Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

20.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/51108

⸱

21 Nisan 2014

 ,  ,  , 
1Developmental Biology Institute of Marseille, Aix Marseille University, 2European Research Center for Medical Imaging, Campus de la Timone, 3Vesalius Research Center, KU Leuven Campus Gasthuisberg

Bu makalede

Özet

Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar.

Özet

Glioblastoma multiforme (GBM), bugüne kadar hiçbir iyileştirici tedaviler ile beyin tümörlerinin en agresif formudur.

Bu patolojinin murin modelleri dura mater-kesi sonra beyin parankiması içine glioma hücre süspansiyonunun enjekte dayanır. Hücreler Intravital iki foton mikroskopi için erişilebilir olması yüzeysel enjekte edilir ise, yüzeysel enjeksiyonlar fizyopatolojik koşullarını özetlemek için başarısız. Nitekim, enjeksiyon yolu ile kaçan çoğu tümör hücreleri parankimden mekanik kısıtlamaların yokluğunda anormal hızlı genişletmek ekstra dural alan ulaşır.

Bizim gelişmeler fokal bir glioma sfero yerleştirilmesi yerine, serebral korteks yüzeysel katmanlarında glioma hücrelerinin bir süspansiyonu enjekte değil, aynı zamanda bir ortamda yapıştırılmış bir çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk ile enjeksiyon yerinde tıkanma değil sadece oluşmaktadırding parankimi ve siyanoakrilatın ile dura mater-mühürlü. Toplamda bu önlemler, beyin dokusu içinde, tümör hücrelerinin genişleme ve fizyolojik infiltrasyonu uygulanması. Bir cam pencere skar dokusu gelişimi yokluğunda hafta içinde kronik görüntüleme izin kafatasına çimentolu ile Kranyotomi nihayet kapatıldı.

Biz glioma hücreleri, nöronlar (örn. Thy1-CFP fare) ve vasküler bir floresan boya (intravenöz enjeksiyon ile vurgulanır) arasında meydana gelen etkileşim dinamikleri intravital ile görselleştirilebilir göstermiştir floresan tümör hücreleri ile aşılanmış floresan transgenik hayvanların yararlanarak Hastalığın ilerlemesi sırasında iki foton mikroskopisi.

Minimal tehlikeye serebral ortamında mikroskobik çözünürlükte görüntünün bir tümör olasılığı nöro-onkoloji ve uyuşturucu testi alanını yararına olmalıdır cari GBM hayvan modellerinde bir gelişmeyi temsil etmektedir.

Giriş

Glioblastoma multiforme 12 aylık bir medyan sağkalım ile erişkinlerde beyin tümörü en agresif formu ve% 5, 5-yıllık sağkalım oranı olarak beliriyor. Klinik tedavi cerrahi, radyoterapi ve sık sık birlikte kullanılan kemoterapi dayanır. Ancak bu tedavilerin etkisi 1-3 palyatif kalır.

Şimdiye kadar, nöro-onkoloji çalışmaların çoğu (örneğin 4,5) bakın sadece statik bir görünüm sağlayabiliyoruz ve tümör taşıyan hayvanların büyük kohortlar gerçekleştirilen farklı zaman noktalarında kurban teknikleri güveniyor. Intravital görüntüleme göre izleme yöntemlerinin son gelişmeler glioma büyümesi ve tümör hücrelerinin ve zaman içinde aynı hayvan üzerinde kendi patofizyolojik mikro arasındaki etkileşimlerin incelenmesinde sağlar. Bu 6 ana kadar ulaşılmaz bilgi oldu seçkin parçasına yol açar. Ilgi hücrelerinde floresan etiketler ifade eden transjenik hayvanların kullanımı olabilir,Bu yazıda, tümör hücreleri ve nöronlar arasındaki örneğin belirli etkileşimleri çalışmak d.

Geçtiğimiz on yıl içinde, intravital iki-foton mikroskopi 7 (> 500 dura-mater altında mikron) temel nöro-onkoloji çalışmaları ve klinik öncesi denemeler fare beyninin derin Intravital gözlem gerçekleştirme yeteneği için 8,9 bir altın standart haline gelmiştir mikrometrik uzamsal çözünürlük 10. Kronik kafatası pencere 11, implante orthotopical hayvan modelleri intravital iki foton mikroskobu kullanarak, aynı fare 9,12 üzerinde zamanla tümör ilerlemesini takip etmek mümkündür.

