Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir Laboratuvar Ölçekli Sentetik Örümcek İpek Üretimi

27.6K görüntüleme

DOI:

10.3791/4191

18 Temmuz 2012

Bu makalede

Özet

Örümcek ipek ve üstün mekanik özellikleri ve biyokimyasal rağmen, bu malzeme geleneksel yollarla, büyük miktarlarda hasat edilemez. Burada nesil Biyomalzeme olarak örümcek ipeği üretimi ve kullanımı eğitimi araştırmacılar için önemli bir süreç olan yapay örümcek ipeği lifleri, spin etkili bir strateji tanımlamak.

Özet

Toplumun ilerlemesi ve kaynakları kıt hale geldikçe, yeni teknolojiler geliştirmek için giderek önem kazanmaktadır yüksek performans özellikleri ile mühendis nesil biyomalzemeler söyledi. Bu yeni yapı malzemeleri geliştirme maliyet-etkin, hızlı olması ve işleme yöntemleri ve çevre dostu ve sürdürülebilir ürünler içermesi gerekmektedir. Örümcekler biyomimikri rakip iyi suni ve doğal malzemeler için yeni nesil mühendislik malzemelerinin zengin bir kaynak sunan, çeşitli mekanik özellikleri ile farklı elyaf türleri çok sayıda dönerler. Doğal örümcek ipeği büyük miktarlarda toplanması pratik olduğundan, sentetik ipek üretimi konuları sınırsız kaynağı erişimi olan bilim adamları sağlamak yeteneğine sahiptir. Eğirme süreci akıcı ve mükemmel olabilir, bu nedenle, yapay örümcek lifler vücut zırhı uzanan geniş bir uygulama yelpazesi, cerrahi dikiş için kullanılabilme potansiyeline sahiptirs, halat ve kablolar, lastikler, müzik aletleri için dizeleri ve havacılık ve uzay teknolojisi için kompozitler. Sentetik ipek üretim süreci ilerletmek için ve döndürmek için Spin kendi malzeme özelliklerini, düşük varyans gösterilecek fiberler elde etmek amacıyla, bakteriler, saflaştırma ve protein konsantrasyonu rekombinant örümcek ipek proteinlerinin ifadesini entegre bir ıslak eğirme-protokolü geliştirilen , fiber ekstrüzyon ve mekanik bir post-sıkma işlemi takip. Bu bir laboratuar ölçekte suni ipek lifleri spin ve analiz etmek için bir adım adım süreci ortaya çıkarmaktadır ilk görsel sunumudur. Ayrıca aynı iplik uyuşturucu bükülmüş lifler arasında değişkenlik giriş aza indirmek için ayrıntılı bilgi sağlar. Topluca, bu yöntemler, doğal örümcek ipek aşan yüksek kalitede elyaf yol açan, suni ipek, üretim işlemi itmek olacaktır.

Giriş

Örümcek ipek yüksek gerilimli çelik, Kevlar ve naylon gibi çeşitli sentetik malzemelerin dışarı gerçekleştirir olağanüstü mekanik özelliklere sahiptir. 1 Örümcekler çeşitli mekanik özellikleri gösterilecek en az 6-7 farklı fiber türleri, çekme mukavemeti ve genişletilebilirlik değişen miktarlarda tasarlanmış her dönmeye özgül biyolojik görevleri gerçekleştirmek için. 2 Araştırma bilim adamları hızla Çünkü yamyamlık 3,4. nedeniyle üstün mekanik özellikleri, biyouyumlu ve bunların toksik olmayan ve yeşil-maddi doğanın nesil Biyomalzeme olarak örümcek ipekleri kullanımı ve takip edilir arachnids ve zehirli doğa, tarım yoluyla örümcek ipe....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

figure-protocol-1
Grafik Bakış: İplik Sürecinin Biyomimikri

Doğal örümcek ipeği üretimi yolunun Biyomimikri:. Sentetik ipek üretimi için bir rota Bu görüntü altın küre dokumacı, Nephila clavipes ve doğal ipek üretimi (beyaz metin) için kullanılan bileşenlerinden büyük ampullate bezi gösterir. Kuyruk bölgesi ampulla, iplik uyuşturucu için bir depolama bölgeye taşınan ipek proteinleri büyük miktarlarda sentezler. Bu konsantre dope çözüm öncesinde lif ekstrüzyon için iyon değişimi ve dehidrasyon deneyimleri dönen ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu metodoloji bükülmüş Sentetik elyaflar doğal liflerle karşılaştırıldığında aynı büyüklük sırasına mekanik vardır. Biriktirme ve sonrası dönüş beraberlik süreçleri makineleşme ile insan hatası miktarını azaltarak, numuneler arasındaki deneysel varyasyon daha kontrollü ve büyük ölçüde azaltılmış bulunmaktadır.

Bizim metodoloji örümcek gen ailesinin diğer üyelerinin cDNAlarının gelen kodlanmış rekombinant proteinler bükülmüş olan diğer liflerin mekanik özellikleri araştırmak için potansiyel s.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Çıkar çatışması ilan etti.

Teşekkürler

Bu çalışma, sırasıyla NSF RUI Hibeler MCB-0950372 ve DMR-1105310 başlıklı "Black Widow Spider ipek ve Spider Tutkal Silks Mekanik Davranışı Moleküler Karakterizasyonu" tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Reaktif / Ekipman Şirket Katalog numarası Yorumlar
pBAD / TOPO ThioFusion İfade Kiti Invitrogen K370-01
10x Fastbreak Hücre Lizis Reaktif, Promega V857C
Ni-NTA Agaroz Qiagen 30210 Tamponlar için talimatları içerir
ProteoSilver Gümüş Stain Kit Sigma-Aldrich PROTSIL1-1KT
FreeZone Lyophilizer Labconco 7960041 FreeZone 12Plus
Heksafloroizopropanol (HFIP) Sigma-Aldrich 52512
Şırınga Hamilton 7657-01 250 uL
Iğne Hamilton 7780-01 26s Ölçer, Blunt sonunda çıkarılabilir iğne
Şırınga Pompası Harvard Apparatus 702208 11Plus
Dijital Kaliper Carrera CP5906 0-150 mm aralığında
Paslanmaz çelik forseps Dünya Hassas Aletler 501764 Mini Dumont # M5S
Motor Doğa Mill 7090529 12VDC, 2 rpm hız
Lineer Aktüatör Warner Elektrik 01-D024-0050-A06-LP-IP65 24VDC, 6 inç aralığında
Mikroskop Kesme Leica Microsystems Leica MZ16
Dijital microscope kamera Leica Microsystems DFC320 Yazılım: Leica Application Suite v2.8.1
Vannas makas Dünya Hassas Aletler 500260
Microtensometer Aurora Bilimsel 310C 5N Çift Mod Sistemi

Kaynaklar

  1. Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. The mechanical design of spider silks: from fibroin sequence to mechanical function. J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).
  2. Foelix, R. Biology of spiders. , Oxford University Press. New York. (1996).
  3. Vollrath, F., Knight, D. P.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Rekombinant Protein EkspresyonuProtein Safla t rmaIslak E irme ProtokolFiber Ekstr zyonuE irme Sonras GermeMekanik TestlerSDS PAGE AnaliziWestern Blot AnaliziTaramal Elektron Mikroskopisi