Yazarların beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

3. instar drosophila larva hayali disklerin diseksiyon

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Bu protokol, 3. instar aşamada Drosophila larvaları hayali diskler izole etmek için kullanılan diseksiyon tekniği göstermektedir. Söyleyerek sonra doku sabitleme ve kanat, bacak ve göz diskleri çıkarmadan Yöntemleri sonraki görünüm için doğrudan bir mikroskop lamı üzerine göstermiştir.

3. Instar Drosophila Larva hayali Disklerin Diseksiyon

Bugün size üçüncü instar drosophila larvalarından imaginal disklerin nasıl diseke edileceğini göstereceğim. Üçüncü instar larval diskleri, birçok gelişimsel süreç için kullanılabilir. Biz laboratuvarımızda apoptoz sürecini gözlemlemek için bunları inceliyoruz, ancak çeşitli proteinleri bu disklerde eksprese ederek onları bu şekilde çalışabilir ve diskler içerisinde sırasıyla gerçekleşen her türlü gelişimsel süreci görebilirsiniz.Bunu yapabilmek için birkaç çok önemli araç kullanacağım. Birincisi, larvaları kaplarından çıkarmak için kullanacağımız toplama çubuğudur. Ardından, diseksiyonun başarıyla gerçekleştirilebilmesi için son derece keskin olması gereken diseksiyon pensi gelmektedir.Ardından, diskleri baştan çıkarmak için 11 numaralı bir cerrahi bistüri kullanacağız. Daha sonra diskleri, montaj ortamı olarak bazı vector shield kullanarak bir lam üzerine yerleştireceğiz. İlk olarak yapacağımız şey, bazı üçüncü evre *Drosophila* larvalarını toplamaktır.Burada, onları vialin kenarından ayırmak için toplama çubuğumu kullanıyorum. Çubuğun biraz ıslak olması bazen yardımcı olur, ardından onları bir damla PBS içine yerleştirin. Tamam, işte üçüncü larva örneğimiz burada.Sağ elimi kullandığım için başını sağ tarafıma doğru çevireceğim ve onu nereden tutacağımız konusunda bize yol gösterecek birkaç belirgin noktadan yararlanacağız. Birincisi, burada ve burada bulunan trakenin ana kısmıdır. Ardından, başa doğru burada küçük bir kesit bulunmaktadır.Öncelikle larvaları, kafadan vücudun yaklaşık üçte iki aşağısından nazikçe kavrayacağım. Ardından, sağ elimle buradaki enine parçanın birkaç milimetre gerisinden, larvanın genişliğinin yaklaşık yarısına gelecek şekilde kavrayacağım. Bu şekilde oldukça iyi bir tutuş sağlamış oluruz.Yaklaşık yarıya geldiğimi görebilirsiniz. Ardından sağ elimle nazikçe öne doğru çekeceğim, tüm bağırsakların dışarı çıktığını görebilirsiniz. Tamam. Vücudun ana kısmı artık atılabilir.Ve burada, ağız kısımlarına tutunmuş imaginal diskleri içeren baş bölümü yer alıyor. Disklerin hiçbirini ezmemek için onu ağız kısımlarından kavrayacağım ve taze bir PBS damlasına taşıyacağım. Böylece fikse edilmiş larva başımız hazır olmuş oldu.Tüm fazla dokuları temizleyeceğiz ve ardından larvayı daha önce yaptığımız gibi ağız parçalarından kavrayacağız veya pensle diseksiyon plakasına doğru bastıracağız. Ağız parçaları şu an solda. Tamam, burada istemediğimiz bağırsak var ve burada da bir tükürük bezi bulunuyor.Bir miktar yağ cisimciği veya yağ dokusu bulunmaktadır. Özellikle bazı analizleri ve boyamaları etkileyebilecek olan yağları ve istemediğiniz her şeyi uzaklaştırmaya devam edin. Böylece artık temizlenmiş larva başına sahip olduk.Artık gövdeden diseke edilmiş, fikse edilmiş ve yıkanmış, yabancı dokuları temizlenmiş ve C two tunnel ile antikor boyaması veya diğer fonksiyonel boyamalar gibi gereken tüm işlemler uygulanmış larva başlarımıza sahibiz. Şimdi bunları bir lam üzerine yerleştirdik ve gerçek diskleri, yani ağız parçalarını, baştan diseke etmeye hazırız.Tamam, bu sefer ağız parçaları burada solda yer alıyor. Pensetimi alıp bunları lamın üzerine doğru bastıracağım. Sağ elimde ise diseksiyon yapmak için daha ince bir alet olan 11 numara skalpel bıçağı var.Öncelikle MSS'yi ve optik lobları çıkaracağım. Burada MSS'yi, iki optik lobu ve bunlara bağlı olan göz anten disklerini görebiliyorsunuz. Bıçağımı optik loblar ile göz disklerinin arasına yerleştirip yavaşça çekerek MSS'yi çıkardığımda, göz diskleri dışarı doğru esneyecektir.Tamam, burada MSS ve optik loblar yer alıyor. Şu an MSS'den ayrılmış iki göz diski var. Şimdi, tabandan nazikçe kesip çekerek onları ağız parçalarından ayıracağım.Tamam, burada bir göz-anten diski, diğer tarafta ise diğer göz-anten diski var. Tamam. Ve şimdi burada dışarı sarkan kanat diskini görebiliyoruz. Ben yine nazikçe tabanı bulup keseceğim ve çekeceğim.Böylece burada, bir miktar trake ile birlikte ona bağlı bir kanat diski ve bir bacak diskimiz var. Tamam, işte burada bir bacak diski bağlı kanat diski var ve belli ki birkaç bacak diski mevcut. Dolayısıyla, bıçakla nazikçe yoklayarak burada arama yapabilir ve daha fazla disk bulabiliriz.Bu örnekte bulabileceğimiz disklerin tamamı bunlar. Birkaç tane daha bacak diski var.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

University of California, Irvine (UCI).  Bu protokol, 3. instar aşamada Drosophila larvaları hayali diskler izole etmek için kullanılan diseksiyon tekniği göstermektedir. Söyleyerek sonra doku sabitleme ve kanat, bacak ve göz diskleri çıkarmadan Yöntemleri sonraki görünüm için doğrudan bir mikroskop lamı üzerine göstermiştir.

3. Instar Drosophila Larva hayali Disklerin Diseksiyon

Bu makalede

Özet

Açıklamalar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler