Yöntem makalesi

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

DOI:

10.3791/51729

⸱

31 Temmuz 2014

 ,  ,  ,  , 
1Institute for Stroke and Dementia Research, University Hospital Munich, 2Munich Cluster for Systems Neurology (SyNergy), 3Department of Neurology, University Heidelberg, 4Imperial College, Charing Cross Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Inme ölüm üçüncü en sık nedenidir ve gelişmiş ülkelerde edinilen yetişkin sakatlık ana nedenidir. Sadece çok sınırlı tedavi seçenekleri akut fazda inme hastalarının küçük bir kısmı için mevcuttur. Mevcut araştırma yoğun yeni tedavi stratejilerinin arıyor ve daha fazla hastanın uzun bir zaman penceresinde terapötik müdahaleler için uygun olabilir, çünkü giderek inme sonrası sub-akut ve kronik faz üzerinde duruluyor. Bu gecikmiş mekanizmalar gibi inme sonrası inflamasyon, anjiyogenez, nöronal plastisite ve yenilenmesi gibi önemli patofizyolojiyi içerir. Bu mekanizmaları analiz etmek ve daha sonra yeni ilaç hedefleri değerlendirmek amacıyla, klinik önemi, düşük mortalite ve yüksek tekrarlanabilirlik ile deneysel inme modelleri aranır. Dahası, farenin bir fokal inme lezyon indüklenebilir olan ve transjenik modelleri geniş bir yelpazede olan en küçük memelilerkullanılabilir. Bu nedenle, burada kafa içi bölgesinin fare modeli, lenticulostriatal arter, sözde "pıhtılaşma modeli" elektro distalinde ile orta serebral arterin sürekli pıhtılaşma açıklar. Bu modelde elde edilen enfarktüs esas olarak korteks bulunur; beyin boyutuna göre görece enfarktüs hacmi, insan strok çoğunluğu karşılık gelir. Ayrıca, model tekrarlanabilirlik ve düşük mortalite yukarıda sözü edilen kriterleri yerine getirir. Bu videoda "pıhtılaşma modeli" inme indüksiyon cerrahi yöntemlerini göstermek ve histolojik ve fonksiyonel analiz araçları rapor.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Inme ölüm üçüncü en sık nedenidir ve gelişmiş ülkelerde 1 edinilen yetişkin bir engellilik ana nedenidir. Yaklaşık% 15, bir içi kanama 2 neden olur, bu ise akut nörolojik hastalığın yaklaşık% 80 beyin kan akışının engellenmesinden ortaya çıkan beyin iskemisi neden olur. Devam eden araştırmalara rağmen, doku plazminojen aktivatörü intravenöz şimdiye kadar ve sadece inme hastalarının bir azınlık nedeniyle 3,4 başlangıçlı inme sonrası 4.5 saat kısa onaylanmış zaman penceresine iskemik inme için sadece onaylı farmakolojik tedavidir. Düzgün beyin, damar ve inme sırasında sistemik patofizyolojik mekanizmaları arasındaki karmaşık etkileşimi modellemede hiçbir in vitro modeller, olduğu gibi, hayvan modelleri preklinik inme araştırma için gereklidir.

Bu nedenle, birkaç iskemik inme modelleri vari geliştirilmiştirtürlerinin ety. En yaygın olarak kullanılan inme modellerinden biri, bir ameliyat dikiş ipliği fılamenti geçici iç karotis arteri içine yerleştirilir ve ucu kan akımının bir stop ile sonuçlanan, orta serebral arter (MCA) kökenini tıkar kadar iletilir "filament model" bir ve subkortikal ve uzun süreli tıkanıklığı durumunda da kortikal bölgelerde 5,6 müteakip beyin enfarktüsü. Iskemik inme Fototrombotik modellerinde, ışınlanmış kortikal kabın bir fotokimyasal tıkanması, küçük lokal sınırlı 7 lezyonlar ile sonuçlanan bir photosensitizer enjeksiyonundan sonra elde edilir. Lenticulostriatal arterlerin MCA distalinde kalıcı tıkanması, arter, kendi sıkıştırma geçici bir ligasyon ile ya da sürekli pıhtılaşma 8,9 ile elde edilebilir. Bu modelde MCA oklüzyon durgun için uzak olduğu için, bu modelde elde enfarktüs ağırlıklı olarak neokorteks 10 etkilemektedirbazal ganglionlar kaynağı ulostriatal arterler.

