In vitro sistemi değiştirilmiş 3-D sulandırılmış bazal membran birçok tümör hücre hatlarının büyüme özellikleri tümör hücrelerinin metastatik ikincil site uykuda veya proliferatif davranışı ile ilişkili olduğu In vivo.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Meme kanseri nüks genellikle kanserin hiçbir belirti bulunduğu uzun bir latent dönem takip ve metastaz primer tümörün çıkarılması ve adjuvan tedavi sonrası uzun yıllar kadar, klinik olarak belirgin hale olmayabilir. Bu olgunun olası bir açıklama, tümör hücrelerinin metastatik siteleri numaralı seribaşı geleneksel tedavilere dirençli ve 1-4 kez uzun süre atıl kalması olduğunu .
Ikincil sitelerde, uykuda kanser hücrelerinin varlığı, ne prolifere ne apoptozis 5-7 geçmesi latent tek kişilik hücrelerinde daha önce açıklandığı gibi olmuştur . Dahası, bu tek kişilik hücrelerinde erken bir aşamada hastalığın ilerlemesi 8-10 primer tümörün yaygınlaştırılması ve hastaların kemik iliği, kan ve lenf düğümleri 1,4,11 büyüme tutuklandı ikamet gösterilmiştir. Bu nedenle, proliferatif bir devlet ya da geçiş dormansi düzenleyen mekanizmaların anlaşılması, hastalığın tekrarını önlemek için yeni hedefler ve müdahaleler keşfetmek için kritik öneme sahiptir. Ancak, mevcut model sistemler eksikliği, metastatik büyüme tümör dormancy den anahtarı düzenleyen mekanizmalar çözülüyor engel olmuştur.
in vivo ve ex vivo tümör hücrelerinin metastatik ilerlemesini çalışma model sistemler daha önce 1,12-14 tarif edilmiştir. Ancak bu model sistemler, gerçek zamanlı ve yüksek kapasiteli metastatik hastalık olarak prolifere yalnız uyuyan tümör hücrelerinin ortaya çıkması ne tetikler bir şekilde mekanistik anlayışlar var. Yakın zamanda (D2A1, MDA-MB-231, K7M2) ya da uyuyan (D2.OR, MCF7, K7M2-AS.46) veya proliferatif metastatik davranış sergileyen hücreler in vivo büyüme özellikleri modeli in vitro sistemde 3D geliştirdik in vivo olarak. 3-boyutlu (3D) bazal membran ekstraktı (BME) kültüre, metastatik bir yerinde in vivo dormansi sergi tümör hücrelerinin in vivo metastatik hücreler son derece değişken sonra kolayca 3D kültür prolifere ise, latent kalır, ama nispeten daha kısa olduğunu göstermiştir sükunet, dönemleri. Daha da önemlisi, in vitro model sistem 3D kullanılarak biz ilk defa ECM kompozisyon uykuda tümör hücrelerinin proliferatif durumuna geçer ve in vivo çalışmalar 15-17 doğruladı olmadığını düzenlenmesinde önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Bu nedenle, bu raporda açıklanan model sistem model tümör dormansi in vitro yöntem sağlar ve mikroçevresinin kaynaklanan proliferatif büyüme geçiş çalışma.
Protokol
1. Hücre kültürü uyuyan ve metastatik tümör hücre hatları bakım
- Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta (DMEM) yüksek glukoz ve% 10 fetal sığır serumu (10 cm kültür plakaları uykuda (D2OR / MCF7/K7M2-AS.46) ve metastatik tümör hücrelerinin (D2A1 / MDA-MB-231 / K7M2) büyütün FBS) ve antibiyotikler. Hücrelerin% 70-80 izdiham ulaştıklarında, aşağıdaki testleri geçin.
2. 3D BME sistemi atıl (latent) ve metastatik (prolifere) tümör hücreleri hücre proliferasyonu tayininde kültür
3D sistemi atıl / metastatik hücreler Kültürleme
- Tahlil yapılmadan önce, 4 çözülme Cultrex büyüme faktörü azaltı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tümör hücrelerinin metastatik büyümeye geçiş sönmüş bir devlet ya da sonucu dissemine korumak altında yatan mekanizmaları büyük ölçüde bilinmemektedir kalır. Bu fenomen, insan hasta 4,12 ve birkaç preklinik modellerde bu sorunu çözmek için geliştirilmiştir çalışma için son derece zor olmuştur . Bununla birlikte, in vivo ve ex-vivo tümör dormansi için model sistemler (1,12 gözden) karakterize edilmiştir. Ancak, tümör dormansi in vivo modellerde öncelikle tümör dormansi düz.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu araştırma, Ulusal Kanser Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından kısmen desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktifin Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
| DMEM yüksek glukoz | Invitrogen | 11965-118 | |
| DMEM düşük glikoz | Invitrogen | 11885-092 | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Invitrogen | 10091-148 | |
| Büyüme faktörü azaltılmış 3-D Cultrex Bodrum Membran Özü | Trevigen Inc. | 14-15mg/ml arasında protein konsantrasyonu | |
| D2.0R ve D2A1 hücre hatları | 5,19 | ||
| K7M2 ve K7M2AS1.46 hücre | 20 | ||
| MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinin | ATCC | ||
| Bir 8 odasının cam slayt sistemi | (Lab-TEK, Thermo bilimsel) | 177402 | |
| Hücre titresi 96 sulu Tek Çözüm hücre proliferasyonu tahlil kiti | Promega | G3580 | |
| VECTASHIELD DAPI ile orta montaj | Vektör Laboratories Inc. | H-1200 | |
| Normal eşek serum | Jackson ImmunoResearch | 017-000-121 | |
| Elisa Levha Reader | Bio-Tec | Kayıt 490nm | |
| Konfokal mikroskop | Zeiss-EKK-510 | Büyütme X63 |
Kaynaklar
- Aguirre-Ghiso, J. A. Models, mechanisms and clinical evidence for cancer dormancy. Nat Rev Cancer. 7, 834-846 (2007).
- Pantel, K., Woelfle, U. Micrometastasis in breast cancer and other solid tumors. J Biol Regul Homeost Agents. 18, 120-125 (2004). ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
