Ex vivo olarak etiketlenmiş hücreler ile bir fare modelinde, MRI kullanılarak in vivo hücre takibi için genel bir protokol açıklar. Hücre etiketleme, görüntü alma ve işleme ölçümü için tipik bir protokol dahildir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
19, in vivo olarak F MRI iyonlaştırıcı radyasyon kullanılmadan niceliksel hücre izleme sağlar. Bu insanlara uygulanabilen bir invazif olmayan bir tekniktir. Burada, biz cep etiketleme, görüntüleme ve görüntü işleme için genel bir protokol açıklar. Burada kemirgen bağışıklık hücrelerini izleme için tipik bir fare modeli üzerinde durulacak, ancak bu teknik, hücre tipleri ve çeşitli hayvan modelleri için de geçerlidir. Bu tüm modeller alakalı olarak hücre etiketleme için en önemli sorunlar, tarif edilmiştir. Ayrıntılar MRI sistemi ve bireysel özelliklerine bağlı olarak değişir, ancak Benzer bir şekilde, önemli bir görüntüleme parametreleri listelenmiştir. Son olarak, miktar tayini için bir görüntü işleme protokolü bulunmaktadır. Bu için Çeşitlemeler, ve diğer protokol kısımları, Tartışma bölümünde değerlendirilir. Burada açıklanan detaylar prosedüre göre, kullanıcı her özel hücre tipi, hücre etiket, hayvan modeli ve görüntüleme kurulum için protokol uyarlamak gerekir. Not potokol da sürece klinik sınırlamaları karşılandığı gibi, insan kullanımı için uyarlanabilir.
Giriş
Vivo hücre izleme hücresel tedavilerin 1 optimizasyonu ve izlenmesi için gereklidir. Nedeniyle invaziv olmayan doğası, görüntüleme in vivo hücreleri izlemek için mükemmel fırsatlar sunuyor. Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG) iyonizan radyasyon bağımsız ve üstün bir görüntü çözünürlüğü ve içsel yumuşak doku kontrast sağlar. MR-esaslı hücre izleme zaten melanom hastalarında 2 dendritik hücreler takip klinik olarak kullanılmıştır. Klasik klinik MRI dokularda mobil su içinde mevcut olan 1 H çekirdeği üzerinde gerçekleştirilir. Bu, örneğin 13 ° C, 19 23, F ve Na gibi diğer aktif çekirdekler....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Not: hayvanları içeren tüm deneyler ve işlemler, ilgili etik kurallara uygun olarak yürütülen ve standart hayvan bakımı ve insani gereklilikleri ile uyumlu olmalıdır.
1.. Hücre Etiketleme (Coincubation Standart Protokolü)
- (2 ml ortam içinde) 4 mg/10 6 hücre konsantrasyonunda olgunlaşmamış DC'lerin 19 F etiket 8 ekleyin. Karıştırmak için hafifçe karıştırılır.
- DH'lerin olgunlaşma ve hasat için 3 gün önce etiketli hücreleri inkübe.
- DH'lerin toplayın ve PBS yıkama en az 3'lü tarafından aşırı etiketi çıkarın. Hücreleri saymak.
- Enjeksiyon ya da daha fazla ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada bir lenf düğümüne güdümlü 19F-işaretli hücrelerin transferini içeren bir protokol için tipik sonuçları gösterir. Şekil 2, bir TFA referans kullanarak 10 6 etiketli hücre 19F NMR spektrumunu göstermektedir. Protokolü (Şekil 3) 'de tarif edildiği gibi görüntü ayar gerçekleştirilmiştir. In vivo görüntüleme için, fare ayakları arasına yerleştirilen hücreler için kullanılan aynı etiketin sızdırmaz şekilde kapalı bir silindir içeren bir referan.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada belirtilen protokol in vivo 19F MRI hücre takibi için genel prosedür açıklanmaktadır. Tarif edilen birlikte kuluçka yöntemi rağmen, 19F madde ile hücrelerin etiketlenmesi için çeşitli protokoller mevcuttur. Bununla birlikte, ko-inkubasyon en sık kullanılan ve daha fazla transfeksiyon ajanları 6 ilavesiyle, örneğin optimize edilebilir. Gerçek hücre etiketleme protokol, hücre tipine bağlı olacaktır. Sadece anahtar etiketleme adımları burada protokolde tarif edilmek.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa etmek herhangi bir çıkar çatışmaları var.
Teşekkürler
Biz onların değerli yardım için Nadine Henn ve Arend Heerschap kabul etmek istiyorum. Bu çalışma Rejeneratif Tıp Hollanda Enstitüsü (Nirm, FES0908), AB 7.ÇP programı ENCITE (SAĞLIK-F5-2008-201842) ve TargetBraIn (SAĞLIK-F2-2012-279017), Volkswagen Vakfı hibe (tarafından desteklenen I/83 443), Hollanda Bilimsel Araştırma Örgütü (VENI 700.10.409 ve Vidi 917.76.363), ERC (Advanced Grant 269.019), ve Radboud Üniversitesi Nijmegen Tıp Merkezi (AGIKO 2008-2-4).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| REAGENTS | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | MFCD00131855 | |
| TFA | Sigma-Aldrich | 76-05-1 | |
| Ketamin (Ketavet) | Pfizer | 778-551 | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer | QN05 cm92 | |
| Ophtosan | Produlab Pharma | 2702 | göz merhemi |
| Malzeme adı | |||
| MRI tarayıcı | Bruker Biospec | ||
| NMR spektrometresi | Bruker Biospec |
Kaynaklar
- Srinivas, M., et al. Imaging of cellular therapies. Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).
- de Vries, I. J., et al. Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy. Nat. Biotechnol.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
