$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Bu protokol, Possik ve Pause, 96 oyuklu Mikrotitre Plakalarında Caenorhabditis elegans'ın Oksidatif Stres Direncinin Ölçülmesi, J. Vis. Exp.(2015).
1. Oksidatif Stres Direnci Testinin Yapılması
- 100 mM PQ çözeltisinden (taze hazırlanmış) 40 μl'yi 96 oyuklu bir plakanın her kuyucuğuna pipetleyin. Her durumun kopyası olarak en az 12 kuyu kullanın (tedavi, mutant vb.). Platin tel kurt penası kullanarak, 5-8 L4 larva hayvanını başlangıç ve bitiş zamanını belirterek her kuyucuğa aktarın.
- Başka bir koşula başlarken, başlangıç zamanını ve bitiş zamanını not edin. Plakayı, başlangıç zamanından bir saat sonra solucanların aktarılması ve ölü hayvanların puanlanması arasındaki kuluçka süresine 20 °C'ye yerleştirin.
- Diseksiyon mikroskobunu kullanarak, her saat hayatta kalmayı sayın. Saymaya başlamadan önce plakayı hafifçe sallayın. Yüksek yoğunluklu bir ışık gördükten sonra bile hareket etmeyen solucanları ölü hayvanlar olarak belirtin. Ayrıca canlı hayvan sayısını da belirtin.
NOT: Solucan şekline, kuyruklarına ve kafa hareketine yüksek büyütmede bakmak, ölü solucanların canlıdan belirlenmesine yardımcı olur.
- Solucanların çoğu ölene kadar bu adımı her saat tekrarlayın.
2. Her zaman noktasında hayatta kalma yüzdesinin belirlenmesi
- Her kuyuya aktarılan toplam hayvan sayısını ekleyerek koşul başına toplam hayvan sayısını hesaplayın. Nakil sırasında hasar gören veya öldürülen hayvanları görmezden gelin.
- Her zaman noktası için, koşul başına toplam ölü hayvan sayısını hesaplayın (12 kuyucuğundaki ölü hayvanların toplamı). Her zaman noktası için, ölüm yüzdesini (ölü hayvan sayısının toplam hayvan sayısına bölünmesi ve 100 ile çarpılması) ve hayatta kalma yüzdesini (100 eksi yüzde ölüm) hesaplayın.
- Bu testi en az 3 bağımsız kez tekrarlayın.