Yöntem makalesi

Bir Hidrojel Construct ve Fare Miyokard Enfarktüsü Modeli Therapeutics sunun için Tutkal Yaklaşım Fibrin tabanlı.

8.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52562

⸱

14 Haziran 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Bioengineering, University of Illinois at Urbana-Champaign

Bu makalede

Özet

Bu protokol, miyokard enfarktüslerinin kök hücre tedavisi için bir hidrojel sistemi ve fibrin bazlı bir yapıştırıcı kullanılarak zayıf hücre aşılamasının sınırlamasını hafifletmeyi amaçlamaktadır. Bu yaklaşımla, enfarktüs sonrası hücreden dokuya temas korunabilir ve bu da yaralanma bölgesindeki faydalı ajanların terapötik potansiyelini artırır.

Özet

Murin MI modeli, kardiyovasküler hastalık alanında yaygın olarak tanınmaktadır ve in vivo1 tedavilerin etkinliğini test etmek için sürekli olarak ilk adım olarak kullanılmıştır. Geleneksel, yerleşik protokol, hayvana verilen zararı en aza indirmek için daha da ince ayarlanmıştır. Özellikle, pektoral kas tabakaları basitçe kesilmek yerine alay edilir ve göğüs kafesinin bütünlüğü korunarak sternotomide kaburgaları kırmak yerine torakotome interkostal olarak yaklaşılır. Bu değişikliklerle, hayvan üzerindeki genel stres azalır.

MI'ların neden olduğu hasarı hafifletmeyi amaçlayan kök hücre tedavileri, pro-anjiyojenik ve anti-apoptotik faydaları nedeniyle yıllar içinde umut vaat etmiştir. Hücrelerin kalp yüzeyine iletilmesine yönelik mevcut yaklaşımlar tipik olarak hücrelerin ya hasarlı bölgenin yakınına, bir koroner arter içine ya da periferik kan dolaşımına2-4 enjekte edilmesini içerir. Hücrelerin hasarlı miyokarda ev sahipliği yaptığı kanıtlanmış olsa da, işlevsellik, yaralanma bölgesindeki zayıf aşılanmaları nedeniyle sınırlıdır ve bu da kan dolaşımınadifüzyonla sonuçlanır 5. Bu el yazması, hücre kapsüllü bir hidrojel yaması kullanılarak bu engelin üstesinden gelen bir prosedürü vurgulamaktadır. Yama cerrahi işlemden önce üretilir ve sol koroner arterin tıkanmasını hemen takiben yaralı miyokard üzerine yerleştirilir. Yamayı yerine yapıştırmak için, biyouyumlu dış fibrin yapıştırıcısı doğrudan yamanın üzerine yerleştirilir ve hem yamanın hem de kalp yüzeyinin kurumasına izin verilir. Bu yaklaşım, hassas bir hücre kapsülleyici terapötik yapının uygulanması için yeni bir yapışma yöntemi sağlar.

Giriş

Bir miyokard enfarktüsü (MI) büyük bir koroner arter tıkanmasına neden olduğu kalp bölgeye kan kesintisiz olarak tanımlanır. Bir MI kaynaklanan hasar nedeniyle ya da daha spesifik olarak, sol ventrikül düzgün yenmek için kalp yeteneğini azaltır fonksiyonel olmayan skar dokusu içine canlı kalp dokusunun yeniden, etmektir. Bu vuruş hacmi olarak bilinir, her kalp atışı, ve ejeksiyon fraksiyonu 6 olarak bilinen her kalp atışında kalp dışarı pompalanır, bir kan yüzdesi, gövdeye teslim edilebilir kan hacminde bir azalma ile sonuçlanır. Bunlar, diğer azalmış fonksiyonları ile birlikte, yeterli işlevini korumak için kalbin geri kalanı üzerinde gerginlik artar. Ikinci bir kalp krizi, bireylerin 7 yaklaşık% 10'unda görülen bir fenomen neden sık sık bu artış suş çok şiddetli olabilir.

