных заболеваний, таких как ожирение3, обогащение питательными веществами, пищевая аллергия и заболевания пищеварительной системы. В эмульсиях масло-вода липидные капли окружены межфазными слоями эмульгаторов, таких как белки, поверхностно-активные вещества, полимеры, частицы и смеси4. Роль эмульгаторов двояка: стабилизировать эмульсию5 и защитить/транспортировать инкапсулированное соединение к определенному участку. Достижение индивидуальной усвояемости эмульсий зависит от их исходного состава, но также требует мониторинга непрерывной эволюции этого интерфейса во время транзита через желудочно-кишечный тракт (рисунок 1).

Figure 1
Рисунок 1: Применение межфазной инженерии эмульсий для борьбы с некоторыми из основных желудочно-кишечных заболеваний. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Переваривание липидов в конечном счете является межфазным процессом, поскольку оно требует адсорбции липаз (желудочных или панкреатических) на границе раздела масло-вода эмульгированных липидных капель через межфазный слой для достижения и гидролиза триглицеридов, содержащихся в масле, в свободные жирные кислоты и моноацилглицериды6. Схематизирована на рисунке 2. Желудочная липаза конкурирует с пепсином и фосфолипидами в желудке за границу раздела масло-вода (рисунок 2, желудочное пищеварение). Затем панкреатическая липаза / колипаза конкурируют с трипсином / химотрипсином, фосфолипидами, солями желчи и пищеварительными продуктами в тонком кишечнике. Протеазы могут изменять межфазный охват, предотвращая или способствуя адсорбции липазы, в то время как соли желчи очень активны на поверхности и вытесняют большую часть оставшегося эмульгатора для содействия адсорбции липазы (рисунок 2, кишечное пищеварение). В конце концов, скорость и степень липолиза зависят от межфазных свойств исходной/желудочной перевариваемой эмульсии, таких как толщина, межмолекулярные связи и электростатические и стерические взаимодействия. Соответственно, мониторинг эволюции межфазного слоя по мере его переваривания предлагает экспериментальную платформу для выявления межфазных механизмов и событий, влияющих на адсорбцию липазы и, следовательно, на переваривание липидов.

Figure 2
Рисунок 2: Принципиальная диаграмма, иллюстрирующая роль интерфейсов в желудочно-кишечном липидном переваривании. Гидролиз пепсина изменяет межфазный состав в желудочной фазе, в то время как желудочная липаза гидролизует триглицериды. В тонком кишечнике трипсин/химотрипсин дополнительно гидролизуют межфазную пленку, в то время как липолиз протекает путем адсорбции BS/липаз, гидролиза триглицеридов и десорбции липолитических продуктов путем солюбилизации в мицеллах/комплексе BS. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Подвесное капельное оборудование в Университете Гранады (UGR) реализовано с запатентованной технологией, коаксиальным двойным капилляром, что позволяет осуществлять субфазный обмен объемного раствора7. Капилляр, удерживающий подвесную каплю, состоит из расположения двух коаксиальных капилляров, которые независимо соединены с каждым каналом двойного микроинжектора. Каждый микроинжектор может работать независимо, что позволяет обмениваться сброшенным содержимым сквозным потоком7. Соответственно, субфазный обмен состоит из одновременного введения нового раствора с внутренним капилляром и экстракции объемного раствора с наружным капилляром с использованием той же скорости потока. Этот процесс позволяет заменить объемный раствор без нарушения межфазной области или объема капли. Позже эта процедура была модернизирована до многофазного обмена, который позволяет проводить до восьми последовательных подфазных обменов капельного объемного раствора8. Это позволяет моделировать пищеварительный процесс в одной водной капле, взвешенной в липидных средах, путем последовательного обмена объемным раствором с искусственными средами, имитирующими различные отсеки (рот, желудок, тонкая кишка). Вся установка представлена на рисунке 3, включая детали компонентов. Шприцы в микроинжекторе соединены с восемью клапанами, каждый из которых подключается к микроцентрифужной трубке, содержащей искусственную пищеварительную жидкость с компонентами, описанными на фиг.2.

Figure 3
Рисунок 3: Общий вид OCTOPUS со всеми компонентами. ПЗС-камера, микроскоп, микропозитор, термостабилизированная ячейка и двойной капилляр соединены независимо друг от друга с двойным микроинжектором с двумя шприцевыми шприцевыми, соединенными с восемью клапанами. Каждый шприц соединяется с капиллярами, четырьмя микроцентрифужными трубками с образцом и одним разрядом. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

На рисунке 4А показано, как каждая из искусственных пищеварительных жидкостей вводится в подвесную каплю путем субфазного обмена через двойной капилляр. Каждое пищеварительное соединение, описанное на фиг.2 , может применяться одновременно/последовательно, имитируя прохождение через желудочно-кишечный тракт. Искусственные пищеварительные жидкости содержат различные ферменты и биозащищенные вещества, которые изменяют межфазное напряжение исходного эмульгатора, как схематизировано на рисунке 4B. Программное обеспечение DINATEN (см. Таблицу материалов), также разработанное в UGR, регистрирует эволюцию межфазного напряжения в режиме реального времени, когда начальный межфазный слой переваривается in vitro. Кроме того, после каждой пищеварительной фазы дилатационная эластичность межфазного слоя вычисляется путем наложения периодических колебаний объема/межфазной области на стабилизированный межфазный слой и регистрации реакции межфазного напряжения. Период/частота и амплитуда колебаний могут варьироваться, а обработка изображений с помощью программного обеспечения CONTACTO обеспечивает дилатационные реологические параметры8.

