כאן, אנו מציגים פרוטוקול המציע חלופות איסוף דם מהירות, קלות ואמינות עבור מודל החולדות. אנו מתארים שלוש שיטות שונות לדגימת דם בהתאם להקשר: ניקוב וריד הזנב בהרדמה או בעל חיים בהכרה, וניקור ורידים בפין הגבי בהרדמה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים פרוטוקול המציע חלופות איסוף דם מהירות, קלות ואמינות עבור מודל החולדות. אנו מתארים שלוש שיטות שונות לדגימת דם בהתאם להקשר: ניקוב וריד הזנב בהרדמה או בעל חיים בהכרה, וניקור ורידים בפין הגבי בהרדמה.
דגימות דם נדרשות ברוב הניסויים בבעלי חיים כדי להעריך פרמטרים המטולוגיים שונים. מאמר זה מציג שני הליכים לאיסוף דם בחולדות: ניקוב וריד הזנב הצידי וניקוב וריד הפין הגבי, המציעים יתרונות משמעותיים על פני טכניקות אחרות שתוארו קודם לכן. מחקר זה מראה כי שני הליכים אלה מאפשרים דגימה מהירה (מתחת ל -10 דקות) ומניבים נפחי דם מספיקים עבור רוב הבדיקות (202 μL ± 67.7 μL). ניקוב וריד הפין הגבי חייב להיעשות תחת הרדמה, ואילו ניקוב וריד הזנב הצידי יכול להיעשות על בעל חיים מודע ומאופק.
החלפה בין שתי הטכניקות הללו, אם כן, מאפשרת שאיבת דם בכל מצב. בעוד שתמיד מומלץ למפעיל להיעזר במהלך הליך כדי להבטיח את רווחת בעלי החיים, טכניקות אלה דורשות מפעיל אחד בלבד, בניגוד לרוב שיטות דגימת הדם הדורשות שניים. יתר על כן, בעוד ששיטות אלה שתוארו קודם לכן (למשל, מקל ג'וגולרי, שאיבת דם של ורידים תת-קלאביים) דורשות הכשרה מוקדמת מקיפה כדי למנוע נזק או מוות של החיה, ניקוב וריד הפין הגבי הם לעתים רחוקות קטלניים. מכל הסיבות הללו, ובהתאם להקשר (למשל, עבור מחקרים הכוללים חולדות זכרים, במהלך התקופה הטרום ניתוחית או מיד לאחר הניתוח, עבור בעלי חיים עם ורידי זנב דקים), ניתן להשתמש בשתי הטכניקות לסירוגין כדי לאפשר שאיבת דם חוזרת.
דגימת דם נחוצה לרוב המחקרים בבעלי חיים, הן in vivo והן in vitro. בחולדות, מכיוון שתדירות וכמות דגימת הדם יכולות להיות משמעותיות, כדאי שיהיו חלופות שונות לאיסוף. שיטות שונות תוארו במחקרים קודמים.
הטכניקות הנפוצות ביותר הן ניקוב ורידים בזנב ושאיבת דם של ורידים ספנוסיים. דגימת ורידי זנב מתאימה לכל זני החולדות. עם הכשרה נכונה, ההליך פשוט לביצוע וגורם מצוקה מינימלית לבעל החיים1. באופן דומה, שאיבת הדם של הווריד הספנוס, בתנאי שהיא נעשית כראוי, היא גם שיטת איסוף מהירה ופשוטה. אף אחת מהשיטות אינה דורשת הרדמה, ושתיהן מאפשרות שאיבה חוזרת ונשנית של כמויות קטנות של דם. עם זאת, ניקוב הווריד הספנוס מניב בדרך כלל נ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ההליכים בוצעו על חולדות לואיס זכרים בני 3 חודשים, שכל אחת מהן שוקלת 300-400 גרם. בסך הכל נכללו 24 בעלי חיים, עם שלושה מצבי ניקוב: 12 חולדות עברו ניקוב ורידי זנב ללא הרדמה (טלוויזיה קבוצתית ללא הרדמה), ועוד 12 חולדות הורדמו כדי לעבור ניקוב ורידים בזנב (טלוויזיה קבוצתית עם הרדמה) וניקוב ורידים בפין (PV קבוצתי עם הרדמה). כל הנהלים אושרו וכובדו על פי הנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). כל בעלי החיים הומתו בסוף המחקר (לאחר מעקב של חודש) על ידי מנת יתר של פחמן דו חמצני. עיין בטבלת החומרים לקבלת פרטים הקשורים לכל החומרים והמכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הנחיות כלליות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הצלחה הוגדרה כשאיבת דם המניבה לפחות 100 מיקרוליטר דם בפחות מ-10 דקות (מזמן הניקוב ועד סוף איסוף הדם), וכשל הוגדר כשאב דם המניב פחות מ-100 מיקרוליטר דם או לוקח יותר מ-10 דקות לשלוף את נפח הדם הנדרש. הותר מקסימום של 250 מיקרוליטר דם לדגימה. הניתוחים הסטטיסטיים נערכו באמצעות מבחן ANOVA חד-כיווני להשוואות מרובות ומבחן chi-squared. הנתונים הוצגו כערך ממוצע ± סטיית תקן, ו-p < 0.05 שימש כסף לקביעת מובהקות סטטיסטית.