Bu, daha önce yayınlanmış hayvan modellerinin en önemli dezavantajlarından biri, dura mater-hücre süspansiyonu 9,13,14 enjeksiyonundan sonra kapalı değildir gibi tümör gelişimini düzenleyen fiziksel kısıtlamaları taklit kalmamasıdır ancak bir. Glioma hücre sızabilenheterotopik birine ortotopik glioma modeli dönüştürüyor epidural boşluk.

Burada sunulan hayvan modeli, bir çapraz-bağlanmış jel hemi-dekstran boncuk ve histo-uyumlu yapıştırıcı ile dura mater-sızdırmaz ardından 200 um'lik bir derinlikte serebral kortekste floresan glioma hücrelerinin bir sferoit olması ile enjekte edilmesini kapsar . Tümör büyümesi patofizyolojik fiziksel kısıtlamaları muhafaza beyin parankiması ile sınırlandırılmıştır. Tümörün Yukarıdaki implante kronik bir cam pencere Intravital iki-foton mikroskopi için kolay bir optik erişim sağlar. Zamanla glioma büyüme takibini gerçekleştirmek ve (floresan Dekstranların vurgulanır nöronlar ve damar burada) olan mikro ile etkileşimini incelemek mümkündür ilgi hücrelerinde floresan etiketleri sentezleyen transgenik hayvanlar kullanma.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürleri laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Fransız mevzuatına uygun olarak ve 24 Kasım Avrupa Topluluğu Konseyi Direktifi, 1986 (86/609/EEC) uygun olarak yapılmıştır. Hayvanlar üzerinde araştırma Yön Départementale des Hizmetler Vétérinaires des Bouches-du-Rhône (lisans D-13-055-21) tarafından yetkilendirilmiş ve Provence Cote d'Azur n ° 14 (Proje 87-04.122.012) etik komitesi tarafından onaylandı .

1.. Sferoitlerin Hazırlık

  1. Agaroz kaplı Petri yemeklerin hazırlanması
    1. Fetal sığır serumu ile takviye edilmiş olmayan hücre kültür ortamı, 100 ml agaroz 1 g karıştırın. Bir mikrodalga fırın için (40 saniye boyunca 850 Watt, daha sonra 3 x 15 saniye, her mikrodalga oturum arasında solüsyonu ilave edin) çözeltisi kaynamaya ve agaroz tamamen çözünmesi için. Steri sağlamak için 120 ° C de 20 dakika boyunca, bu,% 1 agaroz çözeltisi otoklav. vasıflı Not: Tamamen otoklav protokolden önce agaroz çözmek için özen. İnhomojenlik küremsiler oluşumunu olumsuz yönde etkileyebilir.
    2. Bir kez otoklavdan alınır, 100 x 20 mm Petri tabaklarda% 1 agaroz çözeltisi 10 ml dökün. % 1 agaroz çözelti katılaşmasını sağlamak için oda sıcaklığında Petri-tabaklar 20 dakika bırakın.
    3. Nem elde etmek için agaroz üzerinde PBS 10 ml ilave edilir. Buharlaşmayı önlemek için parafilm ile sarılarak agaroz kaplı Petri kutularına kapağını sıkıca kapatın. Düzgün PBS tabakası ile nemlendirilir ise Petri kapları, 4 ° C 'de en fazla 2 ay boyunca saklanabilir.
  2. Sferoid kültür
    1. Bir tek tabaka olarak tavsiye edilen ortam içinde, 75 cm 2 şişe, kültüründe glioma hücreleri.
    2. Glioma hücre 2B tek tabaka ihtiva eden bir şişeye toplanan "ön şartlandırılmış ortam" 1,5 ml,% 1 agaroz kaplı Petri kabı birinden yerine PBSs.
    3. Glioma hücrelerinin 2B tek tabaka içeren şişeden gelen orta çıkarın.
    4. Yavaşça, 10 ml PBS ile tek tabaka yıkayın.
    5. Bir tripsin / EDTA solüsyonu% 0.05 'lik 2 ml ilave edilir ve 37 ° C Not şişe 4 dakika inkübe: Kuluçka süresi, kullanılan hücre hattına göre değişebilir.
    6. Yavaşça hücre süspansiyonu, floş Tiripsinin eylemi durdurmak için kültür ortamı 8 ml Not:. Hücre ölümünü artırır gibi hücre süspansiyonu hava temizlemesini dikkat edin.
    7. Steril bir şişe içinde hücre süspansiyonu 6 ml koyun.
    8. 800 rpm'de 4 dakika santrifüj şişe.
    9. Süpernatantı ve yavaşça kültür ortamının 3 ml hücre tortu askıya.
    10. Hazırlanan kaplanmış agaroz Petri kabındaki hücre süspansiyonu tohum.
    11. Arzu edilen çapta sferoidler oluşana kadar 2-3 gün boyunca bir% 5 CO2 atmosferinde 37 ° C'de Petri kabı koyun.

2.. Sferoid ve Pencere İmplantasyonu

  1. Enjeksiyon sisteminin hazırlanması
    1. 10 dakika boyunca% 70 etanol içinde sonikasyon ile temiz bir cam kılcal kısımların (çapı 1 mm). Kadar kuru kuvözde su önce yerleştirilmesi ile iki kez durulayın.
    2. Küçük bir stok hazırlamak için bir pipet çektirmesi ile birkaç temizlenmiş cam kılcal damarları çekin.
    3. Tipik olarak 300-350 mikron bir dış çapı ve 250-300 um'lik bir iç çapı: istenen boyutta bir eğimli ekstremite elde etmek için doku bir kağıt parçası üzerine ekstremite kazımayla çekilmiş kılcal ucu kırın. Bu şekil verme işlemi sırasında, oküler dereceli bir mira ile donatılmış bir Makroskop'ta kullanarak kılcal çapını kontrol eder.
    4. Iç çap kapiller dış çapını uygun plastik boru bir parça kullanarak 3 yollu bir manifolda kılcal olmayan şivli ekstremite bağlayın.
    5. Plastik Tubin kullanmag, bir Manifolddaki iki başka yollar bağlamak 25 ul mikrolitre şırınga ve histo-uyumlu mineral yağ ile dolu bir 1 ml şırınga.
    6. Mikrolitre şırınga ile 1 ml şırınga ile bir yol oluşturmak için çeşitli seçme ayarlayın. Kaldırmak mikrolitre şırınga piston ve 1 ml şırınganın pistonu iterek dışarı sızar kadar mikrolitre şırınga içine geriye madeni yağ enjekte. Bakımı tüp içinde hava kabarcıkları bırakmak için ise mikrolitre şırınga pistonu değiştirin.
    7. Kılcal ve 1 ml şırınga ile bir yol oluşturmak için çeşitli seçme ayarlayın. Tüp içinde hava kabarcıkları bırakmamaya dikkat çekerken bunun ucundan dışarı sızar kadar mineral yağı ile kılcal doldurun.
    8. Mikrolitre şırınga ile kılcal arasında bir bağlantı kurmak için manifoldu seçici ayarlayın. Mineral yağ, yaklaşık 10 ul boşaltınız.
    9. PBS çözeltisi içine kılcal ucu Dipve mikrolitre şırınga ölçer kullanarak, kılcal PBS 5ml'lik emmek. Petrol ve PBS arasındaki menisküs açıkça görülebilir olduğuna dikkat edin.
    10. Cerrahi Makroskop'ta altında uydurma bir 3 eksenli mikromanipülatör kılcal düzeltmek. Bu sistem, görsel kontrol altında enjeksiyon yerinde için kılcal hedeflemek için kullanılacaktır.
  2. Sferoid implantasyonu
    1. Hafifçe (1-1,5 dakika boyunca hava içinde% 1.5), bir indüksiyon odasında İsofluranın soluma ile fare sakinleştirici.
    2. Ketamin / Xylazine (120 mg / kg, 12 mg / kg) bir karışımı, bir intra-peritoneal enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. Anestezi genellikle hayvanın vücut sıcaklığını azaltır unutmayın. Bu 26 ° C'de bir odada cerrahi ile devam etmek ve altta yatan bir ısı kontrollü ısıtma pedi ile hayvan sıcak tutmak için tavsiye edilir.
    3. Gözlerin kurumasını önlemek için göz merhemi sürün.
    4. Hayvanın derisi tıraş.
    5. Yerkulak çubukları ve bir ağızlık ile bir stereotaktik çerçeve içinde bir hayvan.
    6. Povidon iyot (% 3 sabun, sonra% 10 çözeltisi) ile cildi temizleyin.
    7. Bir neşter ile kafa derisi ortasında uzunlamasına bir 1 cm uzunluğunda kesi olun. Makas parietal kemikler üzerinde deriyi kesip kaldırmak.
