Ultrason ve bioluminescent görüntüleme ile intravezikal teslim Sarna ve izleme tümör büyümesinin antitümör etkileri değerlendirmek için ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Biz, ortotopik xenograft fare mesane tümörü modelinde, intravesikal teslim küçük bir aktive edici RNA (Sarna) ile mesane kanseri tedavisi için yeni bir yöntem sunmaktadır. Fare modeli inhale genel anestezi altında üretral kateterizasyon tarafından kurulmuştur. Kimyasal yanık sonra mesane glikozaminoglikan tabakası bozmaya intravezikal gümüş nitrat çözeltisi kullanılarak mesane mukozasına tanıttı ve hücrelere eklemenizi sağlar edilir. Steril su, mesane kanseri, insan KU-7-luc2-GFP hücreleri ile çok yıkamadan sonra 2 saat süreyle durmak kesesi içine kateter ile aşılanan edilir. Mesane tümörlerinin daha sonraki büyüme vivo mesane ultrasonu ve bioluminescent görüntülemede tarafından onaylandıktan ve izlenir. Tümörler daha sonra Sarna lipid nano partiküller (LNPs) formüle ile intravezikal tedavi edilir. Tümör büyüme ultrason ve biyolüminesans ile izlenir. Bu prosedür her adım, ekli video gösterilmiştir.
Protokol
Hayvan denekleri Usul Kaliforniya, San Francisco Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hücre Hazırlık
- İnsan mesane kanseri hücre hattı KU-7-luc2-GFP (Kaliper Yaşam Bilimleri, Hopkinton, MA)% 10 fetal sığır serumu ve 50 mg / ml gentamisin ile takviye edilmiş RPMI-1640 medya yetiştirilir.
- Kültürler 37 ° C'de muhafaza edilir, medya ile CO 2, her iki üç günde bir değişen 5%.
- Hücreler tripsin sindirimi ile toplandı ve bir hemasitometre ile sayıldı. 50 ul içinde 2 x 10 6 hücrelerinin tek bir hücre süspansiyonu fosfat tamponlu tuz ha....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz transkripsiyon aktivasyonu için p21 CIP1/WAF1 (p21) yükseltici hedefler LNP formüle Sarna ile tümörlerinin intravezikal tedavisi ardından bir fare ortotopik xenograft mesane tümörü modelinin kurulması için bir protokol mevcut. 2, 3 çıkan tümörler olabilir bioluminescent görüntüleme ve mesane ultrason ile doğrulandı ve izlenmelidir. Ortotopik modelleri idrar ve daha yakından endojen mesane kanseri yakın olduğunu ürotelium'un bir ortam sağlayarak periton, subkutan veya intravenöz modelleri üs.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
LCL California San Francisco Üniversitesi tarafından açılan ve Alnylam İlaç için lisans almış Sarna ile ilgili patent başvurularının bekleyen bir adlandırılmış mucididir.
Teşekkürler
Bu araştırma AACR Henry Shepard Mesane Kanseri Araştırma Bursu (09-60-30-LI) tarafından finanse edilmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar (isteğe bağlı) |
| KU-7-luc-GFP hücreleri | Kaliper | 128091 | |
| timik çıplak farelerde (nu / nu) | Simonsen Laboratuvarları | 6-7 haftalık | Sim: (NCR) nu / nu fisol |
| Ultrason ünitesi | Visualsonics | VEVO 770 | RMV-704 prob |
| Biyolüminesens ünitesi | Kaliper | IVIS Spektrum | |
| Exel safelet kateter | Balıkçı | 14-841-21 | 24G X ¾ " |
| Gümüş nitrat | Sigma | S8157 | |
| Hamilton enjektörü | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-Sarna | Alnylam İlaç |
Tablo 1. Özel reaktifleri ve ekipmanları.
Kaynaklar
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
