Tavşan diz ekleminde kıkırdak defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Bir matris üzerinde numaralı seribaşı otolog kondrosit implantasyonu tatmin edici uzun vadeli sonuçlar sağlayan eklem kıkırdağı lezyonların yeniden ve onarım için bir iyi kabul edilen bir yöntemdir. Matrix destekli otolog kondrosit transplantasyonu (MACT) bir standart ve klinik olarak kurulan implantasyon yöntem sunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Eklem kıkırdağı kendini rejenerasyon 1 için sınırlı bir kapasiteye sahiptir çünkü eklem kıkırdağı kusurları önemli bir sağlık sorunu olarak kabul edilir. Tedavi edilmeyen kıkırdak lezyonları devam eden ağrıya yol, olumsuz yaşam kalitesini etkileyen ve osteoartrit için zemin hazırlayabilir. Son on yıl boyunca, çeşitli cerrahi tekniklerin bu lezyonların tedavisi için geliştirilmiştir. Ancak, şimdiye kadar hyalin kıkırdak ile defekt kapsayan veya tatmin edici uzun vadeli iyileşme 2-4 sağlama açısından tam bir onarım elde etmek mümkün değildi. Bu nedenle, eklem kıkırdağı yaralanmaları gibi Doku Mühendisliği gibi rejeneratif teknikler için önemli bir hedef olmaya devam etmektedir. Genellikle lifli ya da fibröz kıkırdak dokusu oluşumuna yol açan diğer cerrahi tekniklerin aksine, doku mühendisliği tam olarak nakledilen hücrelerin kondrojenik potansiyel kullanarak orijinal eklem kıkırdağının kompleks yapısı ve özellikleri geri amaçlamaktadır. Recent gelişmeler rejeneratif kıkırdak tedaviler için umut verici olanaklar açtı.
Tam kat kıkırdak veya osteokondral lezyonlarının tedavisi için ilk hücre bazlı yaklaşım klinik otolog kondrosit implantasyonu (ACI) 5 öncülük Lars Peterson ve Mats Brittberg tarafından 1994 yılında yapıldı. Bugün, tekniği klinik hatta 10 ila 20 yıl implantasyon 6 sonra iyi klinik sonuçlar bakımı, diz büyük kıkırdak defektleri tedavisi için iyi kurulmuştur. Son yıllarda, otolog kondrosit implantasyonu hızlı bir ilerleme yapıldı. Hücreler daha sonra dikilmiştir edildiği bir yapay üç boyutlu kolajen matrisin kullanımı daha popüler 7-9 oldu.
MACT iki cerrahi işlemler oluşmaktadır: kondrosit toplamak için, İlk olarak, kıkırdak biyopsi t olmayan bir ağırlık taşıyan kıkırdak alanından yapılması gerekiro diz eklemi. Daha sonra, kondrosit, çıkarılan saflaştırılmış ve in vitro yeterli hücre sayısı için genişletilmiş edilmektedir. Kondrositler, daha sonra, üç boyutlu bir matris üzerine ekilir ve daha sonra yeniden implante edilebilir. Bir doku mühendisliği implant hazırlarken, çoğalma hızı ve farklılaşma kapasitesi başarılı bir doku rejenerasyonu 10 için çok önemlidir. Bir cep taşıyıcı olarak üç boyutlu bir matrisin kullanılması, bu hücresel özellikleri 11 desteklemek için düşünülmektedir.
Aşağıdaki protokol özetlemek ve kıkırdak biyopsi gelen kondrosit izolasyonu için bir teknik, bir 3D-matrix (Chondro-Gide, Geistlich Biomaterials, Wollhusen, İsviçre) üzerine in vitro ve tohumlama kendi çoğalması gösterecektir. Son olarak, bir tavşan diz ekleminin yapay olarak oluşturulmuş kıkırdak zararların içine hücre-matriks-yapıları arasında implantasyon tarif edilecektir. Bu teknik, deneysel ortamda olarak kullanılabilirkıkırdak onarım daha fazla deneyler için.