    8. Bir neşter bıçağı ile yavaşça kafatası üzerinde periost çıkarın. Cömertçe sonra çimento bağlılık için pürüzlü bir yüzey oluşturmak için kemik üstüne siyanoakrilat geçerlidir.
    9. 4 mm çaplı kranyotomi oluşturmak için bir cerrahi Makroskop'ta altında parietal kemik Matkap. Cömertçe ısınmasını önlemek için, bütün işlem sırasında penisilin (1000 U / ml) ve Streptomicin (1 mg / ml) içeren buz gibi soğuk PBS ilave edin. Forseps ve ıslak steril bir gazlı bez ile küçük kemik parçaları çıkarın. Uzak kanamalar önlemek için parietal kafatası sütür en az 1mm matkap özen gösterin.
    10. Cam pencere kapalı olacak kraniotomi sınırında ince kemik. Amaç e olanbeyin ve cam arasında maksimum temas yüzeyi ile cam pencerenin nsure daha sonra düzlemsel yerleştirme. Yavaş yavaş bir forseps kullanarak kemiği kaldırmak ve PBS çözeltisi ile maruz dura-mater temizleyin.
    11. , 5 mm çapında yuvarlak cam lamel alın alkol ile temizlenmesi ve kağıt mendil ile kurulayın. Kraniotomi için bir kapak olarak lamel kullanımı ve beynin büyük bir düz yüzeye cam ile temas alır onaylamak için deneyin. Gerekirse lamel için daha ince yan kemikleri çıkarın. Yavaşça yerine kez lamel üzerinde baskı uygulayarak eğer beyin düz sıkılmış kadar devam edin.
    12. Tekrar alkol ile lamel temizleyin, kağıt mendil ile kurulayın ve ayrı kaydedin.
    13. 26 gauge iğne ile henüz ana kan damarlarının kaçınarak kraniotomi merkezinde dura-mater bir delik yapmak. Sadece dura-mater açmak için bu adımın amacı olarak beyin dokusunda olduğu zarar için değil emin olun.
    14. Yavaşça dura mater-wi temizleyinhemorajik kan kaldırmak için PBS çözüm inci. Sfero enjeksiyon hazırlarken doku kağıt parçası ile örtün.
    15. Aşama 2.1 'de hazırlanan küremsi enjeksiyon sistemi ile, aşama 1.2' de hazırlanan Petri çanağından kılcal iç çapa (yaklaşık 200-250 um) uygun yuvarlak sfero emmek. Sferoid yaklaşık 5 ul kültür ortamı ile birlikte gelmelidir. Onun ağırlığı altında kılcallığı ucu aşağı düşmek gerekir.
    16. Kraniotomi kapak ve enjeksiyon sistemi altında hayvan konumlandırmak için kullanılan ıslak mendil kağıdı çıkarın.
    17. Bu dura-mater yapılan delik değene kadar enjeksiyon pipet indirin. Ardından, 250 um tarafından tekrar düşürmek. 30 saniye bekleyin.
    18. Yavaş yavaş kağıt mendil ince bir parça ile fazla sıvıyı dışarı pompalama sırasında mikrolitre şırınga pistonu (2-3 | il) kullanılarak, küremsi enjekte edilir. 30 saniye bekleyin ve sonra hafifçe yüzeyine doğru 50 mikron ile enjeksiyon pipet kaldırın. 30 sn ve repea tekrar bekleyinyüzeyine kadar 50 um 'lik adımlarla ile kaldırma işlemi t. Bekleme sürelerini pipet sadık kalacağına sfero çıkarma önler.
    19. Bir floresan Makroskop'ta ile beyindeki sfero varlığını teyit edin.