Figure 4
Рисунок 4: Примеры профилей пищеварения. (А) Исходный слой эмульгатора подвергают искусственной пищеварительной среде, помещенной в микроцентрифугу путем последовательного субфазного обмена различных растворов в подвесную каплю. (B) Общая эволюция межфазного напряжения (ось Y) исходного эмульгатора в зависимости от времени (ось x), когда он переваривается in vitro различными ферментами/биоповерхноводчиками в искусственных средах. Заключительный субфазный обмен с простой кишечной жидкостью измеряет десорбцию переваренного липида путем солюбилизации в смешанных мицеллах. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

В данном исследовании представлен общий протокол, предназначенный для измерения in vitro переваривания межфазных слоев с помощью подвесного капельного оборудования9. Начальный межфазный слой подвергается последовательно условиям, имитирующим прохождение через желудочно-кишечный тракт, как показано на рисунке 2. Эти различные пищеварительные среды вводят в подвесную каплю путем субфазного обмена различных растворов, содержащихся в микроцентрифужных трубках (рисунок 4А). Состав этих сред может быть настроен в зависимости от желудочно-кишечных состояний, которые будут оцениваться, а именно желудочного / кишечного протеолиза / липолиза, что позволяет измерять кумулятивные эффекты и синергии10. Экспериментальные условия, используемые для имитации процесса пищеварения в каждом отсеке, соответствуют международному консенсусному протоколу, опубликованному INFOGEST, в котором подробно описывается рН и количество электролитов и ферментов11. Экспериментальное устройство на основе подвесного капли позволяет регистрировать межфазное натяжение in situ на протяжении всего моделируемого процесса пищеварения. Дилатационная реология межфазного слоя вычисляется в конце каждой пищеварительной стадии. Таким образом, каждый эмульгатор предлагает профиль пищеварения, иллюстрирующий свойства переваренных интерфейсов, как показано на рисунке 4B. Это позволяет извлекать выводы относительно его восприимчивости или устойчивости к различным стадиям пищеварительного процесса. В целом, искусственные пищеварительные среды содержат кислоту / основной рН, электролиты, протеазы (желудочные и кишечные), липазы (желудочные и кишечные), желчные соли и фосфолипиды, которые растворяются в соответствующих пищеварительных жидкостях (желудочных или кишечных). На рисунке 4B показан общий профиль эволюции межфазного напряжения эмульгатора, сначала подвергающегося протеазному действию, а затем липазы. В целом, протеолиз межфазного слоя способствует увеличению межфазного напряжения вследствие десорбции гидролизованных пептидов 9,12, в то время как липолиз приводит к очень резкому снижению межфазного напряжения за счет адсорбции желчных солей и липаз13. Заключительный субфазный обмен с кишечной жидкостью истощает объемный раствор нерассеянного/переваренного материала и способствует десорбции растворимых соединений и солюбилизации переваренных липидов в смешанных мицеллах. Это количественно определяется зарегистрированным увеличением межфазного напряжения (рисунок 4В).

Таким образом, экспериментальная конструкция, реализованная в подвесной капле для имитации переваривания in vitro в одной капле, позволяет измерять кумулятивные эффекты и синергизм, поскольку процесс пищеварения последовательно применяется к начальному межфазному слою10. Состав каждой пищеварительной среды может быть легко настроен с учетом особенностей пищеварительных состояний, включая желудочно-кишечные патологии или пищеварительные среды14 у младенцев. Затем идентификация межфазных механизмов, влияющих на протеолиз и липолиз, может быть использована для модуляции пищеварения путем межфазной инженерии эмульсий. Полученные результаты могут быть применены при разработке новых пищевых матриц с индивидуальными функциональными возможностями, такими как низкая аллергенность, контролируемое потребление энергии и снижение усвояемости 15,16,17,18,19.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Последовательность очистки всей стеклянной посуды, используемой в экспериментах по поверхностной науке

  1. Протрите стеклянную посуду концентрированным чистящим раствором (см. Таблицу материалов), разведенным в воде (10%).
  2. Тщательно промойте последовательностью водопроводной воды, пропанола, дистиллированной воды и сверхчистой воды. Высушите в кабине и храните в закрытом шкафу до использования.

2. Пробоподготовка

  1. Готовят искусственные пищеварительные среды в соответствии со стандартизированными протоколами INFOGEST11,20 (см. Таблицу материалов). Таблицу 1 и включить небольшие корректировки к требованиям межфазной работы по предотвращению поверхностно-активного загрязнения и разбавления образцов (1:10)10.
  2. Подготовьте раствор эмульгатора, выполнив следующие действия.
    1. Приготовить 0,01 л концентрированного раствора (1 кг· L−1) эмульгатор или смесь эмульгаторов (см. Таблицу материалов) в исходном буфере (таблица 1) и хранить при легком перемешивании в течение ночи.
    2. Разбавить до 0,1 кг· L−1 (или по мере необходимости) для насыщения интерфейса; достичь псевдоплановой позиции в межфазной напряженности после 1 ч адсорбции на постоянной межфазной площади вслед за ранее опубликованным докладом21.
    3. Хранить под легким перемешиванием в течение 15 мин перед применением.
  3. Очистите масляную фазу.
    1. Приготовить смесь растительного масла (подсолнечного, оливкового, триолеина и др.) и метасиликатные смолы магния (см. Таблицу материалов) в пропорции 2:1 w/w в большом стакане. Хранить при легком механическом перемешивании не менее 3 ч.
    2. Центрифугировать смесь при 8 000 х г в течение 30 мин при комнатной температуре в коммерческой центрифуге (см. Таблицу материалов).
    3. Фильтруйте масляную смесь под вакуумом шприцевым фильтром (размер пор 0,2 мкм) (см. Таблицу материалов). Хранить в чистых янтарных бутылках, запечатанных и пузырьков с азотом, до использования.

3. Калибровка и очистка OCTOPUS

  1. Промыть все трубки сверхчистой водой, установив последовательность очистки обоих шприцев и всех клапанов через капилляр (клапаны 6/4) и на внешний выход (клапан 8-синего цвета). Выполните это, нажав кнопку очистки в левом диалоговом окне (дополнительный рисунок 1A).
  2. Проверьте поверхностное натяжение7 воды комнатной температуры, сформировав каплю воды и измерив в режиме реального времени в течение 5 мин (Дополнительный рисунок 1В, С).
    1. Установка дифференциальной плотности на воздух-вода (0,9982 кг· L−1) в левом диалоговом окне, дополнительный рисунок 1B.
  3. Наполните чистую кювету (оптическое стекло) 0,002 л чистого растительного масла и поместите его в держатель кюветы в термостатической ячейке (рисунок 3).
  4. Установите термостат и обеспечьте температурное равновесие при 37 °C.
  5. Проверьте межфазное натяжение воды-масла при комнатной температуре7.
    1. Установите дифференциальную плотность на растительное масло-воду (оливковое масло: 0.800 кг· L−1) (дополнительный рисунок 1с).
    2. Вводят 40 мкл со скоростью 0,5 мкл·с−1 и измеряют в режиме реального времени каждую секунду до окончания инъекции. Это простой динамический процесс (дополнительный рисунок 1B, D).
    3. График межфазного напряжения в зависимости от объема капель в техническом паспорте.
    4. Убедитесь, что диапазон объема капель обеспечивает значение межфазного натяжения независимо от объема капли. График межфазной области в зависимости от объема капель.
    5. Запрограммируйте процесс, содержащий два этапа (дополнительный рисунок 1B и дополнительный рисунок 2A), следуя приведенным ниже шагам.
      1. С помощью внутреннего шприца вводите объем, содержащийся в этом диапазоне постоянного межфазного напряжения.
      2. Поддерживайте константу межфазной площади на значении, выбранном на шаге 3.5.4, и регистрируйте межфазное напряжение в течение 5 мин7.

4. Программирование одного экспериментального процесса в DINATEN для каждой пищеварительной стадии

ПРИМЕЧАНИЕ: Параметры процесса см. в дополнительном рисунке 1B.

  1. Выполните начальный элемент управления.
    1. Для образования капель вводят 10 мкл (±5 мкл) раствора эмульгатора в капилляр (клапан 6) (дополнительный рисунок 2А).
    2. Регистрируют адсорбцию на постоянной межфазной площади21 20мм2 (±10мм2) в течение 1 ч (дополнительный рисунок 2В).
    3. Запишите дилатационную реологию8 (Дополнительный рисунок 2С).
      1. Установите амплитуду колебаний на 1,25 мкл, период 10 с.
      2. Запишите адсорбцию в выбранной межфазной зоне (этап 4.1.2) в течение 10 с.
      3. Повторите шаг 4.1.3 на разных периодах: 5 с, 20 с, 50 с и 100 с.
  2. Запись желудочного пищеварения.
    1. Запись адсорбции21 на выбранной межфазной площади в течение 10 с.
    2. Субфазный обмен7 с жидкостью в клапане 2 (sSGF) и желудочными ферментами (таблица 1) (дополнительный рисунок 2D).
      1. Заполните левый шприц от клапана 2. Вводят 125 мкл в клапан 6-капиллярный с левым шприцем при 5 мкл·с−1.
      2. Экстрагировать 125 мкл из капилляра правым шприцем при 5 мкл·с−1. Выгрузите правый шприц к выходному клапану 8. Повторите шаги 4.2.2.1-4.2.2.2 10 раз, чтобы обеспечить полный обмен.
    3. Регистрировать адсорбцию21 в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 1 ч (дополнительный рисунок 2В).
    4. Запишите дилатационную реологию8 (Дополнительный рисунок 2С).
      1. Установите амплитуду колебаний на 1,25 мкл, период 10 с.
      2. Запишите адсорбцию выбранной межфазной области на этапе 4.1.2 в течение 10 с. Повторяют в разные периоды: 5 с, 20 с, 50 с, 100 с.
  3. Запись кишечного пищеварения.
    1. Запишите адсорбцию21 в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 10 с (дополнительный рисунок 2В).
    2. Субфазный обмен7 с жидкостью в клапане 3 (sSIF) и кишечными ферментами/солями желчи/фосфолипидами (таблица 1) (дополнительный рисунок 2D).
      1. Заполните левый шприц от клапана 2. Вводят 125 мкл в клапан 6-капиллярный с левым шприцем при 5 мкл·с−1. Экстрагировать 125 мкл из капилляра правым шприцем при 5 мкл·с−1.
      2. Выгрузите правый шприц к выходному клапану 8. Повторите шаги 4.3.2.1-4.3.2.2 10 раз, чтобы обеспечить полный обмен.
    3. Запишите адсорбцию21 в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 1 ч.
    4. Запишите дилатационную реологию8 (Дополнительный рисунок 2С).
      1. Установите амплитуду колебаний на 1,25 мкл, период 10 с.
      2. Запишите адсорбцию в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 10 с.
      3. Повторяют в разные периоды: 5 с, 20 с, 50 с, 100 с.
  4. Запишите описание, выполнив следующие действия.
    1. Запишите адсорбцию21 в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 10 с (дополнительный рисунок 2В).
    2. Подфазный обмен7 с жидкостью в клапане 5 (sSIF) (таблица 1, дополнительный рисунок 2D).
      1. Заполните левый шприц от клапана 5. Вводят 125 мкл в клапан 5-капилляр левым шприцем при 5 мкл·с−1.
      2. Экстрагировать 125 мкл из капилляра правым шприцем при 5 мкл·с−1. Выгрузите правый шприц к выходному клапану 8. Повторите шаги 4.4.2.1-4.4.2.2 10 раз, чтобы обеспечить полный обмен.
    3. Регистрировать адсорбцию21 в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 1 ч (дополнительный рисунок 2В).
    4. Запишите дилатационную реологию8 (Дополнительный рисунок 2С).
      1. Поддерживать амплитуду 1,25 мкл, период 10 с.
      2. Запишите адсорбцию в выбранной межфазной зоне на этапе 4.1.2 в течение 10 с.
      3. Повторите шаг 4.4.4 на разных периодах: 5 с, 20 с, 50 с, 100 с.

