Maya genetik çalışmalar, hücresel DNA metabolizması insan genlerinin moleküler ve hücresel fonksiyonları araştırmak için istihdam edilebilir. Yöntem, insan genetik karakterizasyonu için açıklanan WRN Uysal bir model sistem olarak maya kullanarak işlevsel korunmuş yollar erken yaşlanma bozukluk Werner sendromu kusurlu gen ürünü.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan DNA Onarım Proteinler Genetik Araştırmalar Maya Model Sistemi olarak kullanma
Bu makalede
Özet
Özet
Genetik yollar insan DNA onarım proteinlerin rolleri anlama birçok araştırmacı için zorlu bir mücadele. Memeli sistemlerinde genetik çalışmalar tanımlanan mutant genetik hücre hatları, düzenleyici ifade sistemleri ve uygun seçilebilir belirteçler de dahil olmak üzere hazır araçları eksikliği nedeniyle sınırlı kalmıştır. Bu zorlukları aşmak için, daha düşük ökaryotlarda model genetik sistemleri fonksiyonel olarak korunmuş DNA onarım proteinleri ve yolların çalışması için cazip bir seçenek haline gelmiştir. Werner sendromu helikaz-nükleaz kötü tanımlanmış genetik fonksiyonlarını incelemek için bir model maya sistemi geliştirdik (
Protokol
1. Maya Suşlarının
Yabani tip SGS1 top3 Suşlarının (WT; W303-1A, genotip, MAT ade2 1 canl-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trpl-l ura3-1) [2], bir sgs1 mutant (W1292-3C ; genotip MAT bir SUP4-o:: URA3 sgs1-25 ade2 1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) ve bir sgs1 top3 mutant (W1058-11C, genotip, MAT bir SUP4-o:: URA3 sgs1-25 top3-2:: HIS3 ade2-1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 trp1-1 ura3-1 rad5-535) [3] karakterize edilmiştir ve nazik sağlanan edildi Dr. Rodney Rothstein (Columbia Üniversitesi). <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Maya kullanarak bir model sistem olarak güçlü yönlerinden biri, maya ve insanlar arasındaki korunmuş tanımlanan DNA replikasyonu ve tamiri yollar mutantlar mevcudiyetidir. Laboratuvar suşları auxotrophic işaretleri ile auxotrophic mutantlar ve vektörler hazır olarak belirli genlerin barındıran transformants daha fazla seçim, kolay ve güvenilir. Bu vektörler kullanarak gen ürünleri ifade uyarılabilir kolaylaştırıcı (örneğin, gal indüklenebilir organizatörü, vb.) Kontrolü altında koyarak düzenlenir. Bu avantajları göz önü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Bu çalışma NIH, Yaşlanma Ulusal Enstitüsü İntramural Araştırma programı tam destek verdi. Plazmid SGS1 ifade etmek için maya suşları ve Dr. Brad Johnson (University of Pennsylvania School of Medicine, Philadelphia) Dr. Rodney Rothstein (Columbia Üniversitesi) teşekkür ederim.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kaynaklar
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