    20. 100-300 mikron çapında bir Petri tabağına PBS çözeltisi ile çapraz bağlanmış jel dekstran boncuk karıştırın. 1dk bekleyin ve bazı hidrate boncuk balık. Kraniotomi bitişik kemik üzerine koyun.
    21. Makroskopik denetimi altında, dura mater-açılış büyüklüğüne benzer bir çapı olan bir boncuk seçin. Forseps kullanılarak iki yarım çapraz bağlı dekstran boncuk jel kesin.
    22. Yavaşça sfero doğru dışbükey yüzü enjeksiyon deliğine bir çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk koydu. Konkav sınır çevreleyen dura mater-temas elde edene kadar yavaşça aşağı doğru sfero ve basın kaldırmak için özen gösterin.
    23. Bir cam slayt siyanoakrilat tutkal bir damla koyun; dro içine bir kürdan ucu daldırmayapıştırıcı bir miktar almak s. Çabuk yaklaşık tutkal damgası olarak bitişik dura mater-için, çapraz bağlanmış jel hemi-dekstran boncuk kenarlarını kapatırlar. Kürdan çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk yapıştırma önlemek için hızlı ve doğru hareketleri gerçekleştirmek için özen gösterin. Kurutulmuş kez görüntüleme engel değilse yaymak ve engelleyebilir tutkal aşırı kaçının. Tutkal kuru ve daha sonra PBS çözeltisi ile kraniyotomi ve çevresindeki kemik temizlemek için 2 dakika bekleyin.
  3. Pencere implantasyonu
    1. Kraniotomi yukarıdaki lamel yuvarlak 5 mm çapa koyun (2.2.12 bakınız). Örtücü camın kenarları, kraniyotomi dış de kafatası, inceltilmiş olmalıdır. Lamel kenarlarında dura mater-inceltilmiş ve kemik ile temas halinde olmalıdır. Aksi skar dokusu optik netlik geliştirmek ve engelleyebilirler dura-mater ve cam lamel arasında doğrudan bir temas olması çok önemlidir.
    2. Bir doku ile, inci PBS absorbelamel merkezinde küçük bir basınç uygularken, e bir örtücü cam, kenarları bu çözüm bu nedenle tam olarak kraniotomiye kapsamaz. Bu, kemik, cam ve beyin ilgili bölgenin tarafında birbirine yapıştırılmış sağlayacaktır.
    3. Yavaşça kemik ve lamel arasındaki sınırda siyanoakrilat uygularken, bir forseps ile lamel merkezinde küçük bir basınç muhafaza edin. Tutkal kendiliğinden PBS çözeltisi ile arayüzü kadar yayılacak. Çözüm tutkal hidrofobiklik verilen bir engel olarak hareket edecektir. Sızdırmazlık bir dakikadan daha az etkili olabilir ama o sabit kadar lamel taşımak için değil, aşırı dikkat etmelisiniz. Bu başka türlü dura mater-dolayısıyla cerrahi bir başarısızlığa yol üzerinde siyanakrilat sızıntıya neden olur.
    4. Tutkal cam üstüne yayılmış olurdu durumda aksi optik netlik azaltabilir gibi, spiral hareketler yaparak bir mikro-neşter bıçak kullanarak kaldırabilirsiniz. Cam lamel Durin kırmamaya dikkatg aşırı basınç nedeniyle prosedür.
    5. Bitişik kafatası doğru lamel kenarlarında dental çimento uygulayarak cam fiksasyon birleştirin. Kafa derisi kadar tüm maruz kafatası kapsayacak emin olun. İlave çimento kullanarak, amacın daldırma için gerekli havuzu oluşturmak için lamel etrafında yan duvarlar ördün. Diş çimento az 10 dakika içinde tedavi edecek.