Insan inme lezyonların çoğunluğu orta serebral arter topraklarında bulunan olduğundan, ortak inme modellerin tüm MCA oklüzyonları veya dallarının 11 birine benzeyebilir. MCA beyne kan akımını sağlayan en önemli damar biridir; Bu lateral sulcus boyunca internal karotis arter, yolları doğar nereye sonra bazal ganglionlar ve frontal, parietal ve primer motor ve duyusal korteks de dahil olmak üzere temporal lob, yanal yüzeylerine dalları ve projeler. Sağ ve sol MCA anterior serebral arterlere bağlı ve posterior Willis Circle (Şekil 1) oluştururken, posterior serebral arterler bağlanmak arterleri, iletişim.

Daha önce Carmichael ve ark. 11 tarafından bildirilen, distal Orta Serebral Ar modellenmiştir enfarktüsleridirfarelerde ışırken Tıkanıklığı (MCAO) modeli böylece kortikal MCA 11,12 bulunan insan inme lezyonlarının çoğunluğu taklit yarımkürede yaklaşık% 10-15 kapsayacak. 1981 yılında, Tamura et al. Sıçanlarda 8'de kalıcı, transkraniyal MCAO pıhtılaşma modeli tarif. Bununla birlikte, Tamura açıklanan model arterin daha uzak çatallanma aşmak için yakın bir MCA oklüzyon içeriyordu. Bu nedenle, orijinal "Tamura model" 6 "filament modeli" ile elde edilen benzer lezyonların sadece değil, aynı zamanda kortikal striatal lezyon, neden olur. Burada, farelerde transkranial elektrokoagülasyon ile kalıcı distal MCAO modeli açıklamak. Bunlara ek olarak, bu modelde, inme sonucu analiz ile ilgili histolojik ve fonksiyonel yöntem sunulmaktadır. Tüm yöntemler geliştirdik ve laboratuvarlarda kullanılan standart operasyon prosedürlerine dayanmaktadır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Etik beyanı

Bu video bildirilen deneyler deney hayvanlarında ve protokollerin kullanımı için ulusal kurallar Alman hükümet komiteleri (Regierung von Oberbayern, Münih, Almanya) tarafından onaylanmıştır uyarınca yapılmıştır. 10 haftalık, erkek C57BL/6J fareler, bu çalışmada kullanılmıştır. Hayvanlar 12 saat ışık-karanlık döngüsü dönemi ve yerel hükümet komitesi tarafından onaylanmış. Analjezi ve sedasyon protokolleri açıklanmıştır topaklandı yiyecek ve su ad libitum erişim kontrollü sıcaklığında (22 ± 2 ° C) altında yer alan, ancak farklı olabilir Diğer laboratuvarlarda kullanılan protokollerden.

1.. Malzeme ve Araçlar hazırlanması

  1. Sıcak çalışma alanını korumak ve anestezi sırasında fare vücut sıcaklığına (37 ° C) sağlamak amacıyla, ısı battaniye bağlayın.
  2. Hazırlayın otoklava makas, forseps ve pamuk, dexpanthenol göz merhemi ve dikiş malzemesi. Sulu çalışma alanı muhafaza etmek (iğne olmadan) tuzlu su çözeltisi olan bir şırınga hazırlayın. Anestezi gazı (% 70 N 2 O +% 30 O 2 + izofluran) hazırlayın.
  3. Periton boşluğu içine enjekte analjezikler: Metamizol 200 mg / kg, Carprofen 4 mg / kg ve Buprenorphin 0.1 mg / kg.
  4. Vücudun kendiliğinden hareketi kadar onu uyutmak için% 4 izofluran akış hızı ile indüksiyon odasına fare yerleştirin ve burun kılı durur.
  5. Anestezi maskesi içine burun ile yanal pozisyonda fare aktarın ve azaltmak sonra, yaklaşık bir dakika boyunca% 4 izofluran konsantrasyonu korumak ve onu Yaklaşık 1,5% olarak uygun anestezi korumak.
  6. Her iki gözde deskpantenol göz merhemi sürün.

2.. Distal MCAO Model

  1. Cerrahi alan istimal aseptik hazırlanmasından sonra küçük operasyon makas kullanarak kulak ve göz arasındaki 1 cm'lik cilt kesisi olung cilt dezenfektan.
  2. Cilt ayırın ve temporal kas lokalize.
  3. Yüksek frekans jeneratör pıhtılaşma işlevini, bipolar modunu seçin, 12 W seçin ve kablo ile elektrokoagülasyon forseps bağlayın.
  4. Tuzlu bir damla ekleyin ve tamamen kas çıkarmadan bir kas flep yapma, böylece, apikal ve dorsal bölümünde kafatası temporal kas ayırmak için forseps kullanabilir.
  5. Temporal bölgenin rostral kısmında, retro-orbital sinüs (Şekil 2A) için dorsal, saydam kafatası aşağıdaki MCA belirlenmesi. MCA bifurkasyon (nedeniyle bir anatomik, normal varyasyon) görünmüyorsa en rostral gemiyi tespit.
  6. Bir ince ve saydam bir doku (Şekil 2B) sahip olana kadar sağ MCA kolu üzerinde matkap ile kemik dışarı kafatası ve ince bazı tuzlu su ekleyin.
  7. Dikkatlice çok ince forseps ile arterin yukarıdaki kemik çekilme.
  8. Bipolar modunu seçin in 7 W. topaklaĢan de yüksek frekans jeneratörü elektrokoagülasyon ile arter proksimal ve çatallanma (Şekil 2C) distal forseps. Çatallanma nedeniyle bir anatomik varyant görünmez olduğunda, yaklaşık iki sitelerde doğru bir şekilde tespit MCA dalı (yukarıya bakınız) koyulaştırmak. 1mm mesafe. Bu, yukarıdan her iki tarafta forseps ile dikkatlice arter dokunarak, koagülasyon için forseps ile arter kavramak için gerekli değildir yeterli olan ve daha az mekanik hasara neden olur.
  9. 30 saniye bekleyin ve yavaşça nedeniyle spontan rekanalizasyonu herhangi bir kan akışı kontrol etmek için Köreldiğini forseps ile arter dokunun. Rekanalizasyonda durumda bir kez elektro tekrarlayın.
  10. Çapak delik kapsayan, kendi konumuna zamansal kas yerini değiştirin.
  11. Yara dikin ve anesteziden uyanması ve kafesine geri dönmek için 32 ° C 'de bir bakım kutusuna hayvan. Genel olarak anesth kurtarmak için hayvan için 5-10 dk sürerÇSED.
  12. Postoperatif beşinci güne kadar sonra, günde 24 saat sonra postoperatif analjezi (ip) enjekte edilir ve: Carprofen 4 mg / kg.

3.. Sham Operasyonu

Maruz arteri koagule değil hariç - kafatası ve kaldırma incelmesi dahil - yukarıda açıklanan operasyona aynı tüm prosedürleri yerine.

4. Silindir Testi 13

  1. Şeffaf akrilik cam silindir hayvan koyun (çap: 8 cm, yükseklik: 25 cm) 5 dakika boyunca iki ayna ve video kaset önünde. Bir uygun video (Şekil 3A) elde etmek üzere, iki ayna önünde ve silindirin merkezi olarak kamera ayarlayın.
  2. Bağımsız ön ayakları kullanım değerlendirilmesi için, tam arka sırasında bir ön ayakları ile silindir duvarı puan (1) temas ve tam arkasındaki sonra katta tek bir ön ayakları ile (2) iniş. Yavaş hareket veya kare-fr kullanılarak bir ön ayakları için en az 20 kişi saymakVideo Lan Client ame fonksiyonu (VLC) ücretsiz yazılım ( http://www.videolan.org/vlc ).
  3. Ameliyattan önce temel analiz için: denemeler arasında 1 saat ara ile, fare başına iki testi. Ön ayakları kullanımı sol-taraflı / sağ, bağımsız ön ayakları kullanım oranı olarak ifade edilir.
  4. MCA koagülasyon sonra: Yukarıda belirtildiği gibi denemeler arasında 1 saat ara ile, fare başına iki kez tekrar testi.