5. Настройка эксперимента

  1. Заполните микроцентрифужные трубки искусственной средой пищеварения и подключите каждую из них к соответствующему клапану соответствующей трубкой.
  2. Заполните трубку в клапанах 2-5 путем очистки от клапана 2, клапана 3, клапана 4 и клапана 5 до внешнего выхода (клапан 8) (дополнительный рисунок 1A).
  3. Заполните трубку в клапане 1 путем очистки от клапана 1 до клапана 6-капиллярного 5 раз.
  4. Поместите капилляр в масляную фазу. Нагрузите левый шприц клапаном 1 (исходный раствор, табл. 1).
  5. Начните последовательную обработку этапа 4.1 - начальная, стадия 4.2 - желудочная, стадия 4.3 - кишечник и стадия 4.4 - десорбция, сохраняя данные в конце каждого процесса.

6. Расчет дилатационных реологических параметров с помощью программного обеспечения для обработки изображений CONTACTO8

ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения дополнительной информации см. Maldonado-Valderrama et al.8.

  1. Загрузите изображения, соответствующие площади колебаний на заданной частоте и амплитуде (дополнительный рисунок 3А).
  2. Нажмите «Реология» (дополнительный рисунок 3B) и получите дилатационные параметры (дополнительный рисунок 3C).
  3. Скопируйте и вставьте результаты в таблицу данных.

7. Построение экспериментальных результатов

  1. Пересчитайте столбец времени на каждом из этапов процесса пищеварения, добавив последние данные времени предыдущего шага.
  2. График межфазного напряжения и аддитивного времени для каждого из этапов используемого процесса пищеварения.
  3. График конечного межфазного напряжения/дилатационной эластичности и вязкости, полученных в конце каждой стадии, по сравнению с фазой пищеварения: начальное, желудочное сбраживание, двенадцатиперстное пищеварение и десорбция.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

В этом разделе приведены различные примеры профилей пищеварения, измеренных с помощью OCTOPUS. Общий вид моделируемого профиля пищеварения показан на рисунке 4B. Межфазное напряжение обычно представлено со временем в профиле пищеварения. Различные рассматриваемые фазы/стадии пищеварения представлены различными цветами. Первая фаза образует начальный слой и соответствует фазе адсорбции эмульгатора или белка/поверхностно-активного вещества/полимера, в зависимости от каждого случая. Затем различные пищеварительные жидкости вводят путем субфазного обмена в объемный раствор, содержащий новые среды. Новая подфаза производит изменения в межфазном напряжении исходного слоя эмульгатора и в дилатационной реологии, измеренной в конце каждой пищеварительной стадии. Процесс пищеварения может состоять максимум из восьми пищеварительных стадий.

Figure 5
Рисунок 5: Пример профилей желудочного пищеварения. (А) Желудочный протеолиз сывороточного альбумина человека. Пищеварительные среды применяют путем субфазного обмена растворами, описанными в экспериментальном разделе при T = 37 °C. Синий: начальный буфер с белком, красный: sSGF с пепсином. Перепечатано с разрешения дель Кастильо-Сантаэльи и др.12. (B) Желудочный липолиз цитрусового пектина. Пищеварительные среды применяют путем субфазного обмена растворами, описанными в экспериментальном разделе при T = 37 °C. Синий: начальный буфер с цитрусовым пектином, желтый: sSGF с желудочной липазой, серый: sSGF. Перепечатано с разрешения Infantes-Garcia et al.17. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

На фиг.5 показаны некоторые экспериментальные результаты, полученные для желудочного переваривания эмульгаторов. На рисунке 5А сывороточный альбумин человека (HSA)12 сначала адсорбируется на границе раздела оливковое масло-вода, уменьшая межфазное напряжение, чтобы достичь плато через 1 ч. В конце этой фазы реология измеряется при частоте (периоде) 0,1 Гц (10 с). На втором этапе sSGF с пепсином добавляют путем субфазного обмена. Это состоит в том, чтобы ввести объем одним шприцем и извлечь тот же объем с другим шприцем. Таким образом, площадь капли не изменяется, сохраняя необратимо адсорбированные компоненты на границе раздела масло-вода. Обмен повторяется от 10 до 15 раз. При субфазном обмене с sSGF и пепсином межфазное напряжение увеличивается вследствие гидролиза белка, который разбавляет исходный белковый слой (рис. 5А). На фиг.5В цитрусовый пектин (CP)17 адсорбируется на триглицеридной масляной воде в течение 40 мин, после чего происходит дилатационная реология при 0,1 Гц. На втором этапе в основную часть капли вводят sSGF с желудочной липазой; и наоборот, к протеолизу, липолиз приводит к адсорбции липазы и образованию жирных кислот, которые остаются на границе раздела, уменьшая межфазное напряжение. Фаза десорбции является третьей стадией, на которой оценивается выработка гидрофильных или солюбилизация липофильных продуктов липолиза. На рисунке 5B показано, что подфазный обмен с sSGF обеспечивает нулевой отклик межфазного напряжения. Это можно интерпретировать как выработку липофильных пищеварительных продуктов, которые необратимо адсорбируются и не солюбилизируются, оставаясь закрепленными на границе раздела. Отсутствие солей желчи в желудочной фазе отвечает за отсутствие солюбилизации. Степень липолиза может быть качественно проанализирована по значению достигнутого межфазного напряжения.