Tıbbi uygulamalar tedavisinde geliştiğini ikenBir MI hemen sonrasında, hiçbir teknik, yavaş, durdurmak veya doku yeniden olumsuz yan etkilerini tersine çevirmek için geliştirilmiştir. Kök hücre terapileri da umut verici etkisine karşın, bununla birlikte, böyle bir tedavi için, olası bir yol olarak ortaya çıkmıştır kök hücreler klinik başarılı kanıtlanmamıştır. Onların eksikliklerini bir teori yararlı hücreler olumlu sonuçlar üretmek için 5 yeterince uzun enfarktüsü yerinde kalmasını sağlamak için yetersizliğidir. Bu sadece enfarktüs sitesi içine enjekte edilir hücrelerin en fazla% 24 hayatta kaldı ve zarar görmüş Alanı 1 gün sonrası teslimat 2 de kaldığı gösterilmiştir. Hücre tutma, bu konuyu ele için olası bir ihtimal hücreleri veya hasarlı siteye teslim edilebilir terapötikleri ya saklanması biyouyumlu hidrojel sistemleri geliştirmektir. Bu protokolde seçim hidrojel nedeniyle hücre encapsulation pr önceki kullanımına bir poli (etilen glikol) dimetakrilattırocedures Bununla birlikte, kapsülleme yeteneğine sahip herhangi bir hidrojel 8 kullanılabilir. yaralanmanın sitesine yama dağıtım hücreleri yatan miyokard yararlı faktörler sağlayabilir süreyi artırmak, uzun bir zaman süresi boyunca hücreden doku teması sağlar.

Yama yaklaşımına bir darboğaz kalp yüzeyine yapışan yama zorluğudur. Birçok grup teknikleri, kalp yüzeyine 9,10 için yapı kravat basit bir dikiş olmanın en yaygın çeşitli aracılığıyla bunun üstesinden gelmiş. Bu yapı, daha sert bir malzemeden imal edildiği durumlarda, bir dizi başarılı olduğu kanıtlanmıştır, ancak, yüksek su konsantrasyonu ve yama yapısının hassas doğası, bir hidrojel sistemi üzerinde çalışırken başarısız olmuştur. Bunun üstesinden gelmek için, biz pıhtı oluşumu kimyası taklit eden bir fibrin yapıştırıcı dış yapıştırıcı sistemini kullanmışlardır. Fibrin yapıştırıcı inc, çok sayıda tıbbi ameliyatlarında kullanılmaktadırBir yara dolgu 11-13 olarak ürünün biyouyumluluk vurgulayarak, dura gözyaşları, bronşiyal fistül ve kornea nakli luding. Buna ek olarak fibrin Bununla birlikte, kalp yama için bir yapışma yapıştırıcı olarak kullanımı yaygın olarak 14-17 kullanılmaz sol ventrikül kopmalar ve koroner arter by-pass ameliyatları cerrahi tedavisi de dahil olmak üzere kalp amacıyla, çeşitli kullanılmıştır. Kalp etkileşim yama sağlamak için uygun bir yapıştırma sisteminin sağlanması, harici kalp yama dışında doğrudan yerleştirilebilir, bir biyo-uyumlu yapıştırıcı Trombin ve fibrinojen sonuçları basit bir formülasyon.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Prosedür IACUC protokolü numarası 13302 ile tam uyumluluk içindedir ve hayvan kaynaklarının bölünmesi tarafından onaylandı.

1. Enstrüman Hazırlık

  1. Sterilite sağlamak için cerrahi işlem öncesinde kullanılan tüm olmayan tek kullanımlık aletleri otoklavlayın.
  2. Kullanımlar arasında bir cam boncuk sterilizatör bir oturumda birden çok kez kullanılan aletleri sterilize edin.