3. Post-operatif Bakım ve Görüntüleme için Hazırlık

  1. Post-operatif bakım
    1. Stereotaktik çerçeve fareyi çıkarın, Deksametazon (0.2 mg / kg) ve Rimadyl pelvik bölgeler üzerinde (5 mg / kg) sc enjekte ve sıcak bir doku-yuva ile onu kafesine yatıyordu.
    2. Anestezi etkileri yok kadar hayvan izleyin. Ameliyattan sonra genel 2-3 saat içinde, fareler tamamen mobil. Hayvansal gıda ve suya kolay erişimi olduğundan emin olun. Agaroz ihtiva eden glikoz ile (hayvan sağlamak agaroz% 3, glukoz% 3).
    3. Her gün, hayvan ağırlığı izlemek ve ameliyat sonrası ilk 10d için Deksametazon (0.2 mg / kg) ve Rimadyl (5 mg / kg) sc enjekte edilir. Kaybı, orijinal ağırlığının% 15 aştığında etik hususlar için, fareler euthanize. Kafa içi basınç hayvan için, motor bozukluklara yol açan tümör boyutu artar. Bu bağımlı tümör hücre hattı ve çeşitli gecikmeler ameliyat sonrası oluşur. Özel bakım kullanılan hücre hattı ile Deneyin son nokta karakterize etmek için alınmalıdır.
  2. Görüntüleme için hazırlık
    1. Hafif bir indüksiyon odası (1-1,5 dakika boyunca hava içinde% 1.5), izofluran teneffüs ile fare sakinleştirici.
    2. Ketamin / Xylazine (100 mg / kg, 10 mg / kg) bir karışımı, bir intra-peritoneal enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. Böyle bir anestezi genellikle gözlem 45 dakika izin verir. Uzun görüntüleme oturumları gerçekleştirmek için, fare içinde İsofluranın sürekli solunması altına yerleştirilirhava (% 0.25-0.75).
    3. Gözlerin kurumasını önlemek için göz merhemi sürün.
    4. Stereotaktik çerçeve üzerinde hayvan koyun ve earbars ile kafatası engellemek.
    5. Kan damarları görselleştirmek için, bir flüoresan boya intravenöz olarak enjekte edilebilir.
    6. Penceresi kirli görünüyorsa, yavaşça ince bir bıçak ve bir doku köşesi ile enkaz kaldırarak temizlenebilir. Her zaman diş çimento ile uyumlu değildir ve bu pencerenin altındaki beyin serin gibi penceresini temizlemek için alkol kullanmayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Cerrahi protokolü (Şekil 1) gerçekleştirildiğinde, hayvanların kurban edilmesine dek hafta boyunca floresan mikroskobu ile gözlenebilir. Inflamatuar reaksiyon, bir ya da iki hafta içinde kaybolur ameliyattan sonra gözlenebilir. Tümör büyümesi floresan makroskopi ve iki foton mikroskobu (Şekil 2) dahil olmak üzere çeşitli mikroskopi teknikleri ile gözlenebilir. Burada tasvir örnek görüntüler bir floresan Makroskop'ta ve femtosaniye darbeli kızılötesi ayarlanabilir lazer ve ev-modifiy...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu yaklaşım, optik görüntüleme yöntemlerinin kullanımı gün ve haftalarda bir ortotopikal implante glioma büyüme üzerinde izlemenizi sağlar. Aynı hayvan daha sonra patoloji sırasında hemen hemen herhangi bir beyin görüntüleme yöntemi tabi tutulabilir; henüz iki-foton mikroskopi özgü hazırlık yaşayan hayvanın beyninde subsellüler çözünürlük elde etmek için eşsiz bir fırsat sunuyor. Bizim protokol glioma hücreleri hasarlı dura aracılığıyla merkezi sinir sistemine bırakabilirsiniz eğer olur gibi değil, ekstra-durally daha b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Teşekkürler