Figure 6
Рисунок 6: Пример профилей кишечного пищеварения. (A) Адсорбционно-десорбционные профили солей желчи (черные квадраты), липазы (серые треугольники) и липазы + желчных солей (оранжевые ромбоиды) в sSIF при 37 °C. Перепечатано с разрешения Macierzanka et al.13. (B) Адсорбция солей желчи + липазы на ранее адсорбированные F68 (темно-зеленый) и F127 (светло-зеленый), адсорбция желчных солей (желтый) в sSIF. Десорбция: субфазный обмен с sSIF на желчные соли (оранжевый), F68 (темно-фиолетовый) и F127 (светло-фиолетовый). Перепечатано с разрешения Torcello-Gómez et al.19. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

На фиг.6 показаны экспериментальные результаты, полученные для кишечного переваривания эмульгаторов. В отличие от желудочного пищеварения, наличие желчных солей в тонкой кишке обеспечивает различные профили десорбции при субфазном обмене с sSIF и истощении объемного раствора. На фиг.6А показаны профили десорбции, полученные для чистых желчных солей, чистой липазы и смешанных липаз/желчных солей 8,9,10,13. Желчные соли адсорбируются обратимо на границе раздела нефть-вода, и, следовательно, они полностью десорбируются при субфазном обмене с sSIF, о чем свидетельствует увеличение межфазного напряжения для достижения значения голой границыраздела нефть-вода 8,13. И наоборот, липаза адсорбируется необратимо, что задается постоянным значением межфазного напряжения после субфазного обмена sSIF. Смесь липазы и желчных солей обеспечивает промежуточный профиль десорбции, определяемый ограниченным увеличением межфазного напряжения при субфазном обмене sSIF до промежуточного значения. Оставшийся межфазный слой содержит липазу и свободные жирные кислоты. Желчные соли, возможно, десорбировались от границы раздела и солюбилизировали некоторые из свободных жирных кислот, образующихся при липолизе. На рисунке 6В показана эволюция межфазного напряжения при липолизе двух вариантов плурона: F127 и F6819. На фиг.6В показано резкое снижение межфазного напряжения из-за адсорбции липазы и желчных солей и образования свободных жирных кислот на ранее сформированных межфазных пленках F68 и F127 на границе раздела нефть-вода. Стадия десорбции показывает повышенное межфазное напряжение, вызванное субфазным обменом с sSIF, который количественно определяет солюбилизацию липолитических продуктов.

Figure 7
Рисунок 7: Пример полных динамических профилей желудочно-кишечного пищеварения. (А) Профиль пищеварения in vitro адсорбированной пленки AS-48 на границе раздела воздух-вода. Пищеварительные среды применяют путем субфазного обмена растворами, описанными в экспериментальном разделе при T = 37 °C. Контроль: исходный буфер с AS-48, пепсин: sSGF с пепсином, трипсин: sSIF с трипсином + химотрипсин, десорбция: sSIF. Перепечатано с разрешения дель Кастильо-Сантаэллы и др.18. (B) Профиль переваривания in vitro адсорбированных фильмов с альбумином крови человека и крупного рогатого скота на границе раздела оливковое масло-вода. Пищеварительные среды применяют путем субфазного обмена растворами, описанными в экспериментальном разделе при T = 37 °C. Контроль: начальный буфер с HSA/BSA, пепсин: sSGF с пепсином, трипсин: sSIF с трипсином + химотрипсин, липолиз: sSIF с липазой и желчными солями, десорбция: sSIF. Построенные кривые являются репрезентативными экспериментами с отклонениями <5%. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

На рисунке 7 показаны примеры полных смоделированных профилей пищеварения. На фиг.7А показан профиль пищеварения пищевого биоконсерванта AS-48, адсорбированного на границераздела 18 воздух-вода. Пищеварительный процесс был разработан, чтобы сосредоточиться на протеолизе этого пептида, в то время как липолиз масла не был необходим, находясь на границе раздела воздух-вода. Следовательно, моделируемое пищеварение на фиг.7А включает в себя пять этапов: контрольная/начальная пленка, пепсинолиз, трипсинолиз и десорбция. Экспериментальные результаты показали, что этот бактериоцин устойчив как к гидролизу пепсина, так и к трипсину, поскольку поверхностное натяжение остается неизменным. Соответственно, AS-48 считался хорошим пищевым биоконсервантом, устойчивым к перевариванию in vitro . На фиг.7В сравниваются профили переваривания in vitro адсорбированных слоев сывороточных альбуминов человека и крупного рогатого скота, адсорбированных на границераздела 22 масло-вода. Это моделирование было разработано для имитации усвояемости эмульсий, стабилизированных этими двумя белками23 , и оценки инкапсуляции куркумина4. Следовательно, смоделированное пищеварение было настроено, состоящее из пяти этапов: контроль / инициал, пепсинолиз, трипсинолиз, липолиз и десорбция. Экспериментальные результаты показали повышенное межфазное напряжение после переваривания пепсина, что указывает на повышенную восприимчивость к пепсинолизу. Это было связано с увеличением развертывания бычьего варианта при адсорбции, обнажая чувствительные к пепсину участки. Затем трипсинолиз и липолиз обеспечили совершенно сходные профили пищеварения (рисунок 7B).