2. Hidrojel Hazırlık

  1. Çözülme ve hidrojel yapının oluşturulması için en az 24 saat önce plaka kök hücreler.
  2. Önceki yayınlarda 8,18 detaylı bir şekilde tarif edilmiş bir stereolitografi aparatı kullanılarak cerrahi (ya da benzer bir alet), bir gün önce, yamalar hazırlayın.
  3. Hidrojel oluşturmak için, ilk olarak istenen yama bir bilgisayar destekli tasarım (CAD) modeli oluşturmak ve stereolitografik biçimi (STL) tasarımını ihracat.
  4. Dissolvin bir ön jel çözeltisi oluşturmakSteril 1x PBS g poli (etilen glikol) dimetakrilat (PEGDMA)% 20 ağırlık / hacim solüsyonu elde etmek için. Aynı zamanda, foto-başlatıcı 1- [4- (2-hidroksi-etoksi) -fenil] -2-hidroksi-2-metil-1-propan-1-on, DMSO içinde çözülür. / 0.5 hacimce% nihai olarak PEGDMA çözeltisine foto-başlatıcı ekleyin. Doğrudan çapraz bağlama öncesi hücrelerin istenen yoğunlukta 100 ml. Not: hücre / ml önerilir 6 10 x -2.0 5 10 x 2.0 arasında bir hücre yoğunluğuna.
  5. SLA platformun ortasında bir çanak içine önceden jel çözümü Pipet ve önceden yüklenmiş STL formatlı tasarımı ile SLA yazılımını çalıştırın.
  6. Aletinden yamalar çıkarın ve Dulbecco modifiye edilmiş Eagle ortamı,% 5 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş (DMEM), 100 U / ml penisilin hidrojeller göre O / N inkübe ve hücreler, ayarlamak için 100 mg / ml streptomisin izin vermek için yama içinde çevreye.

3. Hayvan Hazırlama ve Sözlü intubatiüzerinde

  1. Onların kafes arkadaşları ile onların tımar alışkanlıkları ve etkileşimleri belirlenen hayvan, sağlık durumunun iyi olduğundan emin olmak için prosedür öncesinde her fare değerlendirin. Not: Bayan 8-10 haftalık C57BL / 6J fareler bu işlem için kullanılan, ancak, herhangi bir fare yaş ve tipi kullanılabilir.
  2. Bir anestezik odasına hayvanları yerleştirin ve 1 L / dk O 2 desteği ile% 5 isofluorane maruz. Ayak tutam refleks ile anestezi düzeyini izleyin.
  3. Hayvan düzgün uyuşturulduktan sonra, tartmak ve entübasyon standı üzerine koyun.
  4. Hayvanın göğüs boşluğuna doğru bir ışık kaynağı yönlendirin ve ses tellerini laringeal yüzeyini geri çekin ve ortaya çıkarmak için forseps kullanabilir. Dikkatle ses tellerinin arasında 20 G angiocath rehberlik ve sorunsuz trakea içine yerleştirin. Kateter küçük hayvan ventilatöre bağlı bir kez göğüs boşluğunun mekanik hareketi ile uygun ekleme algılar.
  5. Inci havalandırma ayarlarını yapınüreticinin yönergelerine göre hayvanın e ağırlığı.
  6. Entübe sonra hipotermi önlemek için ısıtma pedi üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin. Isıtma yastığı 40 ° C'yi aşmaması emin olun. Gerekirse, yanık şansını en aza indirmek için hayvan ve ısıtma yastığı arasında bir bariyer yerleştirin.
  7. Bir epilasyon kremi kullanılarak cerrahi bölgeden saç çıkarın. Doğru sterilizasyon sağlamak için Betadin ve% 75 etanol 3 alternatif scrubs tarafından siteyi sterilize edin. Sadece cerrahi siteyi açığa ve işlem sırasında kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem yerleştirmek için bir örtü yerleştirin.

