Lokal beyin iskemisini indüklemek için bir sıçan yavrusunda orta serebral arter tıkanıklığı oluşturmak

Özet

Kaynak: Larpthaveesarp, A., et. al. P10 Sıçanlarda Neonatal İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, bir sıçan yavrusunda Orta Serebral Arter Oklüzyonu modelinin kurulmasını göstermektedir. İç karotis arter (ICA) açığa çıkar ve kan akışını sınırlamak için bir bağ sabitlenir. Orta Serebral Artere ulaşmak için IKA'dan bir oklüd yerleştirilir. Daha sonra daha fazla analizden önce yavrunun iyileşmesine izin verilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

1. Yavruyu tartın ve uygun kiloda (19-21 g) olduğundan emin olun. Yavruyu %100 oksijen içinde %3 izofluran (O₂) anestezik hale getirin ve ayak sıkışmasına yanıt olmadığından emin olun. Cerrahi aşamada bir ısıtma yastığı kullanarak vücut yüzey sıcaklığını 35,5 °C ile 37 °C arasında tutun.
2. Hayvanı omuz bölgeleri boyunca bantla sırtüstü pozisyonda sabitleyin. Steril pamuklu çubuklar kullanarak, ön servikal bölgeyi bir povidon-iyot çözeltisi ile temizleyin, ardından çift damıtılmış suda% 70 etanollük bir çubukla temizleyin ve her çözelti arasında toplam dört çubuk için geçiş yapın.
3. Planlanan insizyon bölgesine lokal olarak% 0.25 bupivakain infiltrasyonu yapın. Bir stereoskop kullanarak, ortak karotis arteri (CCA) ortaya çıkarmak için orta hat 5 ila 7 mm ön servikal insizyon yapın. Boşluğu açık ve arteri açıkta tutmak için 2-4 ekartör yerleştirin.
4. İç karotis arteri (ICA), oksipital arteri (OA) ve dış karotid arteri (ECA) bulun. Net bir görüş elde etmek için arterleri tımar edin. Vagus sinirini rahatsız etmemeye dikkat edin.
   NOT: Sahte ameliyatlı yavrular için kesi açık bırakılır ve arterler açıkta bırakılır, ardından kesi dikilerek kapatılır. Toplam anestezi süresi oklüzyon ameliyatının anestezi süresine eşdeğerdir.
5. 6-0 ipek örgülü dikiş ipliğinden 1,5 cm kesin. Tek iplikçikleri çekerek dikişi çözün. Tek tellerin düzgün olduğundan ve yıpranmadığından emin olun.
   NOT: Gerekirse, tek tutamı steril suya batırarak ve tutamı forseps uçlarıyla tımar ederek yıpranmış uçları düzeltin.
6. Sütür ipliğini 45 derecelik forseps ile tutarken, forseps uçları ICA ve OA arasında çıkacak şekilde ICA'nın altına girecek şekilde süpürme yay hareketiyle hareket ettirin.
   NOT: Diseksiyon iyi yapılırsa bu adım nispeten kolay olacaktır. ICA ve OA temas ediyorsa, ICA'yı izole etmek için forseps kullanırken arterleri yırtmamaya dikkat edin. Kanama olursa, kanama durana kadar forseps ile artere baskı uygulayın. Kanı steril bir çubukla emdirin.
7. Forseps tarafından tutulan dikiş ipliğinin ucunu tutun ve ucuna erişimi kolay olacak şekilde çekin. İpliği forsepsten serbest bırakın ve forsepsleri ICA'nın altından geri çekin, adım 1.5'teki hareketi tersine çevirin (Şekil 1A).
8. ICA'nın etrafına, CCA'dan ayrıldığı yere en yakın olan tabanda geçici bir bağ bağlayın.
   NOT: Düğümü, düğümü çıkarmak için çekilecek ipin ucunun forseps ile kolayca kavrayabilecek kadar uzun (1 mm'den büyük, 3 mm'den küçük) olacak şekilde bağlaması ve düğümün diğer tarafında geri çekilme için uygun miktarda dikiş ipliği olmasına dikkat edilmesi önemlidir.
9. ICA'yı dikkatlice yanal olarak geri çekin ve ipliği insizyonun karşısındaki taraftaki aksilla bölgesinin yakınındaki fazla deriye sabitlemek için bir klips kullanın. Kontrolsüz kanama riskini en aza indirmek için bir sonraki adıma geçmeden önce bu geri çekilen telin kan akışını durduracak kadar gergin olduğundan emin olun. Arterin düz ve soluk olduğunu gözlemleyin.
   NOT: ICA'nın kısmen veya tamamen yırtılmasına neden olabileceğinden aşırı geri çekmeyin. Retraksiyon, arteriyotomi yapılmadan hemen önce, klipsin karşısındaki taraftaki ipliği çekerek ayarlanabilir.
