Bu teknik, canlı moleküler karakterizasyonu için yüksek çözünürlüklü sihirli açısı proton MR spektroskopi (HRMAS 1H-MRS) iplik kullanımını sağlar Drosophila melanogaster Geleneksel 14.1 tesla spektrometre ile bir HRMAS sonda ile donatılmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Canlı Manyetik Rezonans Spektroskopisi Drosophila melanogaster Magic Açısı İplik kullanarak
Bu makalede
Özet
Özet
Yüksek Çözünürlüklü Magic Açısı İplik (HRMAS) proton manyetik rezonans spektroskopi (
Protokol
Bölüm 1: HRMAS Ölçümler için hazırlanması Drosophila
- Standart flylab prosedürleri kullanma 1, 3 gün boyunca yeni sinekler eclosing ve taze sinek gıda içeren şişeleri uçmak için transfer toplamak. Sineklerin sadece deneme için 5-8 gün önce eski haline gelecektir ki, 5 gün boyunca toplanan sinekler inkübe edin. Sadece bir cinsiyet (genellikle erkek), deneyler için kullanılır.
- Sağlıklı, bozulmamış vahşi tip örneğin, travmatize olmuş ya da genetik olarak değiştirilmiş sinek 1 tedavi ile karşılaştırmak için uçar.
- Tek sinek sinek gıda 24 saat önce deneme için bir parça (~ 0.2ml) içeren 2ml tüp içine yerleştirin.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Son meyve in vivo MRG fizibilite raporu istisna ile 6 uçar, Drosophila in vivo MRS çalışmalarında henüz bildirilmiştir değil. İşbu Protokol, biyolojik olarak önemli moleküller tespit etmek için in vivo HRMAS 1 H-MRS yaklaşımı bir roman uygulanması açıklanmaktadır. Özellikle, biz sıfır sinek ölüm elde ederken, lipidler ve canlı Drosophila küçük metabolitleri yeterli edinimi süresi, yaklaşık 45 dakika, 14.1 T uçar tespit edildi . TOBSY ro.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Massachusetts Genel Hastanesi Kurumsal Hayvancılık Araştırma İnceleme Kurulu Komitesi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.
Teşekkürler
Bu çalışma, Laurence G. Rahme Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hibe AI063433, Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika Müdürü Sağlık Ulusal Enstitüsü Enstitüleri (NIH) Merkezi Grant (P50GM021700) tarafından kısmen desteklenmiştir. Çocuklar araştırma bursu (8893) A. Aria Tzika NMR çekirdek) ve Shriner Hastanesi. Biz Dionyssios Mintzopoulos doktora teşekkür Bu protokol ve Ovidiu C. Andronesi doktora geliştirme ilk aşamalarında yardım için TOBSY darbe dizisi ile ilgili yardım için.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar | |
|---|---|---|---|---|
| Döteryum oksit | Reaktif | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimetilsilil)propionik-2,2,3,3-d4 asit | Reaktif | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sükroz, maya, mısır unu | Gıda | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS veya Canton-S sinekleri | Yetişkin sinek hatları | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Resim fırçası | Ekipman | (boyut 0) | ||
| 2 ml'lik tüpler | Ekipman | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Sinek inkübatörleri | Ekipman | yüksek nem kapasitesi (%60-75), ayarlanabilir sıcaklık ve 12 sa:12 sa ışık:karanlık döngüsü. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spektrometre (600,13 MHz) 4mm üçlü rezonans (1H, 13C, 2H) HRMAS probu | Ekipman | Bruker Corporation | ||
| MAS pnömatik ünitesi ile kombinlenmiş BTO-2000 ünitesi | Ekipman | Bruker Corporation | ||
| 4 mm zirkonyum oksit rotor (kapasite 50 μl) | Ekipman | Bruker Corporation | B3829 (Bruker mağazası) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Yazılım | 1D NMR spektrum analizi http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | Yazılım | 2B NMR spektrum analizi http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Kaynaklar
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