Figure 8
Рисунок 8: Пример конечных значений желудочно-кишечного пищеварения. (A) Межфазное напряжение, (B) дилатационная эластичность, (C) дилатационная вязкость переваривания in vitro адсорбированной пленки β-лактоглобулина на границе раздела оливковое масло-вода. Дилатационные параметры измеряли при 1 Гц, 0,1 Гц и 0,01 Гц после того, как переваренный интерфейс был уравновешен на каждом этапе. Пищеварительные среды применяют путем субфазного обмена растворами, описанными в экспериментальном разделе при T = 37 °C. Контроль: исходный буфер с белком, пепсин: sSGF с пепсином, трипсин: sSIF с трипсином + химотрипсин, липолиз: sSIF с липазой и желчными солями, десорбция: sSIF. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

В общем, чтобы оценить и сравнить природу различных переваренных межфазных слоев, конечное межфазное натяжение и дилатационная эластичность/вязкость, полученные для переваренных интерфейсов, строятся для каждой из стадий, рассматриваемых в разработанном процессе пищеварения. На рисунке 8 показано межфазное натяжение (рисунок 8A), дилатационная упругость (рисунок 8B) и дилатационная вязкость (рисунок 8C), измеренная на частотах 1 Гц, 0,1 Гц и 0,01 Гц. Построенные значения были получены после каждой пищеварительной стадии β-лактоглобулина, адсорбированного на границе16 масляно-водной границы. На рисунке 8А показано, что протеолиз (пепсин и трипсин) производит небольшое увеличение межфазного напряжения, в то время как липолиз снижает это значение, а десорбция снова увеличивается. Что касается дилатационной эластичности, белок образует упругие и взаимосвязанные пленки на границе раздела масло-вода. Присутствие желчных солей приводит к образованию высокоподвижных и жидких межфазных пленок с низкой эластичностью. Наконец, оставшиеся липолитические продукты не могут образовывать связную эластичную пленку после десорбции. Дилатационная упругость несколько увеличивается с частотой колебаний (рисунок 8B). Наконец, дилатационная вязкость межфазных пленок, показанных на рисунке 8C , обнаруживается только на более низкой частоте и обнаруживает существование многослойных, агрегатов или других диссипативных структур на границе раздела. Сравнение профиля пищеварения β-лактоглобулина с профилем пищеварения, полученным для пульс-обработанных β-лактоглобулина, показало улучшение усвояемости белков, подвергшихся этому типу физического лечения16.

Начальный буфер 0,00113 моль L-12PO4, pH 7,0
Упрощенное моделирование желудочной жидкости (sSGF) [2PO4] = 0,00113 моль L-1, [NaCl] = 0,15 моль L-1, pH 3,0
Упрощенная имитация кишечной жидкости (sSIF) [2PO4] = 0,00113 моль L-1, [NaCl] = 0,15 моль L-1, [CaCl2] = 0,003 моль L-1, pH 7,0
Желудочные ферменты пепсин (50∙103 U L-1), желудочная липаза (0,5∙103 U L-1)
Кишечные ферменты трипсин (2,5 ∙103 ЕД L-1), химотрипсин (0,625∙103 U L-1), панкреатическая липаза (50∙103 U L-1), колипаза (150∙103 U L-1)
Смесь желчных солей 0,01 моль L-1 M . Смесь солей желчи: таурохолат натрия и дезоксихолат натрия (50/50) или таурохолат натрия и гликодеоксихолат натрия (50/50)

Таблица 1: Состав искусственных пищеварительных сред.

Дополнительный рисунок 1: Основные операции компьютерного интерфейса DINATEN. (A) Общий внешний вид компьютерного интерфейса DINATEN; в левом диалоговом окне показаны два шприца, подключенных ко всем клапанам, и управляет впрыском/извлечением и очисткой. Центральное диалоговое окно содержит команду, изображение перетаскивания и таблицу с результатами. (B) Расчет в реальном времени обеспечивает автоматическое измерение в зависимости от времени. (C) Левая команда для включения дифференциальной плотности. (D) Простой динамический процесс контролирует объем впрыска/извлечения, скорость и время захвата. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Дополнительный рисунок 2: Интерфейс для программирования каждого пищеварительного этапа (процесса). (A) Капельное образование с левым шприцем фиксированного объема и фиксированной скорости впрыска. (B) Адсорбция на постоянной межфазной площади: контроль. (C) Реология с фиксированной амплитудой, периодом и числом циклов. D) Субфазный обмен: впрыскивание и извлечение с помощью обоих шприцев с одинаковой скоростью. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Дополнительный рисунок 3: Расчет дилатационных параметров с помощью программного обеспечения для анализа изображений CONTACTO. (A) Анализ изображений, соответствующих колебаниям в фиксированный период. (B) Расчет дилатационных параметров межфазного слоя выбранных изображений. (C) Диалог, показывающий результаты дилатационного анализа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В этой статье описывается обобщенный протокол измерения in vitro переваривания межфазных слоев с помощью подвесного капельного оборудования. Протокол может быть адаптирован к конкретным требованиям эксперимента путем настройки состава пищеварительных буферов, которые основаны на гармонизированном протоколе INFOGEST11,20 для облегчения сравнения с литературой. Пищеварительные ферменты и биоповерхностные вещества могут быть добавлены по отдельности, последовательно или вместе. Этот последний вариант необходимо проводить с осторожностью, поскольку насыщение межфазного слоя будет препятствовать различным явлениям, просто обеспечивая очень низкое межфазное напряжение и может привести к падению капли. Чтобы иметь возможность анализировать влияние каждого пищеварительного компонента, различные пищеварительные ферменты добавляются последовательно и в разных концентрациях. Таким образом, эффекты каждого компонента могут быть проанализированы и систематизированы, а синергия оценивается путем последовательного сложения. Также, чтобы предотвратить падение капель, некоторые концентрации разбавляют9. Полученные результаты не могут быть непосредственно экстраполированы на эмульгированные системы, поскольку условия корректируются с учетом упрощенной системы. Однако эволюция межфазной напряженности показывает эволюцию межфазного охвата по мере того, как межфазный слой переваривается10. Аналогичным образом, эволюция дилатационной реологии дает некоторую информацию о механических свойствах интерфейса по мере прохождения пищеварения9. Эти результаты содержат полезную информацию, которая может быть адаптирована и тщательно интерпретирована для применения к эмульгированным системам.

