Düşük Bolluk Proteinler saptamak için plazma veya idrar hidrojel Nanoparçacık Hasat

Summary

Bazı patolojik biyobelirteçler, biyolojik sıvılardaki düşük konsantrasyonları, parçalayıcı enzimlerin varlığı ve büyük miktarlarda yüksek moleküler ağırlıklı proteinler nedeniyle mevcut tekniklerle kolayca tespit edilememektedir. Kimyasal olarak işlevselleştirilmiş hidrojel nanopartiküller, daha önce tespit edilemeyen biyobelirteçlerin tespit edilmesini sağlayan düşük bolluktaki proteinleri toplayabilir, koruyabilir ve konsantre edebilir.

Abstract

Roman biyomarkör keşif daha duyarlı ve özgül hastalık tespiti sağlayan çok önemli bir rol oynar. Biyolojik sıvılarda mevcut Ne yazık ki çok düşük miktardaki biyolojik göstergeler kolayca kütle spektrometrisi ya da çok düşük bir konsantrasyonda mevcut olan değişken ve çoğu zaman, albümin veya immünoglobülin gibi proteinler, yüksek miktardaki maskelendiğinden, çünkü bağışıklık ile tespit edilemez. Bait içeren poli (N-izopropil akrilamid) (Nipam) göre nanopartiküller bu fizyolojik engelleri aşmak mümkün. Bir adım olarak onlar yakalama konsantre ve vücut sıvılarından biyomarkerları korumak mümkündür. Düşük molekül ağırlıklı analitler nanopartikül çekirdeğini girip daha yüksek bir afiniteye proteini yemler etki gösteren farklı organik kimyasal boyalar tarafından yakalanır. Nanopartiküller büyüklükte birkaç emir tarafından ilgi proteinlerin konsantre edebiliyoruz. Bu konsantrasyon faktörü proteinleri içindedir böylece protein seviyesini yükseltmek için yeterlidirGeçerli Massenspektrometer, batı lekeleme ve immunoassay'lerin saptama sınırı. Nanopartiküller biyolojik sıvıların bir bolluk ile inkübe edilebilir ve albümin ve diğer yüksek molekül ağırlıklı proteinler hariç ederken, büyük ölçüde düşük molekül ağırlıklı proteinler ve peptidlerin konsantrasyonu arttırmakta edebiliyoruz. Bizim veriler, belirli bir analit konsantrasyonunun 10,000 kez amplifikasyon önceden belirlenemeyen biyolojik işaretleri tespit etmek için kütle spektrometrisi ve immün sağlayarak elde edilebileceğini göstermektedir.

Introduction

Insan genomu dizileme tamamlanmasına rağmen, önemli ilerlemeler erken evre hastalığın öngörü belirlenmesi biyomarkerlerindeki yapılmamıştır, ya da tedavi sonucu veya prognoz ¹ ile ilişkilidir. Bu ilerleme olmaması için bir nedeni olarak birçok potansiyel önemli belirteçler konvansiyonel kütle spektrometresi ve diğer biyobelirteç keşif platformlarda saptama sınırının altında bir konsantrasyonda mevcut olduğunu. Kütle spektrometrisi (MS) ve çoklu reaksiyon takip işlemi (MRM), tipik olarak, bir algılama hassasiyeti daha büyük olan 50 ng / ml olarak ise 50 pg / ml ve 10 ng / ml arasında değişen bir klinik laboratuar düşme ile ölçülen bağışıklık analitlerin çoğ....

Protocol

İnsan plazma ve idrar George Mason Üniversitesi Kurumsal Değerlendirme Kurulu onaylanan protokollerde aşağıdaki, bilgilendirilmiş yazılı onayı ile, sağlıklı gönüllü vericilerden toplanmıştır. Bağışçılar eşit ayrı ayrı analiz edildi 25 ve 42. Numune yaş arası Kafkas kadınlar ve erkekler arasında dağıtılmış ve havuza değil.

Serum veya Plazma Örneklerinin 1. Nanoparçacık İşleme

Plazma potansiyel biyo-düşük miktarda hidrojel nanopartiküller ile, çözelti içinde yakalanır. Tanecikleri, yıkandı, santrifüj ile ayrılmış plazma kuluçkaya yatırılır, ilave edilir ve çekilen proteinleri elüte edilir. Elüsyona tâbi tutulmuş p....

Results

Hidrojel Nanoparçacık Boyutu ve tekdüzeliği

Poli (Nipam-AAC) partikülleri ile kümeler içinde son derece yüksek verim ve üretkenlik ile üretilmiştir. Parçacıklar yakalama, depolama ve proteinlerin elüsyonu (en az 48 saat) için gerekli olan süre boyunca, oda sıcaklığında çok iyi bir stabiliteye sahip kolloidal ve nano partiküler çökeltme (Şekil 1) ¹¹ gözlenmemiştir. Koloidal stabilite nanopartiküller ile hızlı bir şekilde, protein / peptid alımı içi.......

Discussion

Klinik Uygunluk

Bir serum ya da plazma numunesi, bir bütün olarak organizmanın durumu ile ilgili bilgiler için zengin bir kaynak temin edebilmektedir proteinler ve peptidler, dolaşımdaki düşük bol miktarda içerir düşünülmektedir. Serum proteomik söze rağmen, klinik yarar ^{10, 11, 16, 25} biyomarkır keşif ve çeviri thwarting üç temel ve ciddi fizyolojik engeller vardır.

1. Önemli teşhis biyomarkerler kanda çok düşük bulunan (konsantrasyon.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hidrojel nanopartiküller	Ceres Nanoscience	CS003	NanoTrap ESP parçacıkları
18 MΩ-cm su			Tip 1 reaktif sınıfı su
Tris HCl, 50 mM pH 7.0	VWR	IC816116	50 mM, pH 7
Asetonitril	BDH	BDH1103-4LP	BDH'den temin edilebilir
		BDH3014	VWR'den temin edilebilir, %28-30 NH < sub>3< / sub>
Sodyum tiyosiyanat 25 mM	Acros Organics	419675000	Serum / plazma örnekleri için
Çoklu analit İdrar Reaktif Şeritleri	Siemens	2161	İdrar örnekleri için
Tris-Glisin SDS Numune Tamponu (2X)	Life Technologies	LC2676	SDS'nin çökelmesini
önlemek için RT'de kullanınKuru banyo inkübatörü (100 oC) ısıtma bloklu	Barnstead	11-715-125DQ	Kaynar su banyosu yerine kullanmayın
Azot evaporatör manifoldu	Organomasyon Ortakları	Microvap118	Serum/plazma örnekleri için
Santrifüj, açılır rotor	Sorvall	Legend serisi	50 ml tüp kapasitesi, rcf 3.700 x g
Santrifüj, sabit açılı rotor	Eppendorf	5424	1.7 ml mikrosantrifüj kapasitesi, RCF 16.000 x g
50 ml konik santrifüj ve nbsp; tüpler	Fisher Scientific	14-432-22	İdrar örnekleri için vidalı kapaklı
1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri	Eppendorf	22363204
Vorteks karıştırıcı	Fisher Scientific	50-949-755
Zamanlayıcı	Fisher Scientific	S04782	Saniye/dakika