Yazarlar sıcak Dr KK Fenrich Dr MC teşekkür ederim. Amoureux, P. Weber ve yararlı tartışmalar için A. Jaouen; M. Hocine, C. Meunier, M. Metwaly, S. Bensemmane, J. Bonnardel, IBDML de hayvan imkan ve teknik destek için IBDML de PicSIL görüntüleme platformu personel personel. Bu çalışma GR, Agence Nationale de la Recherche (ANR JCJC PathoVisu3Dyn), federasyona Institut National du Kanser (INCA-DGOS-INSERM6038) hibe tarafından desteklenen federasyon burs tarafından, FD la Recherche sur le Cerveau (FRC) dökmek CR de la Recherche Médicale ve Cancéropole PACA.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
MatkapDremel (Almanya)398herhangi bir yüksek kaliteli cerrahi kemik matkabı yeterli olacaktır
Matkap çapak (#1/4 Karbür Yuvarlak Çapak)World Precision Instruments (ABD)501860 (#1/4)ayrıca Harvard Apparatus tarafından satılmaktadır
Doku makasıWorld Precision Instruments (ABD)14395
Dumont cımbız M5SWorld Precision Instruments (ABD)501764
Diş çimentosuGACD (ABD)12-565 & 12-568
SiyanoakrilatEleco-EFD (Fransa)Cyanolit 201
Filamentsiz cam kılcal damarlarClark Electromedical Instruments (İngiltere)GC100-15
Mikrolitre şırınga (25 & mikro; l)Hamilton (ABD)702
MicromanipülatorWorld Precision Instruments (ABD)Kite-R
T türetme (3 musluk - Luer kilidi)World Precision Instruments (ABD)14035-10
Stereotaktik çerçeve (fare adaptörü)World Precision Instruments (ABD)502063
Cam lamellerWarner Instruments (ABD)CS-5R (64-0700)
Çapraz bağlı dekstran jel (Sephadex) G50 Kaba 100-300 & mikro; m boncuklarSigma (Almanya)
merhemiTVM (Fransa)Öcry-jel
Floresan makroskopLeica MZFLIII (Almanya), ayrıca diğer şirketler tarafından satılmaktadır
İki foton mikroskobuZeiss LSM 7MP (Almanya)ayrıca diğer şirketler tarafından da satılmaktadır (Nikon, …)
Kızılötesi ayarlanabilir femtosaniye lazer (Maï-Taï)Spectra Physics (ABD)diğer şirketler tarafından da satılmaktadır
Göz dahil olmak üzere çeşitli tedarikçilerden temin edilebilir

Kaynaklar

  1. DeAngelis, L. M. Brain tumors. N Engl J Med. 344, 114-123 (2001).
  2. Ricard, D., et al. Primary brain tumours in adults. Lancet. 379, 1984-1996 (2012).
  3. Prados, M. D., et al. Phase III randomized study of radiotherapy plus procarbazine, lomustine, and vincristine with or without BUdR for treatment of anaplastic astrocytoma: final report of RTOG 9404. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 58, 1147-1152 (2004).
  4. Piao, Y., et al. Glioblastoma resistance to anti-VEGF therapy is associated with myeloid cell infiltration, stem cell accumulation, and a mesenchymal phenotype. Neuro Oncol. 14, 1379-1392 (2012).
  5. Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. Microglia/macrophages promote glioma progression. Glia. 59, 472-485 (2011).
  6. Studwell, A. J., Kotton, D. N. A shift from cell cultures to creatures: in vivo imaging of small animals in experimental regenerative medicine. Mol Ther. 19, 1933-1941 (2011).
  7. Ustione, A., Piston, D. W. A simple introduction to multiphoton microscopy. J Microsc. 243, 221-226 (2011).
  8. Ricard, C., et al. Short-term effects of synchrotron irradiation on vasculature and tissue in healthy mouse brain. J Synchrotron Radiat. 16, 477-483 (2009).
  9. von Baumgarten, L., et al. Bevacizumab has differential and dose-dependent effects on glioma blood vessels and tumor cells. Clin Cancer Res. 17, 6192-6205 (2011).
  10. Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat Methods. 2, 932-940 (2005).
  11. Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J Vis Exp. , 680(2008).
  12. Lathia, J. D., et al. Direct in vivo evidence for tumor propagation by glioblastoma cancer stem cells. PLoS One. 6, (2011).
  13. Madden, K. S., Zettel, M. L., Majewska, A. K., Brown, E. B. Brain tumor imaging: live imaging of glioma by two-photon microscopy. Cold Spring Harb Protoc. 2013, (2013).
  14. Winkler, F., et al. Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis. Glia. 57, 1306-1315 (2009).
  15. Van Meir, E. G. Ch. 12. CNS Cancer, Cancer Drug Discovery and Development. , Humana Press. 227-241 (2009).
  16. Ulrich, T. A., de Juan Pardo, E. M., Kumar, S. The mechanical rigidity of the extracellular matrix regulates the structure, motility, and proliferation of glioma cells. Cancer Res. 69, 4167-4174 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Ortotopik Glioblastoma ModeliKraniyal Pencere İmplantasyonuGlioma Sferoid İmplantasyonuÇapraz Bağlı Dekstran JelSiyanoakrilat SızdırmazlıkFloresan Transgenik HayvanlarTümör Progresyonu GörüntülemeVasküler Yeniden Modelleme AnaliziHücresel Mikroçevre Çalışması
Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.