5. Perfüzyon

  1. (Ketamin ve ksilazin sırasıyla 120/16 mg / kg vücut ağırlığı ile, örneğin,) hayvanlar anestezi uygulayın.
  2. Sırtüstü pozisyonda hayvan düzeltmek ve medyan kesim ile karın boşluğu açmak. Girdap ve sternum çıkarın. Sağ atrium küçük bir kesi yapmak. Sol ventrikülde bir perfüzyon kanül yerleştirin ve yavaş yavaş 20 ml tuz ile serpmek.
  3. , Hayvan başını kesmek calvaria açın ve yavaşça kafatası tabanından beyin ayırmak.
  4. 10 dakika boyunca -40 ° C soğuk beyin izopentan içinde dondurulur. Daha sonra -80 ° C'de daha fazla analiz kadar isopentane ve mağaza beyinleri kaldırmak

6.. Enfarktüs Volumetri

  1. Cryosectioning: slaytlar üzerinde 20 mikron kalınlığında kesitler için bir kriostat üzerinde seri her 400 mikron beyinleri kesin ve -20 ° C'de slaytlar saklayın
  2. Cresyl menekşe (CV) boyama:
    1. Lekeleme solüsyonu hazırlayın: 500 ml H2O içinde CV asetat ve 0.5 g karıştırın Kristaller çözülene kadar (60 ° C) karıştırılır ve ısı. Çözüm serin edelim ve karanlık bir şişede saklayın. Her kullanımdan önce 60 ° C ve filtre ısıtın.
    2. 30 dakika boyunca oda sıcaklığında slaytlar kurutun. Daha sonra, 1 dakika boyunca% 50 etanol içinde daha sonra 1 dakika boyunca% 70 etanolde, daha sonra 15 dakika boyunca% 95 etanol içinde ve koyun.
    3. Damıtılmış su yenileme ve 1 dakika boyunca, onları yerleştirmek, 2 dakika için damıtılmış su içinde slaytlar yerleştirin. Daha sonra (60 ° C) f boyama çözeltisi içindeki koyun slaytlarya da 10 dakika ve 1 dakika için damıtılmış su içinde iki kez yıkayın.
    4. 2 dakika boyunca% 95 etanol içinde slaytlar yerleştirin. Daha sonra% 100 etanol yenileme ve 2 dakika boyunca, onları yerleştirmek, 5 dakika boyunca% 100 etanol içine yerleştirin. Daha sonra montaj ortamı ile slaytlar kapsamaktadır.
    5. Analiz:
      Slaytları taramak ve ödem düzeltmek için Swanson yöntemiyle 14 ile dolaylı enfarktüs hacmini analiz:
      (İskemik bölge) = (karşı taraftaki yan Cortex bölge) - (aynı tarafta olmayan iskemik korteks bölge) (Şekil 4A).

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nedeniyle kısa süre anestezi ve orta beyin hasarı, yaklaşık 10 dakika kendi kafeslerine transferinden sonra, tüm hayvanların serbestçe kafeste hareketli ve littermates ile etkileşim, uyanık idi. MCAO ameliyat sırasında ölüm oranı esas olarak kazara subaraknoid kanama veya yanlış anestezi bir sonucu olarak, en az% 5 idi. Inme indüksiyon sonrasında 7 günlük gözlem süresi boyunca mortalite hayvanların yaklaşık% 1-2 çok nadiren oluşur. Bu rapor için 10 hayvanların operasyon serisinin tüm hayvanların hiçbiri nedeniyle dışlama kriterleri hariç gerekiyordu, operasyon ve 7 günlük gözlem dönemi atlattı.