4. Cerrahi Prosedür

  1. torakotomi nedenle, sternum uzunluğu çalışan sternum sol, bir cilt kesisi yaklaşık 1 cm yapmak, hayvanın sol tarafında yapılır.
  2. Iki adımda yatan göğüs kafesi arasında kas tabakası ayrı forseps kullanın. Bir Deline'a gözlemleyinhayvan pektoralis majör kaslarını gösteren ating hattı. Altta yatan dış eğik kas ayırmak ve mediale geri, biraz bu kası kaldırın. Ardından, aynı şekilde yatan göğüs kafesi dış oblik kas özgür ve ikinci, üçüncü ve dördüncü kaburga bir unobscured görünüm sağlayan, yanal geri çekin.
  3. Üçüncü ve dördüncü kaburga arasındaki torakotomi gerçekleştirin. Yavaşça dördüncü kaburga kaldırın ve üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki göğüs boşluğunu açmak için bir cauterizer kullanın. Ayrıca boşluğu açmak ve kalp maruz Ekartörleri yerleştirin.
  4. Kalbin ince perikard rüptürü için forseps kullanabilir.
  5. Bir 8-0 monofilament naylon sütür ile sol koroner arter Arter. Doğrudan sol atrium alt ucu altında, yaklaşık 4 mm kalbin apeks gelen dikiş yerleştirin. Ventriküler miyokard bir blanching ve Sutu sonra sol atrium boyutunda bir artış ile doğru dikiş yerleştirme belirleyinYeniden bağladı edilmiştir.

5. Patch Yerleştirme ve Tutkal

  1. Kullanılana kadar CO2 şartları, 37 ° C'de tutun yamalar ve% 5.
  2. Yavaşça düz uçlu spatula ile yama kaldırın ve yavaşça infarktüsü yerinde, kalbin bir yüzeye yerleştirin.
    Not: Sol ventrikül kaymasını önlemek için, yama hafifçe spatula ya da forseps bir çift ucu kullanarak kişiyi koruyarak yerinde tutulabilir.
  3. Trombin, fibrinojenin: 1 oranını 4 karıştırılarak tutkal hazırlayın. Bu hazırlık başladıktan sonra genellikle 1 dakika içinde, kalınlaştırmak başlayana kadar tekrarlanan pipetleme çözüm karıştırın.
  4. Çözelti viskozitesi istenen seviyeye ulaştığında, hızla yama yüzeyine yaklaşık 10 ml aktarın. Not: fibrin yapıştırıcı pıhtılaşma zamanı hızlıdır, tutkal verimli transferi için küçük bir fırsat penceresi sağlar.

6. Dikiş

  1. 6-0 monofilament naylon dikiş kullanarak tüm kapanış sütür gerçekleştirin.
  2. 3-4 ayrı kesintiye dikişlerle kaburga katmanı kapatın.
  3. Interkostal katmanın tam kapanmasından önce, kapatma işlemi tamamlandıktan sonra göğüs boşluğuna tahliye ve uygun intraplevral basınç yeniden kurmak için kesi içine PE-10 kanül yerleştirin.
  4. 3-4 ayrı kesintiye dikişlerle göğüs kasları kapatın.
  5. Sürekli dikiş ile cilt katmanı mühür.
  6. Tam kapatılması sonrasında, kanül sonuna 1.0 ml şırınga takmak ve göğüs boşluğunu tahliye için kullanabilirsiniz.
  7. Dikiş sitesini güçlendirmek için kesi sitesine doku yapıştırıcısı sürün.

7. Post-cerrahi tedavi

  1. Fareler buprenorfin (0.05-1.0 mg / kg) ve deri altından hemen önce canlanma koroner ligasyon ve en az 20 dakika, aşağıdaki karprofen (2.2 mg / kg) enjeksiyonu ver. Her iki ilaç da ameliyattan sonra 6-8 saat yönetmeVe sonra ağrı ve sıkıntı kontrolü üç gün süreyle günde iki kez vermek.
  2. Sürekli ilk 4 saat aşağıdaki ameliyat için bilinçli ve her saatte kadar hayvanları izlemek. Analjezik ikinci bir dozunu vermek için ikinci bir sağlık kontrolü ameliyat (2-4 saat sonra) gecesini gerçekleştirin.
  3. Hayvanlar kararlı görünen kadar prosedürü izleyerek ikinci günden sonra her gün hayvanları izleyin.

