Yaşam Süresi Analizi: C. elegans Uzun Ömürlülüğün Ölçülmesi

Abstract

Kaynak: Cornwell, A. B., et al. Çoğaltma Kümesi Yöntemi: Caenorhabditis elegans Ömrünü Kantitatif Olarak Ölçmek İçin Yüksek Verimli Bir Yaklaşım. J. Vis. Uzm.(2018).

Bu videoda, C. elegans'ın ömrünü ölçmek için geleneksel, plaka tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. Örnek protokol, RNAi ile tedavi edilen solucanların ömrünü ölçer.

Protocol

Aşağıdaki protokol Cornwell ve ark. Çoğaltma Kümesi Yöntemi: Caenorhabditis elegans Ömrünü Kantitatif Olarak Ölçmek İçin Yüksek Verimli Bir Yaklaşım, J. Vis. Exp. (2018).

1. 5-Floro-2'-deoksiüridin (FUdR) ilavesiyle döl üretiminin önlenmesi

1. Hayvanları 20 °C'de L4 aşamasına kadar büyütün. Tohumlamadan yaklaşık 40 saat sonra senkronize hayvanların L4'e gelişip gelişmediğini kontrol edin (adım 2.1.7).
   NOT: C. elegans'ın geli....

Results

Şekil 1: C.elegans ömrünü (A) puanlamak için Geleneksel ve Replika Set Yöntemi. C. elegans ömrünü puanlamak için Geleneksel Yöntem. Koşul başına birkaç küçük senkronize izogenik hayvan popülasyonu zaman içinde takip edilir. Çalışma kursu boyunca aynı hayvan popülasyonu takip edilir. Canlılık, nazik dürtülerle uyarılabilen hareketle değerlendirilir. Harek.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
FuDR (5-Fluoro-2'-deoksiuridin)	Alfa Aesar	L16497
24 Kuyu Kültür Plakaları	Greiner Bio-Bir	#662102
600 μL 96 oyuklu plakalar	Greiner Bio-Bir	#786261
2mL 96 kuyulu plakalar	Greiner Bio-Bir	#780286
96 pinli plaka çoğaltıcı	Nunc (Rahibe)	250520
C. elegans HT115 bakterisinde RNAi klon kütüphanesi- Ahringer	Kaynak: Biyobilim	C. elegans RNAi Koleksiyonu (Ahringer)	Ayrıca bakınız Kamath ve diğerleri, Nature 2003.
C. elegans HT115 bakterilerindeki RNAi klon kütüphanesi- Vidal	Kaynak: Biyobilim	C. elegans ORF-RNAi Kaynağı (Vidal)	Ayrıca bakınız Rual ve diğerleri, Genome Research 2004. Bu kütüphane aynı zamanda Dharmacon'dan da edinilebilir.
L4440 Boş Vektör Plazmidi	Ekle	1654	https://www.addgene.org/1654/