MCA pıhtılaşma sonrasında davranışsal açıkları silindir testi 13 analiz forepaw kullanımı asimetri tarafından değerlendirildi. Bu testte, bağımsız sol ve sağ forepaw kullanım oranı, inme indüksiyondan sonra, belirtilen zaman noktalarında ölçülmüştür ve 24, elde edilen başlangıç ​​değerleri ile karşılaştırılırMCAO'dan (Şekil 3B) önce saat. Hayvanlar silindir testi, 24 saat içinde bir araya duvar keşif için uzuv kullanım asimetri önemli bir değişiklik sunulmuştur (1.72 ± 0.326, p <0.05) ve 3 gün (1.36 ± 0.17, p <0.05), MCAO'dan sonra. Oranı 1 haftalık gözlem süresi boyunca geliştirilmiş olsa da, motorlu asimetri 7 gün MCAO'dan sonra hala anlamlı idi (1.35 ± 0.29, p <0.05), başlangıç ​​değerlerine göre.

Biz, kresil menekşe 7 gün inme indüksiyonu (Şekil 4B) sonra seri koronal beyin bölümleri ile boyanmış enfarktüs volumetrik gerçekleştirilir. Ortalama enfarktüs hacmi, böylece beynin bir yarı küresi (Şekil 4C)% 12 temsil eden, 15.4 mm3 idi. Bu inme modelin değişkenliği yaklaşık% 10 düzeyinde bir standart sapma ile son derece düşüktür. Lezyon alanı subkortikal yapıların sadece küçük sevgi ile somatosensorial ve motor korteksi kapsar. Ayrıca, enfarktüs lokalizasyonuŞematik dağıtım şeması (Şekil 4D) 'de gösterildiği gibi alan sadece minimal değişkenlik ile son derece tahmin edilebilir.

figure-results-1
Şekil 1. Willis Circle şematik. Willis arteriyel Çember internal karotid arter (ICA) dan dal yanı sıra tarafından orta serebral arter (MCA) ve anterior serebral arter (ACA) tarafından oluşturulmaktadır serebral arterler (PCA) ve arterler iletişim posterior (PComA) posterior. MCA serebral kortekse bu dalları lateral sulcus geçmektedir. Motor korteks ve somatosensoriyel korteks bölümünün büyük bir kısmını besleyen baskın MCA dal kalıcı gösterdi modeli (Acoma = Anterior iletişim arter tarafından kapatılan; BA = Basilar arter; Suca Superior serebellar =lar arter).

figure-results-2
Şekil 2,. Temporal kas ve MCA oklüzyon şematik görünümü çıkarıldıktan sonra Transkraniyal görünüşüdür. (A) Temporal kas çıkardıktan sonra kortikal arterler (8-12 haftalık farelerde) kısmen saydam fare kafatası yoluyla izlenebilir. Baskın MCA dal temporal görünümünün rostral bir parçası olarak hem de kuyruk kısmında MCA ve PCA dallanma daha fazla kortikal arterlerde tespit edilebilir. Bir çatallanma ile baskın varyasyonda baskın MCA dal (B) şematik görünüşüdür lateral temporal korteks üzerinde bir çapak delik delme ve kafatası alınmasından sonra çekilmesi. (C) siyah kareler çatallanma yakın ve uzak taraflardaki MCA pıhtılaşma siteleri temsil eder.

figure-results-3
Davranışsal açıklarının Şekil 3.. Analizi. (A) Silindir testi set-up: fare dikey bir silindir içine yerleştirilir ve aynalar bir video kamera kullanarak hareketleri tüm kayıt için arkasına konur (B) ön ayakları kullanımı asimetri silindir testi kullanılarak analiz edildi.. Bağımsız ön ayakları kullanım sağ / sol oranları MCAO'dan öncesi ve inme indüksiyon sonra belirtilen zaman noktalarında 24 saat hesaplanmıştır. = 10 N, * p

