Yöntem makalesi

Drosophila Larvaların segmental Aksonlar içinde Sinaptik veziküller in vivo Görselleştirme

DOI:

10.3791/2151

⸱

15 Ekim 2010

 , 
1Department of Biological Sciences, SUNY-University at Buffalo

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, canlı diseksiyonu tartışıyor. Drosophila Görüntüleme amacıyla mikrotübül parça GFP etiketli aksonal vezikül hareketi larvaları.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aksonal taşıma mekanizmaları nedenlerine açıklık uzun mesafe taşımacılığı hatalarına farklı nörolojik hastalıklar nasıl etkilediğini belirlemede çok önemli olduğunu göstermiştir. Bu temel süreç Hataları nöronal işleyişi ve gelişimi üzerinde zararlı etkileri olabilir. Biz, ortaya çıkarmak için tasarlanmış bir diseksiyon protokol geliştirdiler

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Reaktiflerin hazırlanması

  1. Diseksiyonu tampon hazırlama, 7.2 ve sterilize 128 mM NaCl, 1mm EGTA, 4 mM MgCl 2, 2mm KCl, 5mM Hepes ve 1000 ml, PH 36 mM Sakkaroz: Aşağıdaki bileşikleri ekleyerek hazırlayın .

2. Diseksiyon için hazırlanması

  1. Siligard küp jel yaklaşık bir inç genişliğinde, 1 inç uzunluğunda ve yüksekliği yaklaşık 1cm kesilir. Jel küp Diseksiyon sırasında bir bardak slayt yerleştirilir. Küpleri birden fazla kez kullanılabilir.
  2. Pimler: diseksiyon için kullanılan Pins kısa ekstra gerekir. Minutien pimleri keskin alt kısmında diseksiyonu en iyi çalışır.
  3. Bir keskin mikrodi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila larva segmental sinirler içinde sinaptik vezikül taşıma in vivo görüntüleme aksonal taşıma mekanizmaları çalışmak için güçlü bir araçtır. Daha önce larva sinirler içinde tekrarlar genişleme vezikül taşımacılığı 3 dinamiklerini nasıl etkilediğini aydınlatmak için genişletilmiş polyQ tekrarlar ifade taşıma dinamikleri değerlendirmek için bu protokolü kullandık. Bu protokolü kullanarak vezikül hareketinin hızı, video akışı bir kymograph dönüştürerek tespit edilebilir. Genetik kullana.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Çıkar çatışması ilan etti.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.

MK UB CURCA tarafından Öğrenci Araştırma Ödülü ile desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 Çift Mikro Diseksiyon MakasıFine Science ToolsYaylı makas – 6mm bıçak. 0.125 mm uç çapı
2 Çift PensFisher ScientificFisherbrand Diseksiyon Mikro-Adson tırtıklı uçlu pens
Diseksiyon İğnesi KutusuFine Science ToolsMinutien İğneler 0.1mm çap

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
  2. Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron dise....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Drosophila LarvalarAksonal TransportFloresan MikroskobuCanl G r nt lemeGFP EtiketlemeDiseksiyon ProtokolMitokondri TakibiLizozom Takibi

İlgili makaleler