Подвесное сбрасывающее оборудование позволяет оценивать события in situ , происходящие конкретно на межфазном слое, как показано на рисунке 2. Сначала образуется начальный межфазный слой, представляющий собой одну единственную каплю эмульсии. Этот начальный слой подвергается различным пищеварительным условиям и последовательно меняет свой состав из-за присутствия различных компонентов в водной фазе. Кроме того, липазы должны преодолеть этот межфазный слой, чтобы получить доступ к масляной фазе и гидролизовать жир. Эти межфазные события должны оцениваться на том же межфазном уровне, который был первоначально создан. Подвергание эмульсии перевариванию in vitro позволило бы проводить отбор проб в разное время и оценивать изменения в эмульсии по мере ее переваривания (размер капель, дзета-потенциал), но это не позволило бы in situ оценить межфазный слой, окружающий каждую каплю эмульсии. Следовательно, подвесное капельное оборудование, реализованное с многофазным обменом, содержит дополнительный метод, позволяющий сосредоточиться на межфазной инженерии эмульсий14.

Первое ограничение данной методики как раз связано с насыщением межфазного слоя ассорти продуктов, которые нужно разбавлять для предотвращения падения капель. Другим экспериментальным вопросом является дегазация всех искусственных сред во избежание зарождения пузырьков, которые также могут вызвать отслоение капель из капилляра. Также важно учитывать большее соотношение масла и воды по сравнению с эмульсионными системами при экстраполяции на эмульгированные системы. Наконец, хотя дилатационная реология содержит информацию о меж- и внутримолекулярных ассоциациях внутри межфазного слоя, образованных и нарушенных пищеварительными ферментами, ее трудно интерпретировать и экстраполировать для стабильности эмульсии. В целом, подвесная капля, реализованная с помощью многофазного обменного устройства, является полезным оборудованием для дополнения исследований переваривания эмульсий12 in vitro, которые следуют за эволюцией распределения капель по размеру и дзета-потенциала переваривания белка с помощью электрофореза22. Модификации пищеварительного тракта для учета гендерных изменений, пищеварения младенцев или проблем с пищеварением составляют будущие применения экспериментальной процедуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, о которой сообщается в этой статье.

Acknowledgments

Это исследование финансировалось проектами RTI2018-101309-B-C21 и PID2020-631-116615RAI00, финансируемыми MCIN/AEI/10.13039/501100011033 и «ERDF Способ создания Европы». Эта работа была (частично) поддержана Группой по физике биоколлоидов и жидкостей (ref. PAI-FQM115) Университета Гранады (Испания).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alpha-chymotrypsin from bovine pancreas Sigma-Aldrich C4129 Enzyme
Beta-lactoglobulin Sigma-Aldrich L0130 Emulsfier
Bovine Serum Albumin Sigma-Aldrich 9048-46-8 Emulsfier
CaCl2 Sigma-Aldrich 10043-52-4 Electrolyte
Centrifuge Kronton instruments Centrikon T-124 For separating oil and resins
Citrus pectin Sigma-Aldrich P9135 Emulsfier
co-lipase FROM PORCINE PANCREAS Sigma C3028 Enzyme
CONTACTO University of Granada (UGR) https://core.ugr.es/dinaten/, last access: 07/18/2022
DINATEN University of Granada (UGR) https://core.ugr.es/dinaten/, last access: 07/18/2022
Gastric lipase Lipolytech RGE15-1G Enzyme
Human Serum Albumin Sigma-Aldrich 70024-90-7 Emulsifier
INFOGEST http://www.proteomics.ch/IVD/
Lipase from porcine pancreas, type II Sigma-Aldrich L33126 Enzyme
Magnesium metasilicate resins Fluka 1343-88-0 Resins to purify oil
Micro 90 International products M-9051-04 Cleaner
NaCl Sigma 7647-14-5 Electrolyte
NaH2PO4 Scharlau 10049-21-5 To prepare buffer
OCTOPUS Producciones Científicas y Técnicas S.L. (Gójar, Spain) Pendandt Drop Equipment implemented with multi subphase exchange
Olive oil Sigma-Aldrich 1514 oil
Pancreatic from porcine pancreas Sigma P7545-25 g Enzyme
Pepsin Sigma-Aldrich P6887 Enzyme
Pluronic F127 Sigma P2443 Emulsifier
Pluronic F68 Sigma P1300 Emulsfier
Sodium deoxycholate Sigma Bile salts
Sodium glycodeoxycholate Sigma C9910 Bile salts
Sodium taurocholate Sigma 86339 Bile salts
Syringe Filter Millex-DP SLGP033R  Syringe Filter 0.22 µm pore size polyethersulfone
Trypsin Sigma-Aldrich T1426 Enzyme