Kalp Fonksiyonu ve Histoloji 8. Analiz

  1. MI Aşağıdaki hasarın boyutunu belirlemek için prosedür izlenerek fareler 4 hafta echocardiographs gerçekleştirin.
  2. Inhalasyon anestezi indüksiyonu için bir anestezi odasının içinde% 4-5 izofluran ile fareler anestezi ve bakım anestezi için yüz maskesi aracılığıyla daha sonra% 2 izofluran.
  3. Bir tüy dökücü krem ​​ile görüntüleme alanını temizleyin ve kalpte bir 2B M-mod ekokardiyografi tarama elde etmek için küçük bir hayvan ultrason kullanımı ve fonksiyonel parametreler asso kayıtonunla anılmaktadır.
  4. Daha sonra 24 saat boyunca bir% 10 formalin çözeltisi içinde hayvanlar ve yerden kalpleri toplamak, bir karbon diyoksit odasında fareler öldürülür. 24 saat sonra,% 70 etanol kalpleri aktarmak ve doku işlenene kadar 4 ° C'de tutun.
  5. Kalpleri işlemek ve parafin bloklar onları gömmek.
  6. Apeks başlayan ve atrium biten, kalbin ventriküler bölgesi boyunca 5 mm bölümleri kesin.
  7. Leke Masson trikrom ve hematoksilen ve standart protokoller kullanılarak eozin leke hem dilimleri kesitli.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Cerrahi işlem sırasında, sol koroner arter ligasyonu bir Tıkalı arterin alt beyazlatma işaretlenmiş tarafından tespit edilebilir. Düğüm atarak önce bir test olarak, dikiş uygun yerde olup olmadığını kontrol etmek için kısa bir süre sıkılır olabilir. Ayrıca, düzgün yenmek için sol atrium yeteneği neredeyse anlık azalma arter sonuçlarının tıkanması beri, sol atrium sisteminde kan geri akışının cevaben büyütmek olacaktır.

M-mod ekokardiyografi ölçümleri sonrası enfarktüs kas yeniden göstergesid...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Fare MI modeline Bu yaklaşımla, diğer kemirgen MI teknikleri ile ilişkili olmayan miyokard alanlara zarar en aza indiren bir sistem geliştirdik. Bu alanlar trakeostomi yol açtığı hasarı, kas tabakasının kesilmesi, ve göğüs boşluğunu maruz kaburga kırılması sayılabilir. Biz bu değişikliklerin cerrahi işlem sırasında olduğu gibi, kaburga ve kas tabakaları dahil, önemli yapıların çok sağlam tutmak için alınan bakım genel cerrahi sonuç sayesinde artırmak inanıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma ABD Ordusu Grant (W81XWH-08-1-0701) ve Carle Vakfı Hastanesi'ne Kardeşliği tarafından finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Harvard Model 687 Fare VantilatörüHarvard Aparatı55-0001
Inintech Biosciences LLC Kuru Cam Boncuk SterilizatörüFisher ScientificNC9531961
Leica MZ6 cerrahi mikroskopLeica
Koter KitiİkizlerGEM 5917
Hassas Forseps - 0,4 mm Uçlar Açılıİnce Bilim Araçları11063-07
Agricola Ekartör - 3,5 cm Yayılmışİnce Bilim Aletleri17005-04
Yaylı Makas - 2,5 mm Bıçaklar Düzİnce Bilim Aletleri15000-08
Castroviejo İğne Tutucu - Kilitli Tungsten Karbür 14 cmGüzel Bilim Aletleri12565-14
İris Makası - Narin Düz 10,5 cmGüzel Bilim Aletleri14060-10
8-0 monofilament sütürEthicon8730P
6-0 İpek sütürEthicon639G
TrombinSigmaT7009
FibrinojenSigmaF3879
Vetbond Doku Yapıştırıcısı3M1469SB

