Entomopatojenik nematodlar böcek geniş bir yelpazede parasitize toprakta yaşayan yuvarlak solucan bulunmaktadır. Sırasıyla toprak örneklerinin ve enfekte olmuş böcek kadavra, nematod geri kazanılması için böcek kızdırma ve modifiye edilmiş beyaz tuzak: iki teknikler kullanılarak topraktan bu nematod izolasyonu için kullanılan örnekleme yöntemlerini göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Toprak Örnekleme ve Entomopatojenik Nematodlar İzolasyonu (Steinernematidae, Heterorhabditidae)
Bu makalede
Özet
Özet
Entomopatojenik nematodlar (aka EPN) böceklerin geniş bir yelpazede parasitize toprakta yaşayan nematod bir grubu temsil eder. Steinernematidae ve Heterorhabditidae: Bu nematod iki aileye aittir. Şimdiye kadar, 70'in üzerinde tür Steinernematidae tarif edilmiştir ve yaklaşık 20 tür Heterorhabditidae de vardır. Nematodlar Enterobacteriaceae bakteri ile bir ortaklık mutualistik ve birlikte böcek türlerinin geniş bir yelpazede öldüren kuvvetli bir insektisid kompleksi olarak hareket ederler.
Bu yazıda, topraktan EPN toplamak için düşünülen en yaygın teknikler üzerinde durulacak. Bu sunumun ikinci bölümü böcek-kızdırma tekniği, toprak örneklerinden EPN izolasyonu için yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım, ve enfekte olmuş böcekler bu nematod kurtarma için kullanılan modifiye Beyaz tuzak tekniği üzerinde duruluyor. Bu yöntemler ve teknikler EPN kültünün başarılı kurulması için önemli adımlarLaboratuvarda ayrıca ures diğer biyolojik disiplinlerde araştırma için bir model organizma bu nematod dikkate diğer biyoanalizlere için temelini oluşturur. Bu sunumda gösterilen teknikler SP Stock laboratuar üyelerinin yanı sıra, çeşitli yazarlar tarafından tarif edilenler ile gerçekleştirilebilir ve / ya da tasarlanmış karşılık gelir.
Giriş
Birçok nematod böcekler ile ilişkili, ve ev sahibi ilişkileri yararlı gelen zararlı değişir edilir. Burada, aynı zamanda entomopatojenik nematod (veya EPN) olarak bilinen böcek patojen nematodlara, bir grup üzerinde odaklanır. Steinernematidae ve Heterorhabditidae 11,13: İki nematod aile nematod bu gruba aittir. Onların patojenik etkisi fakültatif anaerobik enterik bakteriler (Wenorhabdus bakteri heterorhabditids ile ilişkilendirmek steinernematids ve Fotorhabdus bakteri ile ilişkilendirmek) 2 ile etkileşimi tarafından kazandırılan aslında. Bakteri toprakta yaşayan tek serbest yaşayan nematod aşamasında, (ayrıca Dauer yavru, en....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1.. Toprak Örnek Toplama
- Her örnekleme site için 4 m 2 - 2 minimum alanı kapsayan düşünün.
- En az 15 cm derinlikte (Şekil 4) de toprak örnekleri toplamak.
- Bu alanda en az 5 rastgele numune almak.
- Örnek başına 3 Alt-numûnelerin al. , Çalışmanın amacı bağlı numûnelerin birleştirmek veya onları ayrı tutmak ya.
- Bir plastik torba içinde her örnek yerleştirin. Numunelerin sızmasını (Şekil 4) önlemek için çift torbalama düşünün.