figure-results-4
Şekil 4,. Uzak MCAO ardından kriz analizi ve enfarktüs sonuç Volumetrik. Bir cresyl mor lekeli koronal sutyen (A) Temsili resim7 gün sonra, MCAO bölümünde. Sarı çizgi taraftaki (sağ) korteksin seçimi gösteren ve kırmızı çizgi ipsilateral beynin olmayan enfarkte (lekeli) korteksi seçmektir. Sol hemisfer soluk alan enfarkte doku alanını göstermektedir. (B), enfarktüs hacmi 10 beyinlerinin analizi (her biri tek tek beyni temsil eden nokta) 24 saat, 3 gün ve distal MCA koagülasyon 7 gün sonra. Yatay kırmızı çizgi. Ortalama hata çubukları, standart sapmayı temsil etmektedir göstermektedir (C) Örnek kresil menekşe her 400 um ile 7 gün MCA pıhtılaşma sonrasında boyanan koronal beyin kesitleri. (D) 7 gün sonra, MCAO'dan enfarktüslü beyin dokusunun şematik dağılımı. Her slayt bregmaya ilgili verilen bölümde (.:; Oxford University Press izniyle Liesz A ve ark, Beyin, 2011 değiştirilmiş görüntü itibaren) infarct dağıtım birikmiş bilgi (belirtildiği gibi renk kodlu) göstermektedir. bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sözde "pıhtılaşma model" - Mevcut protokol transkraniyel Elektrokoagulasyon distal, kalıcı MCAO'dan deneysel inme modeli açıklar. Bu model, bu arada deneysel araştırma inme 12 en sık kullanılan bir hayvan modellerinden biri haline gelmiştir. Diğer odak beyin iskemi modelleri ile karşılaştırıldığında, bu video gösterildiği gibi pıhtılaşma modeli eğitimli bir bilim adamı tarafından gerçekleştirilir, yaklaşık 10 dakika içinde çok kısa bir işlem süresi gibi bir avantajı vardır. Bu nedenle, kısaca anestezi kez nöro-korumanın ve inme sonuca anestezik etki 15 tanınmış olduğu için deneysel inme modelinde olumlu bir özelliktir, bu modelde de elde edilebilir. Ayrıca, daha önce Carmichael et al. 11 tarafından tarif edildiği gibi, distal sürekli MCA pıhtılaşma sonrasında elde edilen enfarktüs hacmi ve yerelleştirme insan büyük çoğunluğunda, iskemik beyin lezyonları karşılık geldiğini teyitbeyin büyüklüğü ile orantılı vuruş. İnsan inme önceki popülasyon çalışmaları ve klinik denemeler görüntüleme 16-18 dayalı olarak, hemisfer yaklaşık olarak% 5-15 arasında lezyonu olan boyutu ağırlıklı olarak küçük olan, daha az% 10 sıkışma meydana beyin ödemi ile geniş bir inme lezyonları aksine Klinik 19 okşar. Böylece, sunulan modelin elde yarımkürede yaklaşık% 12 MCA topraklarında inme lezyonlar bir translationally ilgili atım hacmi olarak kabul edilebilir. Bununla birlikte, farklı fare suşları veya kullanılan protokoller anestezi edilen lezyon hacmini 20 etkileyebilecek dikkate alınmalıdır.

Bu modelde inme indüksiyon sonrasında gözlem döneminde mortalite hemen hemen yoktur. Dışlama kriterleri ulaşan Çünkü az% 5 genel mortalite nedeniyle anestezi komplikasyonları ya da kurban çalışması sırasında ölümlerin başlıca oluşur. Düşük v garanti etmek içinoperasyon sırasında 1) Herhangi bir subaraknoid kanama: Bu modelin ve mükemmel tekrarlanabilirlik ariability, biz şu dışlama kriterleri öneririz. 2) Çalışma süresi fazla 15 dakika. Sadece geçici MCAO'dan ile Elektrokoagulasyon iki denemeden sonra MCA 3) rekanalizasyon. Ayrıca, hayvanların acı, rahatsızlık ya da hastalık davranışı kontrol etmek için MCAO (temel fizyolojik davranış, kürk görünümü ve vücut ağırlığı) sonrası günlük incelenmesi gerekir.

Çeşitli önlemler lazer benek ölçümü, manyetik rezonans görüntüleme, davranış testleri ya da histolojik analiz gibi inme sonuç analizi için uygulanan olabilir. Bu protokolde davranış analizi ve enfarktüs hacmi analiz için örnek yöntemler sağlar. Fokal iskemi sonrası beyin davranış analizi için çok sayıda deney geliştirilmiş ve deneysel inme araştırmalarda kullanılmıştır. Daha önce bu vuruş modeli 21,22 biz bizim grup tarafından kullanılan Sensorimotor disfonksiyon için uygun testlerRotarod testinde 23 re, Sabit etiket testi 24, Köşe testi 25 ve bu video gösterilmiştir Silindir testi 13,. Silindir testi sürekli uzak kalıcı MCAO'dan sonra akut faz motor asimetri gösteriyor ve aynı zamanda ardışık motor fonksiyon yeniden algılar.

