Fare modellerinin hipokampusunda dendritik arborizasyonun görselleştirilmesi ve ölçülmesi için iki yöntem açıklıyoruz: gerçek zamanlı ve genişletilmiş alan derinliği görüntüleme. İlk yöntem, karmaşık topografik izlemeye ve dallanma derecesinin ölçülmesine izin verirken, ikincisi dendritik ağacın hızlı bir şekilde görselleştirilmesine izin verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Hipokampal Bölgesi Dentate Gyrus dendritik arborization Değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Dendritik arborizasyonun, nöronların yapısal ve fonksiyonel bütünlüğünün incelenmesi için güvenilir bir belirteç olduğu gösterilmiştir. Gerçekten de, dendritik arborizasyonun karmaşıklığı ve kapsamı, bu hücrelerdeki sinaptik plastisite ile iyi bir şekilde ilişkilidir. Nörolojik bozuklukların bu yapılar üzerindeki zararlı etkilerini karakterize etmek ve terapötik girişimlerin etkilerini belirlemek için dendritik arborizasyonun değerlendirilmesi için güvenilir bir yönteme ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, bu yapıların nicelleştirilmesinin, karmaşık ve dinamik yapıları göz önüne alındığında zorlu bir görev olduğu kanıtlanmıştır. Neyse ki, gelişmiş görüntüleme teknikleri, dendritik arborizasyonun durumunu değerlendirmek için geleneksel boyama yöntemleriyle eşleştirilebilir ve bu da daha güvenilir ve hızlı bir değerlendirme aracı sağlar. Aşağıda, vahşi tip farelerde dendritik arborizasyonu karakterize etmek için bu görüntüleme tekniklerinin boyama yöntemleriyle nasıl eşleştirildiğine dair bir örnek verilmiştir. Bu tamamlayıcı görüntüleme yöntemleri, hipokampal bölge içinde oldukça geniş bir alana yayılan dendritik arborizasyonu kalitatif ve kantitatif olarak değerlendirmek için kullanılabilir.
Giriş
Sinaps sayısı ve yapısı, dinamik değişiklikler gelişme, yaşlanma işaretlerinden, ve çok sayıda nörodejeneratif hastalıklar 1-3 vardır. sinaptik bilgi almak ve entegre nöronların yeteneği dendritik morfoloji ve sinaptik bağlantıları dinamik değişikliklere bağlıdır. Nitekim, pozitif bir korelasyon bilişsel fonksiyonu 4 darbe hem dendritik omurga ve sinaps sayısı arasında var. Bu nedenle, bu dendritik omurga sayısında bir azalır dendritik omurga miktarının büyük ilgi isteyen, nörolojik hastalıklar, 5-7 arasında bir dizi bilişsel işlev bozukluğu ile bağlantılı olması şaşırtıcı değildir. Bununla birlikte, omurga yoğunluğu ölçümü dendritik ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Deneyler Gazi İşleri Palo Alto Sağlık Sisteminde Hayvan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylanan etik standartlara uygun olarak yapılmıştır.
1. Golgi Cox Boyama
- Beyin çıkarma ve boyama
- 1. gününde, derin eksanginasyonunun yoluyla euthanizing önce 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg xylazin ile fareler uyutmak.
- Dikkatle kalvaryumda kaldırmak ve beyin teşrih.
- İlk beyincik üstünde kavisli makas yerleştirerek, kafatasının üst deri kaldırmak ve yavaşça koku ampul doğru yönde hareket, dışa sivri makas ucu ile merkezi sulkus kalvaryumun paralel kesti. Her iki tarafta bu işlemi tekrarlayın.
- Ko....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
günümüze kadar gelen ve yeni doğan dişli granül hücrelerden kaynaklanan arborization ölçüde Golgi Cox DCX boyama (Şekil 1) kullanılarak doğal tip farelerde incelenmiştir. DCX-pozitif hücrelerin dendritik bölümleri 13-36 mikron uzunluğunda olduğu bulunmuştur. Dendritik uzunlukta normal dağılım Kolmogorov-Smirnov testi kullanılarak test edildi (D = 0,1217, p <0.01, Liliefors p <0.001; Şekil 4 ve 5).
Arborization sırasına göre parçalarını.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, iki yöntem RTI ve EDFI ile birlikte geleneksel bir boyama yöntemleri kullanılarak, olgun ve yeni doğmuş nöronlar dendritik arborization derecesini ölçmek için tanımlanmıştır. nöronların yüksek çözünürlüklü görüntülerin elde edilmesi da hipokampal nöronlar hedef terapötik stratejiler değerlendirmek için bir araç sağlar, nörodejeneratif hastalıkların zararlı etkilerini test etmek için son derece kullanışlı bir yöntem sağlar ve.
RTI yöntemi derinlemesine veri arborization ve topografya .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Bu yazı için yayın ücretleri MBF Bioscience tarafından sponsor.
Teşekkürler
Bu araştırma LuMind Vakfı, Research Down Syndrome ve Alzheimer Derneği (AS) tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir. CP, kısmen Arkansas Eyalet Üniversitesi Hemşirelik ve Sağlık Meslekleri Koleji'nden bir fakülte geliştirme hibesi ile desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Modifiye Golgi-cox boyama solüsyonu | Weill Cornell Medical College | NA | mağazası 4° C |
| 1x Gelişen Çözüm (Stok 10x) | Weill Cornell Medical College | NA | mağazası 4 derece; % |
| 30 Sükroz | Sigma | CAS # 57-50-1 | taze yapın ddH2O % |
| 0.3 Jelatin | Sigma | CAS # 9000-70-8 | NA |
| Dereceli Etanol Çözeltileri (%20, %30, %40, %50, %80) %90, %95. 100%) | Sigma | CAS 603-003-00-5 | NA |
| Ksilen | Sigma | CAS # 1330-20-7 | NA |
| DPX Orta | EMS | #13510 | NA |
| Superfrost (+) beyaz | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 71869-10 | NA |
| Lamel 22x50mm (VWR #48393-059) | VWR | # 4811-703 | NA |
| DCX Antikoru | Santa Cruz Biyoteknoloji | sc-8066 | 4 C |
| DAB | Sigma CAS | Numarası 91-95-2 & nbsp; | -20 |
| OCT | Tissue-tek | 4583 | NA |
| Tris | Sigma | CAS Numarası 77-86-1 | Na |
| ABC Lite | Vector | PK4000 | NA |
| Mikroskop | Nikon | Eclipse 80i | |
| Dijital Fotoğraf Makinesi | Nikon | DS-Ri1 | |
| 12 bit Kamera | Büyütme | 01 MBF2000RF-CLR-12 | |
| Neurolucida Sistemi | MBF Bioscience | V.10 | |
| Görüntü Kompozit Düzenleyici | Microsoft | 1.4.4.0 | |
| NIS Öğeleri | Nikon | F 3.0 | |
| Görüntü Pro Plus | Mediacy | Versin 7.00 |
Kaynaklar
- Bosch, M., Hayashi, Y. Structural plasticity of dendritic spines. Curr Opin Neurobiol. 22 (3), 383-388 (2012).
- Isaac, J. T. The synapse: center stage for many brain diseases. The Journal of Physiology. 587 (4), 727-729 (2009).
- Sheng, M., Sabatini, B. L., Südhof, T. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
