Bir Glioblastoma Sıçan Modeli Oluşturma

Özet

Kaynak: Bolcaen, J., et. al., Bir Mikro Işınlayıcı Kullanılarak Bir Glioblastoma Sıçan Modelinin PET ve MRI Kılavuzlu Işınlaması. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, beyin tümörüne neden olan glioblastoma hücrelerini prefrontal kortekse stereotaktik olarak enjekte ederek bir glioblastoma sıçan modeli oluşturma prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. F98 GB Sıçan Hücre Modeli

1. ATCC'den elde edilen F98 GB hücrelerini, Dulbecco'nun modifiye Eagle Medium, %10 buzağı serumu, %1 penisilin, %1 streptomisin, %1 L-glutamin ve %0.1 amfoterisin b kullanarak tek tabakalar halinde kültürleyin ve bir CO₂ inkübatöre (%5 CO₂ ve 37 °C) yerleştirin.
2. Dişi Fischer F344 sıçanlarının beynindeki glioma hücrelerini aşılayın (vücut ağırlığı 170 g).
   1. Steril aletler kullanın ve her zaman steril eldiven giyin.
   2. Sıçanları 74 mg / kg ketamin ve 11 mg / kg ksilazin karışımını bir insülin şırıngası (1 mL, 29 G) ile intraperitoneal (IP) enjekte ederek uyuşturun. Ekstremitenin geri çekilme refleksine yanıt verilmemesi ile anesteziyi onaylayın. Burun ve kulaklar için sabitleme noktaları kullanarak fareleri stereotaktik bir cihazda hareketsiz hale getirin. Anestezi altındayken göz kuruluğunu önlemek için bir karbomer göz jeli yerleştirin.
   3. Fareyi göz hizasından kafatasının arkasına kadar tıraş edin ve cildi povidon-iyot ile dezenfekte edin.
   4. Kafatasını 2 cm'lik bir orta hat kafa derisi kesisinden açığa çıkarın ve sağ frontal hemisferde bregmaya 2 mm posterior ve 2,5 mm lateral 1 mm'lik bir delik (elmas matkap) açın.
   5. Stereotaktik olarak yönlendirilmiş bir insülin iğnesi (29 G) yerleştirin ve bir mikro şırınga pompası kontrolörü kullanarak 3 mm derinliğe 5 μL hücre süspansiyonu (20.000 F98 GB hücre) enjekte edin (ayarlar: enjekte edin (I50), hız 1 nL/s (001 SDN)).
   6. Şırıngayı yavaşça çekin ve kesiği kemik mumu ile kapatın. Cildi dikin ve povidon-iyot ile dezenfekte edin.
   7. Ameliyat sonrası hayvanın vücut ısısını kırmızı bir lamba kullanarak stabilize edin. Sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar sıçanın uyanışını izleyin. Tamamen iyileşene kadar hayvanı diğer hayvanların şirketine iade etmeyin. Tüm hayvanları yiyecek ve su ad libitum ile çevre tarafından kontrol edilen koşullar altında (12 saat normal aydınlık/karanlık döngüleri, 20-24 °C ve %40-70 bağıl nem) tutun. Vücut ağırlıklarını, yiyeceklerini, su alımlarını, aktivitelerini ve normal davranışlarını izleyerek hayvanları yakından takip ettiğinizden emin olun. Vücut ağırlığında %20'lik bir azalma gözlendiğinde veya normal davranış ciddi şekilde bozulduğunda ( örneğin , tımar eksikliği) hayvanları ötenazi yapmak için öldürücü dozda pentobarbital sodyum kullanın (160 mg / kg).

Malzemeler

http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
GB RAT model
F98 Glioblastoma hücre hattı	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A<
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Stereotaktik çerçeve	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
İnsülin şırıngası Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm

td style='width:127pt;'>