Belirgin avantajları olmasına rağmen, bu inme modelinde bazı sınırlamaları dikkate alınması gerekir. İlk olarak, bir kafatası trepanasyon cerrahi yaranın temporal kas veya beyin kendisi bakteriyel enfeksiyonları kendimizi tarafından tespit edilmiştir, böylece her ne kadar hiçbir zaman, beynin peri-işletme enfeksiyonlar için potansiyel bir erişim üreten, arter pıhtılaştırmak için gerekli olan veya bu modeli kullanarak başkaları tarafından belgelenmiştir. Ayrıca, hazırlık ve koagülasyon sırasında korteks mekanik hasar ardı edilemez ama dikkatli sondaj ve çıkarma kafatasının, cerrahi sitenin sürekli nemlendirme ve minimal NE ile sınırlı olabilir cessary elektrokoagülasyon (dışlama kriterleri). Şekil 2'de gösterildiği gibi MCA ders C57BL / 6 farelerinin çoğunda bulunan, ancak biz modeli değişkenliği en aza indirmek için, normal damar tabii varyasyonları devam etmek için nasıl protokol açıklar. Ayrıca, çoklu kullanımını önermek (çatallanma durumunda 3; MCA çatallanma olmadan 2) tıkanması sitelerinde deneyimlerimiz bu modelin değişkenliği için önemli bir faktör olan MCA, kısmi rekanalizasyonda riskini en aza indirmek için.

Davranış testleri açısından, sadece küçük davranış problemleri yukarıda belirtilen davranış testleri de tespit edilebilir ve fonksiyonel yenilenmesi inme sonraki ilk hafta içinde gözlenebilir. Böylece, yüksek hassasiyet ve yetenekli ulaşan testinde 27 gibi kalitatif test parametreleri ile daha gelişmiş test sistemleri, bu modelde uzun dönem fonksiyonel sonuçları tespit etmek daha uygun olabilir.

ontent "> Nihayet, nedeniyle kendiliğinden pıhtı yok edilmesi ya da tedavisi için 28 inme hastaların önemli bir yüzdesinde görülen bir özelliktir no reperfüzyon elde edilebilir MCA, kalıcı pıhtılaşmasına. Bununla birlikte, daha önce tarif edildiği tromboembolik strok modeli 26 içerir kortikal beyin iskemi reperfüzyon ile ücretsiz inme model için seçenek. Birlikte ele alındığında, yüksek uyarlık nedeniyle minimal mortalite ve insan inme açısından karşılaştırılabilir göreli infarkt hacmi ve yerelleştirme için olası uzun süreli gözlem "pıhtılaşma modeli" ayırt Temel ve dönüşümsel inme araştırma için değerli bir model olarak.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa etmek hiçbir rakip çıkarları var.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Alman Araştırma Vakfı "Sistemler Nöroloji Münih Cluster (sinerji)" mükemmelliği küme tarafından ve AL Daimler-Benz vakıf tarafından finanse edildi

