Yöntem makalesi

RNA veya Protein Ekstraksiyonu Özgül Beyin Bölgesi'nden Rat Beyin Mikro-disseksiyon

DOI:

10.3791/269

⸱

30 Ağustos 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikro-disseksiyon içine sıçan beynin çeşitli bölgelerinde, farklı nörodejeneratif hastalıklar çalışma için son derece önemlidir. Bu video dört büyük beyin bölgelerinde mikro diseksiyon koku alma ampul, frontal korteks, striatum ve taze sıçan beyin dokusu hipokampüsteki göstermektedir. RNA ve protein doku bozulması önlemek için ilgili bölgelerde hızlı kaldırılması için yararlı ipuçları verilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikro-disseksiyon içine sıçan beynin çeşitli bölgelerinde, farklı nörodejeneratif hastalıklar çalışma için son derece önemlidir. Bu video dört büyük beyin bölgelerinde mikro diseksiyon koku alma ampul, frontal korteks, striatum ve taze sıçan beyin dokusu hipokampüsteki göstermektedir. RNA ve protein doku bozulması önlemek için ilgili bölgelerde hızlı kaldırılması için yararlı ipuçları verilmiştir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Adım 1

Kurulmuş protokollere göre sıçan Kurban. Kafatası beyin çıkarın ve buz durulayın soğuk DEPC herhangi bir yüzeye kan kaldırmak için Milli Q suyu tedavi.

Adım 2

Soğuk metal plaka üzerine yerleştirin. , Sağ ve sol hemisfer beynin iki yarısı kesin.

figure-protocol-1

Şekil 1. Sıçan yarımkürenin medial kesme pozisyonları

Adım 3

Ilk kesim hemen sonra koku ampul toplayın. Flaş -80 sıvı azot ve mağaza örnek dondurma ° C

figure-protocol-2

Şekil 2. Olfaktör ampul diseksiyonu

Adım 4

Bir bıçak ve bir Dumont No 5 forseps kullanarak, ikinci kesim sonra sağ frontal korteksin toplayın. Flaş -80 sıvı azot ve mağaza örnek dondurma ° C

figure-protocol-3

Şekil 3. Frontal korteks diseksiyonu

Adım 5

Iki Dumont No.5 forseps yardımı ile üçüncü kesintisinden sonra sağ striatum (kaudat nükleus) toplayın. Flaş -80 sıvı azot ve mağaza örnek dondurma ° C

figure-protocol-4

Şekil 4. Striatum (kaudat nükleus) diseksiyonu

Adım 6

Hipokampus toplamak için, beynin ventral tarafında koymak ve sonra hipokampus maruz Ortabeyin kaldırmak. Iki Dumont No.5 forseps kullanarak korteks, hipokampus parçalara ayır. Flaş -80 sıvı azot ve mağaza örnek dondurma ° C

figure-protocol-5

Şekil 5. Hippocampus diseksiyonu

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beynin farklı bölgelerinde farklı nörodejeneratif hastalıklar ile ilişkilendirir. Hipokampus Alzheimer hastalığı ile ilgilidir Örneğin, frontal korteks ve striatum Parkinson hastalığı ile ilgili. Beynin hassas mikro diseksiyon hastalıklı bölgede mRNA ve protein değişiklikleri daha doğru algılamasına olanak sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Hayvanların Hong Kong Üniversitesi Eğitim ve Araştırma Canlı Hayvan Kullanımı (CULATR) Komitesi tarafından onaylanmış ve hayvan kullanımı için sağlık kuralları National Institutes göre araştırma hayvan kullanımı için protokole göre ele alınmıştır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
MikroskopOlympus Corporation
Diseksiyon aletleriMetal plaka, pens, bistüri ucu vb. RNazı ortadan kaldırmak için alüminyum folyo ile tek tek sarılmış ve 180oC'de sekiz saat boyunca ısıtılmış. Kullanımdan önce buzla soğutulmuş.

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

RNA EkstraksiyonuOlfakt r BulbusFrontal KorteksStriatumHipokampusS v Azot

İlgili makaleler