Metabolik bozukluklar, insanlarda en yaygın hastalıklardan biri arasında yer alıyor. Genetik uysal bir model organizma D. melanogaster metabolizmasını düzenleyen yeni genleri tanımlamak için kullanılabilir. Bu çalışma da CO 2 üretimini ölçerek sinekler metabolizma hızı okuyan sağlayan nispeten basit bir yöntem tarif etmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Metabolik bozukluklar, insan sağlığını etkileyen sık görülen bir problemdir. Bu nedenle, metabolizmayı düzenleyen mekanizmaları anlamak çok önemli bilimsel bir iştir. İnsanlarda birçok hastalığa neden olan genler Drosophila farklı hastalıkların gelişiminde rol sinyal yolları incelemek için iyi bir model yapma, bir sinek homologunu var. Buna ek olarak, Drosophila tractability metabolizmasını düzenleyen yönelik yeni terapötik hedeflerin belirlenmesine yardımcı olması için genetik ekranlar kolaylaştırır. Bu türdeki bir süzgeçle gerçekleştirmek için sinekler metabolik durum değişiklikleri belirlemek için basit ve hızlı bir yöntem gereklidir. Genel olarak, karbon dioksit üretim substrat oksidasyon ve enerji harcaması, metabolik durumu hakkında bilgi veren iyi bir göstergedir. Bu protokolde sinekler CO 2 çıkışını ölçmek için basit bir yöntem tanıtmak. Bu teknik potansiyel metabolik hızını etkileyen genetik pertürbasyonların belirlenmesinde yardımcı olabilir.
Giriş
Biyokimyasal Krebs döngüsü karbonhidratlar, yağlar, ve CO2 üretimi proteinlerden türetilen asetat oksidasyonu ile ATP üretir. Drosophila, O 2 giriş, doğrudan CO 2 çıkışı ile ilişkilidir ve metabolizma 1 düzeyini yansıtır. Bu durumda, CO2 çıkışının ölçümü başarılı yaşlanma ve metabolizma 2-5 ile ilgili çalışmalarda kullanılmıştır. İşte laboratuar herhangi bir özel ekipman gerektirmeden kadar onsekiz örneklerinde CO 2 üretimi ölçümü sağlayan, önceden tasarlanmış deney düzeneklerini değiştirdi. Diğerleri ve daha önce müsküler distrofi ilişkili protein, distroglikan (DG) 6....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Respirometers 1. Hazırlanması
- 50 ul kılcal mikropipet sokulmasına izin verecek şekilde bir jilet ile 1000 ul pipet Kes, mümkün olduğunca düz pipet almaya çalışın.
- Pipet içine köpük bir parça koyun ve pipet aşağı itin.
- CO emici 2 küçük bir miktar ilave edin ve bir köpük ikinci bir parça içermesi.
- Mikropipet pipet ucu sokulur yerde yapıştırıcı uygulanır.
- Tutkal kuruması için bir gecede respirometredeki bırakın.
Bir respirometredeki şematik Şekil 1A'da gösterilmiştir.
Ölçüm Odası 2. Hazırlanması
- Görünür bir renklendirme neden olur bir o....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yöntem, yaban tip (Oregon R) CO 2 üretimini erkek, 18, 25 uçar ve 29 ° C ve Dg için mutantını uçan ölçülen duyarlı olduğunu göstermek için. Sinekler 25 ° C yükseltilmiş ve daha sonra ölçümden önce 5 gün boyunca deney sıcaklığına kadar kaydırılmıştır. Bu ectothermic türler için beklendiği gibi, CO2 miktarı sıcaklığında (Şekil 2) ile artış üretti. Biz geçmişte şekersiz diyet hem vahşi tip metabolik hızı azaltır ve DG mutant 7 uçar olduğunu göst.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, biz sinekler CO 2 üretimini ölçmek için ucuz ve güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Biz bu deney yapmak için hızlı, kolay ve diğer çalışmalar 1, 6, 9 ile uyum içinde olan tekrarlanabilir verilerini oluşturur bulundu. Burada özetlenen protokol kolayca herhangi bir laboratuvarın bütçe ve mevcut materyalleri uyacak şekilde modifiye edilebilir. Her bir respirometredeki inşaat sürece odacık hava geçirmez olarak kalır uyarlanabilir. Ancak, daha uzun, daha ince mikropipetler kısa olanlar üz.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Biz ifşa hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Biz araştırma için fon Max-Planck Toplum teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BlauBrand IntraMark 50 ve mikro; l mikropipetler | VWR | 612-1413 | |
| Soda Kireç | Wako | CDN6847 | |
| Eozin | Sigma | 031M4359 | Sıvının gözle görülür renklenmesini sağlayabilen herhangi bir boya kullanılabilir |
| İnce Tabaka Kromagorofisi (TLC) Geliştirme Odası | VWR | 21432-761 | Kapakla kapatılabilen herhangi bir şeffaf cam hazne |
| Anesteziz, Lull-A-Fly Kiti | Flinn | FB1438 | |
| Power Jel Tutkal | Pritt | ||
| 1 ml pipet uçları | Herhangi | ||
| Köpük | herhangi bir | ||
| plaesticine, macun, | herhangi bir | ||
| neşter | herhangi bir | ||
| cımbız, | herhangi biri |
Kaynaklar
- Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. Testing the "rate of living" model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster. J Appl Physiol. 97, 1915-1922 (2004).
- Ross, R. E.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