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fotoğraf Makinesi Canon Eos 500DCanonOptik: 18-55 mm; 30 kare/sn; 640 x 480 video fonksiyonu
AynaKristallform267708930 x 30 cm 
Şeffaf akrilik cam silindirH & S KunststofftechnikÇap: 8 cm,  yükseklik: 25 cm
Isıtma battaniyesiFHC DC Sıcaklık Kontrol
Cihazı İnce MakasFST15000-00
Mayonez MakasFST1410-15
ForsepsFST11616-15
PamukNOBA Verbondmitel Danz974116
Tuzlu su çözeltisiBraun131321
Bepanthen pommadeBayer
IsofluraneAbbotB506
İzofluran için anestezi sistemiDräger
Stereomikroskop ZeissStemi DV4
Elektrocerrahi cihazıERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgiegerä t
MatkapProxxonD-34343
KetaminInresa Arzneimittel GmbH
XylacineAlbrecht
5ml Şırınga Braun
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su PH: 7.4Apotheke Innestadt Uni MunchenP32799
İzopentanFluka59070
KriyostatThermo Scientific CryoStarNX70
Superfrost Plus SlaytlarTermo BilimselJ1800AMNZ
Kresil menekşeSigma Yaşam BilimleriC5042-10G
Asetik asitSigma Yaşam Bilimleri695092
Etanol %70CLN Chemikalien Laborbedorf521005
Etanol %96CLN Chemikalien Laborbedorf522078
Etanol %99CLN Chemikalien LaborbedorfETO-5000-99-1
Roti-Histokit montaj ortamıRoth6638.1
C57Bl/6J farelerCharles Nehri 000664

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Donnan, G. A., et al. Stroke. Lancet. 371, 1612-1623 (2008).
  2. Di Carlo, A., et al. Frequency of stroke in Europe: A collaborative study of population-based cohorts. ILSA Working Group and the Neurologic Diseases in the Elderly Research Group. Italian Longitudinal Study on Aging. Neurology. 54, 28-33 (2000).
  3. Hacke, W., et al. Thrombolysis with alteplase 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke. N. Engl. J. Med. 359, 1317-1329 (2008).
  4. Jauch, E. C., et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 44, 870-947 (2013).
  5. Longa, E. Z., et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20, 84-91 (1989).
  6. Engel, O., et al. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J. Vis. Exp. (47), e2423(2011).
  7. Zhang, Z., et al. A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. 17, 123-135 (1997).
  8. Tamura, A., et al. Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion. J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).
  9. Chen, S. T., et al. A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction. Stroke. 17, 738-743 (1986).
  10. Tureyen, K., et al. Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques. J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).
  11. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2, 396-409 (2005).
  12. Howells, D. W., et al. Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia. J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).
  13. Schallert, T., et al. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).
  14. Swanson, R. A., et al. A semiautomated method for measuring brain infarct volume. J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 290-293 (1990).
  15. Kitano, H., et al. Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain. J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1108-1128 (2007).
  16. Effect of intravenous recombinant tissue plasminogen activator on ischemic stroke lesion size measured by computed tomography. NINDS; The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) rt-PA Stroke Study Group. Stroke. 31, 2912-2919 (2000).
  17. Sowell, E. R., et al. Mapping cortical change across the human life span. Nat. Neurosci. 6, 309-315 (2003).
  18. Brott, T., et al. Measurements of acute cerebral infarction: lesion size by computed tomography. Stroke. 20, 871-875 (1989).
  19. Hacke, W., et al. Malignant' middle cerebral artery territory infarction: clinical course and prognostic signs. Arch. Neurol. 53, 309-315 (1996).
  20. Majid, A., et al. Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains. Stroke. 31, 2707-2714 (2000).
  21. Liesz, A., et al. Boosting regulatory T cells limits neuroinflammation in permanent cortical stroke. J. Neurosci. 33 (44), 17350-17362 (2013).
  22. Liesz, A., et al. Inhibition of lymphocyte trafficking shields the brain against deleterious neuroinflammation after stroke. Brain. 134, 704-720 (2011).
  23. Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice. Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 259, 211(1968).
  24. Bouet, V., et al. The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice. Nat. Protoc. 4, 1560-1564 (2009).
  25. Zhang, L., et al. A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia. J. Neurosci. Methods. 117, 207-214 (2002).
  26. Orset, C., et al. Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion. Stroke. 38, 2771-2778 (2007).
  27. Farr, T. D., Whishaw, I. Q. Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke. Stroke. 33, 1869-1875 (2002).
  28. Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies. Arch. Neurol. 59, 1870-1873 (2002).

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Elektrokoag lasyon CerrahisiFare nme ModeliEkstremite Kullan m AsimetrisiKristal Viyole BoyamaSilindir TestiEnfarkt Hacmi AnaliziTranskranyal Koag lasyonDistal MCA Okl zyonuHistolojik Analiz

İlgili makaleler