Bir mikroakışkan Platform kullanarak Yüksek throughput Protein Ekspresyonu Jeneratör

Summary

Biz protein dizilerin ifade etmek için bir mikroakışkan bir yaklaşım sunuyoruz. Cihaz, mikro-mekanik vana ile kontrol reaksiyon odaları binlerce oluşur. Mikroakışkan cihaz bir mikro baskılı gen kütüphanesi ile birleştirilmiştir. Bu genler daha sonra transkripsiyonu ve deneysel kullanıma hazır bir protein dizisi sonucunda, on-chip çevrilir.

Abstract

Bu tür sistemler biyoloji gibi hızla artan alanları, büyük sistemlerde yüksek verimli ve yüksek kalitede ölçüm sağlayan yeni teknolojilerin geliştirilmesi ve uygulanması gerekmektedir. Mikroakiskan, biyokimyasal biyofiziksel ve hücre tabanlı deneyleri ¹ kapsayan, bu tür on-chip yüksek çıktılı tarama deneyleri gerçekleştirmek gibi, bu gereksinimleri birçok yerine getirmek için vaat ediyor. Mikroakışkanları cihazların ilk günlerinden bu yana, bu alanda büyük ölçüde mikroakışkan büyük ölçekli entegrasyon ^2,3 gelişimine öncülük etmek, gelişti. Bu teknoloji, bir pul büyüklüğünde yer kaplayan (Şekil 1) ile tek bir cihazda mikromekanik vanaları binlerce entegrasyon sağlar. Biz PING (Protein Etkileşim Ağı Generator) adlı proteini diziler (Şekil 2) in vitro ifade oluşturmak için bir high-throughput mikroakışkan platformu geliştirdi. Bu diziler birçok deneyler için bir şablon görevi görebilirgibi protein-protein ^{4, protein-5} RNA ya da protein-DNA ⁶ etkileşimleri.

Cihaz tek bir microarrayer kullanılarak programlanır reaksiyon odaları binlerce oluşur. Standart mikroarray lekelenme teknikleri kullanarak mikroarrayler üreten Ayrıca potansiyel kontaminasyon veya çapraz reaktivite ortadan kaldırarak, tek bir nokta ile ve arayüz aygıtları programlar için bu baskılı microarrays her odası hizalama, proteinler ^7, DNA ^8, küçük moleküllerin arraying için izin de çok modüler ve hatta kolloidal süspansiyonlar. Biyolojik bilimler üzerine mikroakışkanları arasında potansiyel etkisi önemlidir. Mikroakışkanları dayalı testler bir dizi zaten biyolojik sistemlerin yapısı ve fonksiyonu yeni bakış açıları sağlamıştır ve mikroakışkanları alanında biyoloji etkilemeye devam edecek.

Protocol

1. Cihaz İmalatı

1. Stanford Mikroakiskan Döküm (den DTPA-D SU-8 kontrol kalıp ve SPR220-7 akış kalıp Satın www.stanford.edu / grup / döküm ).
2. Pişirme adımları sonra ⁹ elastomer salınımını teşvik etmek 10 dakika chlorotrimethylsilane (TMCS) buharı silikon kalıplar Açığa.
3. İki farklı oranlar sırasıyla 5:1 vermekte kontrolü ve akış kalıpları için 20:1, silikon bazlı elastomer ve sertleştirici (iyice karıştırın) karışımı hazırlayın. Farklı oranlarda çoklu katmanlar için uygun bağların gereklidir.
4. Kontrol tabakası (yaklaşık 5 mm yükseklik) 05:01 PDMS dökün.....

Discussion

Bu yazıda, bir mikroakışkan platformu kullanarak yüksek throughput nesil protein dizileri için bir yöntem mevcut. Dizi nesil DNA şablonları mikroarray baskı ve mikroakışkan cihaz içinde DNA'nın in vitro protein ekspresyonu dayanır.

Bizim roman mikroakışkan platform proteomik için umut verici ve genel bir araç haline anda kullanılan yöntemler üzerinde birçok önemli avantajlara sahiptir. Bir avantaj zar-bağlı proteinler ile. Mikrozomal membran ¹¹ mevcudiyetinde.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reaktif / Ekipman	Şirket	Katalog numarası
PDMS-Sylgard 184	Dow Corning USA	ESSEX-DC
Chlorotrimethylsilane (TMCS	Sigma-Aldrich	C72854
Epoksi kaplı cam yüzeyler	CEL Associates ABD	VEPO-25C
Poli etilen glikol (PEG)	Sigma-Aldrich	81260
D-trehaloz dihidrat	Sigma-Aldrich	T9531
Biotinlenmiş-BSA	Delmek	PIR-29130
Neutravidin	Delmek	31050
Penta-His-biotin	Qiagen	34440
Hepes	Biyolojik Sanayi	03-025-1B
TNT-T7	Promega	L5540
C-myc Cy3 antikor	Sigma-Aldrich
Kontrol kutusu	Stanford Mikroakiskan Döküm
Kalıp	Stanford Mikroakiskan Döküm
Pin	New England Küçük Tüpler Corporation'ın
Tygon microbore boru	Tygon	S-54-HL
Microarrayer	Bio Robotik	MicroGrid 610
Silikon işaretçilerine	Paralel Syntez	SMT-S75