Kaynaklar

  1. Kolk, M. V., et al. LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2009).
  2. Li, Y., Yao, Y., Sheng, Z., Yang, Y., Ma, G. Dual-modal tracking of transplanted mesenchymal stem cells after myocardial infarction. International journal of nanomedicine. 6, 815-823 (2011).
  3. Nagaya, N., et al. Intravenous administration of mesenchymal stem cells improves cardiac function in rats with acute myocardial infarction through angiogenesis and myogenesis. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 287, H2670-H2676 (2004).
  4. Wang, J. S., Shum-Tim, D., Chedrawy, E., Chiu, R. C. The coronary delivery of marrow stromal cells for myocardial regeneration: pathophysiologic and therapeutic implications. The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 122, 699-705 (2001).
  5. Cashman, T. J., Gouon-Evans, V., Costa, K. D. Mesenchymal stem cells for cardiac therapy: practical challenges and potential mechanisms. Stem cell reviews. 9, 254-265 (2013).
  6. Sutton, M. G., Sharpe, N. Left ventricular remodeling after myocardial infarction: pathophysiology and therapy. Circulation. 101, 2981-2988 (2000).
  7. Smolina, K., Wright, F. L., Rayner, M., Goldacre, M. J. Long-term survival and recurrence after acute myocardial infarction in England, 2004 to 2010. Circulation. Cardiovascular quality and outcomes. 5, 532-540 (2012).
  8. Chan, V., Zorlutuna, P., Jeong, J. H., Kong, H., Bashir, R. Three-dimensional photopatterning of hydrogels using stereolithography for long-term cell encapsulation. Lab on a chip. 10, 2062-2070 (2010).
  9. Kai, D., et al. Stem cell-loaded nanofibrous patch promotes the regeneration of infarcted myocardium with functional improvement in rat model. Acta biomaterialia. 10, 2727-2738 (2014).
  10. Serpooshan, V., et al. The effect of bioengineered acellular collagen patch on cardiac remodeling and ventricular function post myocardial infarction. Biomaterials. 34, 9048-9055 (2013).
  11. Cavallo, L. M., Solari, D., Somma, T., Savic, D., Cappabianca, P. The Awake Endoscope-Guided Sealant Technique with Fibrin Glue in the Treatment of Postoperative Cerebrospinal Fluid Leak After Extended Transsphenoidal Surgery: Technical Note. World neurosurgery. , (2013).
  12. Chung, H. W., Mehta, J. S. Fibrin glue for Gundersen flap surgery. Clinical Ophthalmology. 7, 479-484 (2013).
  13. Dunn, C. J., Goa, K. L. Fibrin sealant: a review of its use in surgery and endoscopy. Drugs. 58, 863-886 (1999).
  14. Chi, N. H., et al. Cardiac repair achieved by bone marrow mesenchymal stem cells/silk fibroin/hyaluronic acid patches in a rat of myocardial infarction model. Biomaterials. 33, 5541-5551 (2012).
  15. Erb, M. A., Claus, T., Hartrumpf, M., Bachmann, S., Albes, J. M. The use of Tachosil surgical patch or fibrin glue in coronary artery surgery does not affect quality of anastomosis or provoke postoperative adhesions in pigs. European journal of cardio-thoracic surgery : official journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery. 36, 703-707 (2009).
  16. Okada, K., et al. Surgical treatment for rupture of left ventricular free wall after acute myocardial infarction. Interactive cardiovascular and thoracic surgery. 4, 203-206 (2005).
  17. Simpson, D., Liu, H., Fan, T. H., Nerem, R., Dudley, S. C. A tissue engineering approach to progenitor cell delivery results in significant cell engraftment and improved myocardial remodeling. Stem Cells. 25, 2350-2357 (2007).
  18. Jeong, J. H., et al. Living' microvascular stamp for patterning of functional neovessels; orchestrated control of matrix property and geometry. Advanced Materials. 24, 58-63 (2012).
  19. Wu, X., Ren, J., Li, J. Fibrin glue as the cell-delivery vehicle for mesenchymal stromal cells in regenerative medicine. Cytotherapy. 14, 555-562 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Hidrojel Yama UygulamasFibrin Tutkal Yap masTorakotomi Prosed rSol Koroner Arter LigasyonuHistolojik AnalizK k Hayvan EkokardiyografisiH cre Enkaps lasyon TedavisiCerrahi S t r KapatmaPostoperatif Analjezi Uygulamas

İlgili makaleler