Yöntem makalesi

Enzimatik Sindirim ve Elle Ayrışma: C. elegans Embriyolarını Hücre Kültürüne Hazırlamak İçin Bir Yöntem

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Sangaletti, R. ve Bianchi, L. Embriyonik C. elegans Hücrelerini Kültürlemek İçin Bir Yöntem.J. Vis. Uzm.(2013).

Bu videoda, embriyonik C. elegans hücrelerinin in vitro olarak izole edilmesi ve steril olarak kültürlenmesi için bir yöntem tanıtılmaktadır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Embriyonik Hücrelerin Ayrışması

  1. Prosedürün sonraki adımlarını bir laminer akış başlığı kullanarak steril koşullar altında gerçekleştirin. Hayvanlar bakteri plakaları üzerinde giydirilirken, yıkamalar ve ağartıcı içeren lizis solüsyonu ile tedavi, bakterilerin tümünü olmasa da çoğunu ortadan kaldırmalıdır. Bu nedenle, prosedürün bu noktasında bir laminer başlık kullanmak, yumurta süspansiyonunun yeni kontaminasyonunu önler.
  2. Peletlenmiş yumurtaları 1 ml 2 mg / ml kitinaz (yumurta tamponu pH 6.5'te stok) içinde yeniden süspanse edin ve bunları yeni bir steril 15 ml konik tüpe aktarın. Tüpü oda sıcaklığında 10-30 dakika sallayın. ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1. C. elegans kitinaz tedavisinden önce ve sonra embriyolar. (A) Kitinaza maruz kalmadan önce yumurtaların fotoğrafı. Ok, bir embriyoyu çevreleyen şeffaf ve sağlam yumurta kabuğunu gösterir. (B) 10 dakika boyunca kitinaz ile tedavi edilen yumurtalar. Yumurta kabukları sindirilmiştir ve artık embriyoların etrafında görünmezler. Oklar, yumurt.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
REAGENTS
Leibovitz'in L-15 Orta (1x) SıvısıCanlandırıcı11415-064
Fetal Sığır SerumuCanlandırıcı16140-063
Penisilin-streptomisinSigmaP4333-100ML
KitinazSigmaC6137-25BM
Fıstık LektiniSigmaL0881-10MG
>EKİPMAN
101-1000 μl Mavi Dereceli Pipet UçlarıABD Scentific1111-2821
10 ml Ayrı Ayrı Sarılmış Sterilize PipetABD Scentific1071-0810
Ergonomik Değişken Hacim (100-1000 μl) Uç çıkarıcılı pipetleyiciVWR Uluslararası A.Ş.89079-974
Taşınabilir Pipet Yardımı, DrummondVWR Uluslararası A.Ş.53498-103
Transfer Plastik Pipet SterilVWR Uluslararası A.Ş.14670-114
15 ml Konik TüpABD Scentific1475-1611
Steril 18 gauge İğnelerBecton, Dickinson ve Co.305196
Steril 10 ml ŞırıngaBecton, Dickinson ve Co.305482
Plastik Şırınga Filtreleri Corning 0,20 μm gözenek boyutuCorning431224
Akrodik 25 mm Şırınga filtresi, 5 μm versapor MembranlıVWR Uluslararası A.Ş.28144-095
60x15 mm Petri Kabı SterilVWR Uluslararası A.Ş.82050-548
100x15 mm Petri Kabı SterilVWR Uluslararası A.Ş.82050-912
12 mm Çaplı Cam LamellerVWR Uluslararası A.Ş.48300-560
Şeffaf Hücre Kültürü Plakaları 24 Kuyulu Düz Tabanlı kapaklıThomas bilimsel6902A09
Dumont #5- İnce ForsepsGüzel Bilim Araçları11254-20
Santrifüj 5702Eppendorf Belediyesi22629883
Laminer Akış Başlığı
x10 objektifli Ters Mikroskop
Ortam havası nemlendirilmiş İnkübatör
Serisi arası

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kitinaz UygulamasSantrif jlemeFiltrasyonMikroskopiL15 BesiyeriSteril Teknik

İlgili makaleler