Elektrotaksi Deneyi: C. elegans'ta Hareketi Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Tong, J, et al. Caenorhabditis elegans'ın Hareketinin İsteğe Bağlı Kantitatif Analizi için Mikroakışkan Tabanlı Elektrotaksi.J. Vis. Uzm.(2013).

Araştırmacılar, solucanların algıladığı ve tepki verdiği bir elektrik alanı uygulayarak C. elegans'ta isteğe bağlı hareketi tetikleyebilir. Bu videoda elektrotaktik davranış tanıtılır ve mikroakışkan bir cihazda yapılan örnek bir protokol gösterilir.

Protokol

Bu protokol, Tong ve ark., Caenorhabditis elegans'ın Locomotion'ının İsteğe Bağlı Kantitatif Analizi için Mikroakışkan Tabanlı Elektrotaksi, J. Vis. Exp. (2013).

1. Elektrotaksi Deneyi

1. Mikrokanalı, bir monitöre bağlı monte edilmiş bir kamera ile bir mikroskobun tablasına (tercihen XY hareketli) yerleştirin (Şekil 1).
2. Güç kaynağını veya amplifikatörün çıkış kablolarını mikro kanalın elektrotlarına bağlayın. Yalnızca bir DC sinyali isteniyorsa basit bir DC güç kaynağı yeterlidir, ancak bir fonksiyon üretecine bağlı bir amplifikatör, darbeli DC ve AC sinyallerinin de uygulanmasına izin verir.
3. Mikrokanalın çıkış tüpünü tek kullanımlık bir şırıngaya takın. Giriş tüpünün ağzını M9 fizyolojik tamponuna batırın ve şırınganın içine negatif bir basınç uygulayarak (manuel olarak veya bir şırınga pompası kullanarak) sıvıyı kanala nazikçe aspire edin. Giriş ve çıkış tüplerinin her ikisi de M9 ile doldurulduğunda, şırıngayı tüpten ayırın. Hidrostatik tahrikli akışı önlemek için her iki tüpü de aynı yüksekliğe hizalayın.
4. Kanala bir DC voltajı uygulayın ve direncin (R = V / I) yaklaşık 0,6 MΩ (50 mm uzunluğunda, 0,3 mm genişliğinde ve ~0,1 mm derinliğinde bir mikro kanal için) olduğundan emin olun.
5. Kanalın bütünlüğünden memnunsanız, seyreltilmiş bir süspansiyondan kanala solucan yüklemek için yukarıdaki adımları izleyin.
6. Şırıngayı ayırın ve tüplerin nispi yüksekliğini ayarlayarak akışı hidrostatik olarak manipüle edin. Kanalın ortasına bir solucan yerleştirmek için bu yöntemi kullanın ve ardından her iki tüpü de aynı yükseklikte düz bir şekilde yerleştirin.
7. Güç kaynağını uygun voltaja ayarlayın: L4 sahne hayvanları için 12-3 V/cm, L4'ler için 10-4 V/cm ve genç yetişkinler için 2-4 V/cm. Elektrik sinyalini etkinleştirin ve solucanın alana alışması için 1 dakikalık ön maruziyete izin verin. Solucan katoda doğru hareket etmeye başlamalıdır. Dakika geçtiğinde, kayda başlamak için kamerayı kullanın.
8. AC ve darbeli DC deneyleri için, maksimum duyarlı elektrik alanı yukarıdan kabul edilebilir ve sinyalin frekansı ve görev döngüsü istenildiği gibi modüle edilebilir.
9. Deney bittiğinde, kanaldaki tüm sıvıyı (ve solucanları) çıkarın, dH₂0 ile durulayın ve cihazı kuruması için 125 ° C'de sıcak bir plaka üzerinde bırakın.
10. NIH ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) veya özel MATLAB tabanlı solucan izleme yazılımı kullanarak kaydedilen videolardan manuel olarak lokomotor verileri çıkarın.

Sonuçlar

Şekil 1. Nematod elektrotaksi testi için mikroakışkan tarama platformunun şeması.