Protokol
A. Kıkırdak Biyopsi (Ameliyathane, Steril olmayan Hazırlık Odaya 1-5 Steps)
- Doğru doz ilaç edebilmek için ve ameliyat sonra ağırlık izlemek için tavşan (6 aylık Yeni Zelanda Beyaz tavşan, kadın, 3.5-4.0 kg vücut ağırlığı,) son bir kilo kontrolü yapın.
- 10 mg / kg propofole intravenöz enjeksiyonu ile anestezi neden tavşana.
- Entübasyon sonra, 1.5 mg / kg / dk propofol ve intravenöz 0.05 mg / kg fentanil ile anestezi korumak. Kapnografi, pulse oksimetre ve nabız ile anestezi izleyin.
- Bir elektrik kesme makinesi ve vakum kürk ile ameliyat olmak için diz tıraş.
- Iyice traş diz dezenfekte ve steril bir sargı ile tavşan geri ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Açıklanan cerrahi teknik yapay kıkırdak kusur içine otolog kondrosit başarılı bir izolasyon ve implantasyon izin verir. Deney düzeneği çevre kıkırdak içine implant başarılı bir şekilde entegrasyonu ile sonuçlanmıştır.
In vivo olarak 12 hafta sonra, kıkırdak kusur implant (Şekil 4) kayma gerilmesi ve hasar azaltılmış bir homojen ve sağlam yüzey, ile tamir dokusu ile doluydu. Ayrıca, implantın hiçbir hipertrofi veya kalsifikasyon görüldü. Onarım dokusu sağlıklı çevre .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sunulan protokol tavşan diz yapay olarak oluşturulmuş kıkırdak defektleri içine sonraki çoğalması ve yeniden implantasyon için otolog kondrosit izole etmek için bir 9,12,13 kurulmuş ve kolay kullanışlı bir teknik sağlar. Eklem kıkırdağı lezyonlarının yeniden ve onarım için otolog kondrosit kullanımı klinik kullanımı tatmin edici uzun dönem sonuçları 6 sağlayan zaten.
Periost hipertrofisi ve kireçlenme örneğin gibi büyük sorunlar, greft delaminasyon veya donör alan morbi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu proje Alman Araştırma Birliği (DFG, HE 4578/3-1) tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Reaktif/ekipman adı | Şirket | Katalog Numarası | Yorumlar |
| DMEM | Biochrom AG | F 0415 | |
| Kollagenaz A | Roche | 10 103 586 001 | 0.21 U/mg |
| Fetal sığır serumu (FCS) | PAN Biotech GmbH | 3702-P103009 | |
| Propofol | Fresenius Kabi | ||
| Penisilin/Streptomisin | Biochrom AG | A 2213 | 10,000 U/ml/10,000 μg/ml |
| PBS Dulbecco (1X) | Biochrom AG | L1815 | |
| Ethanol (%70) | Merck KgaA | 410230 | |
| Trypsin-EDTA %0.25/%0.02 | Biochrom AG | L2163 | Ca2+, Mg2+ içermeyen PBS içinde |
| Fentanil | Delta Select GmBH | 1819340 | |
| NaCl çözeltisi (%0.9) | Bbraun | 8333A193 | |
| Doku kültürü kapları 100 mm/150 mm | TPP AG | 93100/93150 | Büyüme alanı 60.1 mm2/147.8 mm2 |
| Doku kültürü flaskları 25/75 mm2 | TPP AG | 90025/90075 | 25 mm2, 75 mm2 |
| Santrifüj Tüpleri (50 ml) | TPP AG | 91050 | Gama sterilize edilmiş |
| Hemositometre | Brand GmbH+Co KG | 717810 | Neubauer |
| Trypan Blue Çözeltisi %0.4 | Sigma-Aldrich | L8154 | |
| Sprey pansuman (OpSite) | Smith&Nephew | 66004978 | Su buharı geçirgen |
| Chondro-GideÒ | Geistlich Pharma AG | 30915.5 | |
| Biyopsi Punch | pfm medical ag | 48351 | |
| Tissucol Duo S | Baxter | 3419627 | 0.5 ml |
Kaynaklar
- Albrecht, C., et al. Gene expression and cell differentiation in matrix-associated chondrocyte transplantation grafts: a comparative study. Osteoarthritis Cartilage. 19, 1219-1227 (2011).
- Pridie, K. H. A method of res....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