השוואת שיעורי ההצלחה הראתה תוצאות דומות עבור ניקוב ורידים בזנב בחולדות מוד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ניקוב וריד הזנב הוא שיטה יעילה להשגת דם מחולדה מודעת. עם זאת, כאשר בעל חיים נמצא תחת הרדמה, ההשפעה של isoflurane יכול להוביל התכווצויות כלי ולהפוך לנקב ורידים זנב לא מתאים11. כפי שמוצג במחקר זה, חלופה במצב זה היא לאסוף דם מווריד הפין, אשר מוצלח יותר ומניב נפח גדול משמעותית של דם בפחות זמן. חשוב לזכור כי במקרה של כישלון בשיטה זו בניסיון הראשון, הניסיונות הבאים עשויים שלא להצליח. לעומת זאת, ניקוב ורידים בזנב מאפשר מספר נקבים עוקבים במקרה של קושי בניסיון הראשון (ישנם שני ורידים, וניתן לנסות ניקוב גבו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
לאף אחד מהכותבים אין ניגודי עניינים להצהיר.
עבודה זו מומנה על ידי Shriners Children's Boston (B. E. U., K.U., C.L.C). L.C. ממומנת על ידי "La Bourse des Gueules Cassées", "La Bourse Année Recherche" ו-"La Bourse de l'Amicale des Anciens Internes des Hôpitaux de Paris". י.ב. ממומן על ידי "La Bourse des Gueules Cassées". Y.B. ו- I.F.v.R ממומנים על ידי בתי החולים לילדים (מזהה המלגות הוא #84308-BOS-22 #84302-BOS-21 בהתאמה). חומר זה מבוסס בחלקו על עבודה הנתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע תחת מענק מס '. EEC 1941543. תמיכה חלקית ממכוני הבריאות הלאומיים של ארה"ב (R01EB028782, R56AI171958 ו-R01DK114506) זוכה להכרת תודה. איור 1 נוצר באמצעות BioRender.com.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.5 מ"ל | 28 גרם ו-frac12; מזרקי אינסולין | BD | 329424 | לניקוב וריד הזנב |
| 0.5 מ"ל | 30 גרם x 5/16 מזרקי אינסולין | BD | 320468 | לניקוב וריד הפין |
| 250 L צינורות איסוף דם Microtainer עם K2EDTA | BD | 365974 | |
| ספוגי גזה | Curity | 6939 | |
| Isoflurane Auto-Flow מכונת הרדמה | מערכות | EZ-190F | לניקוב ורידים בפין |
| Isoflurane, USP | Patterson Veterinary | 1403-704-06 | לניקוב וריד הפין |
| Nosecone | למכשירי דיוק בעולם | EZ-112 | לניקוב וריד הפין |
| חרוט מכרסם ריסון | מכשיר הרווארד | ST2 52-95-86 | לניקוב וריד הזנב |
| שולחן ניתוח מחומם לבעלי חיים קטנים (מתכוונן) | Peco Services Ltd | 69023 | |
| רפידות הכנה לאלכוהול Webcol | Simply Medical | 5110 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.