- Su geçirmez bir işaretleyici ile etiket örnekleri. Vb (yerellik / alan / site adı ve GPS koordinat bilgileri dahil) Site bilgileri, tarih, habit....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Toprak Örnek Toplama
EPN Üçüncü aşama enfektif gençler toprakta (Şekil 1) ikamet bu Nematodlar 'yaşam döngüsü içinde sadece özgür yaşam evreleri vardır. Bu nedenle toprak örnekleri toplayarak bu nematod kurtarmak için çok etkili bir yöntemdir. 4 örnek alınması gereken hangi derinliğini gösteren bir toprak profili göstermektedir. Bir numunenin nem korunması nematodların hayatta kalmak için önemli bir faktördür. Dolayısıyla, plastik torbalarda.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu gösteri genellikle EPN ve simbiyotik bakteri eğitim için kullanılan tekniklerin bir dizi tanımlamak iki sunumlar ilk. Bu teknikler laboratuvarda EPN kültürlerin başarılı kurulması için önemli adımlar temsil ve aynı zamanda araştırma için bir model organizma EPN kullanır diğer biyoanalizlere için temelini oluşturur.
EPN Çeşitli zemin etütleri onların bolluk ve dağıtım mevsim, habitatlar ve coğrafi bölgelere 4, 5,9,15 arasında farklılık olduğunu göstermiştir. Gibi toprak yapısı, .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu protokollerin birçok iyileştirme katkıları için Sam-Kyu Kim, Kathryn Plichta ve Victoria Miranda-Thompson: Yazarlar Stock laboratuar geçmiş üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Biz Ulusal Bilim Vakfı desteği kabul SP Stoku (hibe IOS-0840932 ve IOS-0724978).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Galleria mellonella | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | Böcek yemleme tekniği için |
| Filtre kağıdı, 55 mm Grade 1 Selüloz | Whatman/VWR | 28450-048 | Enfeksiyon odası ve Beyaz tuzak tertibatı |
| 60 x 15 mm Petri kapları | VWR | 25384-092 | Enfeksiyon odası ve Beyaz tuzak tertibatı |
| 100 x 15 mm Petri kapları | VWR | 25384-088 | Enfeksiyon odası ve Beyaz tuzak tertibatı |
| ZIPloc plastik torbalar | Ace Hırdavat veya yerel hırdavatçı | Toprak örneklemesi | |
| Mekanik pipetleyici P1000, P200 ml | VWR | 89130-562; 89130-566 | Enfeksiyon odası ve Beyaz tuzak düzeneği |
| Pippetor uçları 1000ml, 200 ml | VWR | 16466-004; 53510 | Enfeksiyon odası ve Beyaz tuzak tertibatı |
| Bleach | Ace Donanım veya yerel hırdavatçı | Toprak örneklemesi, dezenfekte etme | |
| Sodyum hipoklorit | Ace Donanım veya yerel hırdavatçı | Toprak örneklemesi, dezenfekte % | |
| 70 Etil alochol | AAPER | 17212945 | Toprak örneklemesi, dezenfekte etme |
| Kürekler | Ace Hırdavat veya yerel hırdavatçı | N/A | Toprak örneklemesi |
| Borulu toprak örnekleyici | Accuproducts | Toprak örneklemesi | |
| Toprak sondası, uzun saplı | Nupla | PRB4T 69401 Klasik | Toprak örneklemesi |
| Ölçüm bandı | Ace Donanım veya yerel hırdavatçı | Toprak örneklemesi | |
| İşaretleme bandı, çeşitli renkler | Ace Donanım veya yerel hırdavatçı | Toprak örneklemesi | |
| Doku kültürü şişeleri | VWR | Falcon, 29185-304 | Beyaz tuzak, EPN koleksiyonu |
| Yıkama şişeleri, polietilen, geniş ağızlı | VWR | 16650-107 | Beyaz tuzak, EPN koleksiyonu |
Kaynaklar
- Bedding, R. A., Akhurst, R. J. A simple technique for the detection of insect parasitic rhabditid nematodes in soil. Nematologica. 21, 109-110 (1975).
- Boemare, N. E., Akhurst, R. A. The Genera Photorhabdus and Xenorhabdus. In The Prokaryotes. Dworkin, M., Falkow, S., Rose....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
