Bakteriyel Hücrelerle Mikrofluidik Plakanın Hazırlanması

Özet

Kaynak: Sutlief, A. L. ve diğerleri. Pseudomonas aeruginosa üzerindeki kayma stresinin otomatik yüksek verimli mikrofluidik sistem kullanılarak canlı hücre analizi. J. Vis. Exp. (2019).

Bu video, bakteriyel kültürlerde kesme stresi çalışmaları için mikrofluidik bir plakanın hazırlanmasını göstermektedir. Kanallar ortamla astarlandıktan sonra, bakteri hücreleri deneysel kanala getirilir ve bağlanmak üzere kuluçka yapılır. Kalıntı ortam ve kültür çıkarılarak sistem sonraki kesme stresi deneylerine hazırlanır.

Protokol

1. Medya Hazırlığı

1. %0,25 glikoz içeren minimal ortam (MM) hazırlayın. %0,25 glukozlu 1 L MM yapmak için, 200 mL steril M9 tuz çözeltisi, 2 mL steril 1 M magnezyum sülfat (MgSO₄), 100 μL steril 1 M kalsiyum klorür (CaCl₂) ve 12,5 mL steril %20 (w/v) glikoz ile suya (dH₂O) son hacim 1 L olarak eklenin.
2. Gerekli medyayı steril tekniklerle steril bir şişeye aktarmak. Kullanılan kanal sayısına göre gereken miktarı hazırlayın. Genellikle, her kanal primasyon için 200 μL, tohumlama için 300 μL ve 24 saatlik deney için 1300 μL gerektirir.
3. Şişeyi deneysel sıcaklıkta bir kuluçka veya su banyosuna yerleştirin. Mikrokanallard....

Sonuçlar

Şekil 1: Mikrofluidik Sistemin Bireysel Bileşenleri. Bireysel bileşenler soldan sağa sıralanmıştır: 1. CCD kamera, 2. Otomatik Aşama, Otomatik Floresan Modülü ve Otomatik Odak Modülü ile Yüksek Çözünürlüklü Ters Mikroskop, 3. Plaka Aşaması,.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Amonyum klorür, ACS	VWR	BDH9208-500G	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
BioFlux 1000 48 Kuyu Düşük Kesme Plakası	Fluxion Biyobilimleri	910-0047
BioFlux 1000Z Mikrofluidik Görüntüleme Sistemi	Fluxion Biyobilimleri	BF 1000Z
Kalsiyum klorür dihidrid, ACD Sınıfı	VWR	97061-904	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
Dekstroz, Ansutiz, ACS	VWR	BDH9230-500G	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
Magnezyum Sülfat ACS Sınıfı	VWR	EM-MX0070-1	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
Potasyum Fosfat Monobazik, ACS Sınıfı	VWR	BDH9268-500G	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
Pseudomonas Aeurginosa GFP	ATCC	15692GFP	Bu çalışmada GFP modifikasyonlu Pseudomonas aeurinosa bakteri suşu PA01 kullanılmıştır.
Sodyum Klorür, ACS	VWR	BDH9286-500G	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası
Sodyum fosfat, monobazik, susuz ve reaktif kalitesinde	VWR	97061-942	Minimal medya kompozisyonunun bir parçası