10. Başka bir örgüsüz sütür telini kavramak için 45° forseps kullanın ve adım 1.5'te olduğu gibi ICA'nın altına ve çevresine dolayın. Bu ipliği geri çekme ipliğine yanal olarak yerleştirin (Şekil 1B).
    NOT: Bu adım, geri çekme işleminden önce de yapılabilir. Geri çekme kalitesinden emin değilseniz, bu düğüm bir sonraki adımdan önce çok gevşek bir şekilde bağlanabilir.
11. Bağlı ve bağlanmamış ligatürler arasında ortada 0.2 mm'lik bir arteriyotomi kesin, bağlı ligatüre daha yakın hata yapın.
    NOT: Bağlı arterde kalan kan, arteriyotomi yoluyla boşalabilir ancak 5 μL'yi geçmemelidir. Kanama devam ederse, artere aşırı gerginlikten zarar vermemek için dikkatli bir şekilde geri çekilmeyi artırmak için geri çekme ipliğini dikkatlice çekin.
12. Bir metrik cetvel kullanarak, tıkayıcı sütürü ölçün ve reperfüzyon sırasında tıkayıcıyı çıkarmak için sütürü 2-3 mm'lik ekstra bir payla kesin. Tıkayıcıyı 45 derecelik forseps ile tutun ve MCA'ya ulaşmak için uygun uzunlukta bir bükülme oluşturmak için düz forseps kullanın, bu da ilerleme için bir durma noktasını işaretler.
    NOT: Bu ağırlık aralığındaki doğum sonrası veya P-10 Sprague Dawley veya Long Evans sıçan yavruları için silikon uç ucundan dirseğe kadar 10 mm'lik bir oklüzyon uzunluğu kullanılır.
13. 45° forseps kullanarak, silikon kaplı naylon oklüzyon sütürünü arteriyotomiye besleyin ve sütürü, MCA'ya önceden belirlenmiş mesafeyi işaretleyen dirseğe ilerletin (Şekil 1C). İlerlemenin sorunsuz hissettirdiğinden emin olun; Direnç hissedilirse ilerlemeyi hemen durdurun. İlerleme sırasında, sütürü CC/ECA'ya paralel bir yönde, başa doğru doğrultun.
    NOT: Sütür hayvanın omurgasına doğru dorsal olarak ilerletilirse, pterygopalatin artere (PTA) kaçabilir. 3-5 mm ilerledikten sonra direnç hissediliyorsa sütür PTA bileşkesine çarpmış demektir. İlerleme yönünü ayarlamadan önce silikon kafa arteriyotomiye yakın olana kadar tıkayıcıyı arterden geri çekin. Tıkayıcıyı arteriyotomiden tamamen çıkarmak gerekli değildir.
14. Adım 1.10'daki ipliği kullanarak geçici bir bağ bağlayarak tıkayıcıyı sabitleyin (Şekil 1D).
15. Ekartör klipsini çıkarın. Geçici bağların her ikisinin de tellerini kesin, böylece düğümü çıkarmak için çekilen düğümün telinin düz forseps ile kavranması kolay olur ve düğümü sıkmak için çekilen telden daha uzun olur.
    NOT: Teller, kapatıldıktan sonra boşlukta dolaşmamaları için yeterince kısa olmalıdır.
16. Ekartörleri çıkarın ve üç ila dört kesintili sütür oluşturmak için 6-0 örgülü ipek kullanarak boşluğu kapatın.
17. Yavruyu anesteziden çıkarın ve oda havasındaki bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Yavruyu, sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar izleyin ve baraja geri göndermeden önce tamamen iyileştiğinden emin olun. Yavrunun vücut yüzey sıcaklığını 35,5 °C ile 37 °C arasında tuttuğundan emin olun.

Sonuçlar

Şekil 1: tMCAO prosedürünün canlı cerrahi görüntüleri. (A) İlk sütür ipliği, adım 1.6'da detaylandırıldığı gibi ICA etrafında dolanır. (B) İlk geçici bağ bağlanır ve ICA geri çekilir. İkinci sütür ipliği, adım 1.9'da detaylandırıldığı gibi, ilk sütür ipliğinin yanal olarak ICA'nın etrafına dolanır. (C) Silikon kaplı oklüzyon sütürü, adım 1.12'de deta...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Isoflourane	Henry Schein	50033	anestezi, at 3
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	Düşük ila orta ayar
IR Termometre	Extech Instruments	72-5270
Küçük hayvanlar için geri çekme kiti	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forseps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 ml/kg
Pamuk Uçlu Aplikatörler	Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990

%