Makrofajlar homeostasis merkezi bir rol oynar ve birçok dokularda patoloji. Burada sunulan protokol makrofajlar tüketen için kullanılan yöntemleri açıklar In vivo, Kemik iliği aspirasyon gelen polarize makrofajlar doğan ve adoptively farelere makrofajlar aktarılması. Bu teknikler polarize makrofajlar sağlık ve hastalıkta oynadığı rol belirlenmesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Makrofajlar tükenmesi ve Sulandırma
Bu makalede
Özet
Özet
Makrofajlar doğuştan bağışıklık yanıtı başlatılması ve edinilmiş bağışıklık yanıtı yönetmenlik bulaşıcı meydan okuma ya da yaralanma Doğal bağışıklık sisteminde önemli oyuncular vardır. Makrofaj disfonksiyon uygun bir bağışıklık yanıtı monte bir yetersizlik yol açabilir ve bu şekilde, inflamatuvar barsak hastalıkları gibi birçok hastalık süreçleri, karıştığı edilmiştir. Makrofajlar, kabaca iki kategoriye ayrılır polarize fenotipleri gösterilecek. Klasik aktive makrofajlar, IFNγ veya LPS ile uyarılması ile aktive çözünürlükte alternatif aktive makrofajlar ise, IL-4 veya IL-13 tarafından aktive, süpürücü enkaz ve doku yeniden katılmak ve suçlanmıştır bakteriyel meydan okumaya yanıt olarak önemli bir role enflamasyon faz. In vivo bir inflamatuvar yanıt sırasında, makrofajlar bağışıklık hücrelerinin infiltre karmaşık bir karışımı ortasında bulunan ve ağırlaştırarak ya çözümleriniz katılabileceklerdirg iltihabı. Bir bütün hayvan modelinde yerinde makrofajların rolünü tanımlamak için, bu karmaşık ortamdan makrofajlar tüketen etkisini incelemek gerekir. In situ makrofaj fenotip rolü hakkında soru sormak için, fenotipik olarak tanımlanan kutuplaşmış makrofajların kemik iliği aspirasyon gelen, ex vivo elde edilebilir ve veya makrofajların önceden tükenmesi olmadan geri farelere ekledi. Protokolde klodronat-içeren lipozomlar Burada sunulan, karşılık PBS enjekte kontroller, dekstran, sodyum sülfat (DSS) ile endüklenen farelerde kolit esnasında kolon makrofajlar tüketen için kullanıldı. Buna ek olarak, polarize makrofajlar ex vivo olarak elde edildi ve farelere damardan enjeksiyon yoluyla aktarılmıştır. Bu yaklaşımın bir uyarı olduğunu klodronat içeren lipozomlar böylece tükenmesi tarafından gözlemlenen etkisi makrofaj özgü, sulandırılması o olduğundan emin olmak için dendritik hücreler ve makrofajlar dahil olmak üzere tüm profesyonel fagositler, tüketmek olduğunumakrofajların evlatlık transferi ile f fenotip gereklidir. Farelerde sistemik makrofaj azalması da bir CD11b-DTR arka plan üzerine backcrossing fareler elde edilebilir, ki tamamlayıcı bir yaklaşımdır. Klodronat ihtiva eden lipozom-aracılı tükenmesi avantajı backcrossing farelerin dahil süresi ve masrafı gerekmez ve bağımsız olarak farelere (C57BL / 6, BALB / c, ya da karışık arka plan ve farelerde de kullanılabilir olmasıdır ).
Protokol
1. Klodronat içeren Lipozomlar kullanma Delen Makrofajlar
- Lipozomlar 4 ° C'de saklanır İki saat enjeksiyondan önce, oda sıcaklığına (18 ° C) gelmesini sağlamak için buzdolabından klodronat içeren lipozomlar, PBS içeren lipozomlar veya steril PBS (enjeksiyon kontrolü) çıkarın.
- 1 ml enjektöre 200 ul yüklemeden önce eşit dağılımını sağlamak için lipozomlar 8-10 kez içeren tüpler ters çevirin. Şırınga üstüne bir 26 gauge iğne takın.
- Sadece kendi kafa ve bacaklarda hareketsiz yeterli cilt tutan kulakları aşağıda sol elinizle, berduş fare kullanma.
- Iç organların karın sağ alt kadranda bulunan enjeksiyon, uzaklaşın böylece başını....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Makrofajlar, bağışıklık sisteminin önemli bir rol oynamaktadır fagositik hücrelerdir. Onlar doğuştan gelen bağışıklık yanıtı başlatılması ve edinilmiş bağışıklık yanıtı yönetmenlik sorumludur. Tipik olarak, klasik olarak aktive makrofajlar IFNγ veya LPS ile aktive ve patojenlerin ortadan kaldırılması ve bir inflamatuvar yanıt 1 montajı için sorumludurlar. Bunun tersine, alternatif olarak aktive makrofajlar, IL-4 ve IL-13 ile aktive ve inflamasyon 1 çözünürlüğü sırasında bir süpürücü kalıntı bir rol.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma Gastroenteroloji / Kanada Sağlık Araştırma / Crohn Derneği ve Kanada New Araştırmacı Ödülü Kolit Vakfı Kanadalı Derneği tarafından desteklenen LMS için Crohn ve Kanada Kolit Vakfı bir 'Araştırma Yardım Grant' tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif Adı | Şirket | Katalog numarası | |
| Klodronat-içeren lipozomlar | Clodronateliposomes.org | ||
| PBS-içeren lipozomlar | Clodronateliposomes.org | ||
| Steril PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 | |
| IMDM | Invitrogen | 12440 | |
| Fötal Buzağı Serumu (FCS) | Invitrogen | 12483 | |
| asetik asit | BDH Aristar | BDH3092-500MLP | |
| Monotiyogliserol (MTG) | Sigma | 96-275 | |
| Recombyapıldıktan sonra aynı operas fare MCSF | Stemcell Teknolojileri | 02951 | |
| GM-CSF Rekombinant murin | Stemcell Teknolojileri | 02935 | |
| Rekombinan sıçan, IL-3 | Stemcell Teknolojileri | 02903 | |
| Rekombinant fare IFNγ | Stemcell Teknolojileri | 02746 | |
| Rekombinan sıçan, IL-4 | Stemcell Teknolojileri | 02714 | |
| Hücre Ayrılma Tampon | Invitrogen | 13150-016 | |
| Anti-F4/80 Antikor sıçan | AbD Serotec | MCA497GA | |
| Fare anti-Argi Antikor | BD İletimi Laboratuvarları | 610708 |
Tablo 1. Bu protokolde kullanılan özel reaktifler.
Kaynaklar
- Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).
- Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