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. McClements, D. J. The biophysics of digestion: Lipids. Current Opinion in Food Science. 21, 1-6 (2018).
  2. McClements, D. J., Li, Y. Structured emulsion-based delivery systems: Controlling the digestion and release of lipophilic food components. Advances in Colloid and Interface Science. 159 (2), 213-228 (2010).
  3. Corstens, M. N., et al. Food-grade micro-encapsulation systems that may induce satiety via delayed lipolysis: A review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 57 (10), 2218-2244 (2017).
  4. Aguilera-Garrido, A., del Castillo-Santaella, T., Galisteo-González, F., Gálvez-Ruiz, M. J., Maldonado-Valderrama, J. Investigating the role of hyaluronic acid in improving curcumin bioaccessibility from nanoemulsions. Food Chemistry. 351, 129301 (2021).
  5. Rodríguez Patino, J. M., Carrera Sánchez, C., Rodríguez Niño, M. R. Implications of interfacial characteristics of food foaming agents in foam formulations. Advances in Colloid and Interface Science. 140 (2), 95-113 (2008).
  6. Wilde, P. J., Chu, B. S. Interfacial & colloidal aspects of lipid digestion. Advances in Colloid and Interface Science. 165 (1), 14-22 (2011).
  7. Cabrerizo-Vílchez, M. A., Wege, H. A., Holgado-Terriza, J. A., Neumann, A. W. Axisymmetric drop shape analysis as penetration Langmuir balance. Review of Scientific Instruments. 70 (5), 2438-2444 (1999).
  8. Maldonado-Valderrama, J., Muros-Cobos, J. L., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Bile salts at the air-water interface: Adsorption and desorption. Colloids and surfaces B: Biointerfaces. 120, 176-183 (2014).
  9. Maldonado-Valderrama, J., Terriza, J. A. H., Torcello-Gómez, A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. In vitro digestion of interfacial protein structures. Soft Matter. 9, 1043-1053 (2013).
  10. Maldonado-Valderrama, J. Probing in vitro digestion at oil-water interfaces. Current Opinion in Colloid and Interface Science. 39, 51-60 (2019).
  11. Brodkorb, A., et al. INFOGEST static in vitro simulation of gastrointestinal food digestion. Nature Protocols. 14 (4), 991-1014 (2019).
  12. del Castillo-Santaella, T., Maldonado-Valderrama, J., Molina-Bolivar, J. A., Galisteo-Gonzalez, F. Effect of cross-linker glutaraldehyde on gastric digestion of emulsified albumin. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 145, 899-905 (2016).
  13. Macierzanka, A., Torcello-Gómez, A., Jungnickel, C., Maldonado-Valderrama, J. Bile salts in digestion and transport of lipids. Advances in Colloid and Interface Science. 274, 102045 (2019).
  14. Maldonado-Valderrama, J., Torcello-Gómez, A., del Castillo-Santaella, T., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Subphase exchange experiments with the pendant drop technique. Advances in Colloid and Interface Science. 222, 488-501 (2015).
  15. Bellesi, F. A., Ruiz-Henestrosa, V. M. P., Maldonado-Valderrama, J., Del Castillo Santaella, T., Pilosof, A. M. R. Comparative interfacial in vitro digestion of protein and polysaccharide oil/water films. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 161, 547-554 (2018).
  16. Del Castillo-Santaella, T., Sanmartín, E., Cabrerizo-Vílchez, M. A., Arboleya, J. C., Maldonado-Valderrama, J. Improved digestibility of β-lactoglobulin by pulsed light processing: A dilatational and shear study. Soft Matter. 10 (48), 9702-9714 (2014).
  17. Infantes-Garcia, M. R., et al. In vitro gastric lipid digestion of emulsions with mixed emulsifiers: Correlation between lipolysis kinetics and interfacial characteristics. Food Hydrocolloids. 128, 107576 (2022).
  18. del Castillo-Santaella, T., Cebrián, R., Maqueda, M., Gálvez-Ruiz, M. J., Maldonado-Valderrama, J. Assessing in vitro digestibility of food biopreservative AS-48. Food Chemistry. 246, 249-257 (2018).
  19. Torcello-Gómez, A., Maldonado-Valderrama, J., Jódar-Reyes, A. B., Cabrerizo-Vílchez, M. A., Martín-Rodríguez, A. Pluronic-covered oil-water interfaces under simulated duodenal conditions. Food Hydrocolloids. 34, 54-61 (2014).
  20. Minekus, M., et al. A standardised static in vitro digestion method suitable for food - an international consensus. Food & Function. 5 (6), 1113-1124 (2014).
  21. Wege, H. A., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Development of a constant surface pressure penetration langmuir balance based on axisymmetric drop shape analysis. Journal of Colloid and Interface Science. 249 (2), 263-273 (2002).
  22. del Castillo-Santaella, T., et al. Hyaluronic acid and human/bovine serum albumin shelled nanocapsules: Interaction with mucins and in vitro digestibility of interfacial films. Food Chemistry. 383, 132330 (2022).
  23. Aguilera-Garrido, A., et al. Applications of serum albumins in delivery systems: Differences in interfacial behaviour and interacting abilities with polysaccharides. Advances in Colloid and Interface Science. 290 (5), 102365 (2021).

Tags

Биохимия выпуск 189
<em>In vitro</em> Переваривание эмульсий в одной капле <em>с помощью</em> многофазного обмена моделируемых желудочно-кишечных жидкостей
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maldonado-Valderrama, J., del… More

Maldonado-Valderrama, J., del Castillo Santaella, T., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. Á. In vitro Digestion of Emulsions in a Single Droplet via Multi Subphase Exchange of Simulated Gastrointestinal Fluids. J. Vis. Exp. (189), e64158, doi:10.3791/64158 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter